Павел и алена совместимость: Совместимость Алены и Павла

Павел и алена совместимость: Совместимость Алены и Павла

Содержание

Совместимость Алены и Павла

Женское имяАвгустинаАврораАгатаАглаяАгнияАгриппинаАдаАделаидаАделинаАдельАделяАдиляАдрианаАзаАзизаАидаАишаАйлинАкилинаАксиньяАланаАлевтинаАлександраАленаАлесяАлинаАлисаАлияАллаАлсуАльбинаАльфияАмалияАмелияАминаАмираАнастасияАнгелинаАнжелаАнжеликаАнисияАнитаАннаАнтонинаАнфисаАполлинарияАриаднаАрианаАринаАрсенияАсяАурелияАфинаБеатаБеллаБертаБогданаБоженаВалентинаВалерияВарвараВасилинаВасилисаВенераВераВероникаВеселинаВестаВикторияВиолеттаВиринеяВитаВиталинаВладаВладиславаВладленаГабриэллаГалинаГлафираГликерияГузельГульназДанаДаниэлаДаринаДарьяДжулияДианаДинаДинараДоминикаЕваЕвангелинаЕвгенияЕвдокияЕвлалияЕвстолияЕкатеринаЕленаЕлизаветаЕсенияЕфросиньяЖаннаЖасминЗараЗаринаЗемфираЗинаидаЗлатаЗояИваннаИветтаИдаИзабеллаИларияИлонаИнараИнгаИннаИраидаИринаИрмаИяКалерияКамиллаКапитолинаКаринаКаролинаКатаринаКираКириллаКлавдияКлараКристинаКсенияЛадаЛарисаЛаураЛейлаЛеониллаЛеяЛианаЛидияЛилианаЛилияЛинаЛиндаЛияЛолитаЛуизаЛюбовьЛюдмилаЛюцияМагдалинаМадинаМайяМаликаМаргаритаМарианнаМаринаМарияМартаМарфаМарьямМарьянаМатильдаМатренаМеланияМелиссаМилаМиланаМиленаМилицаМираМирославаМирраМияМоникаНадеждаНатальяНеллиНеонилаНикаНикольНинаНоннаОксанаОлесяОливияОльгаОфелияПавлинаПелагеяПолинаПрасковьяПульхерияРадаРадмилаРаисаРахильРаянаРегинаРенатаРиммаРозаРоксанаРусланаРуфинаСабинаСабринаСаидаСаломеяСамираСараСафинаСветланаСерафимаСимонаСнежанаСоняСофияСтаниславаСтеллаСтефанияСюзаннаТаисияТамараТамилаТатьянаТеонаТеяУльянаУстиньяФаинаФаридаФатимаФевронияФеклаФелицияФотинияЧулпанЭвелинаЭлеонораЭлизаЭлинаЭллаЭльвираЭльзаЭльмираЭмилияЭммаЭрикаЭсмеральдаЮлианаЮлияЮнаЮнонаЮстинаЯдвигаЯнаЯрославаЯсмина

Мужское имяАаронАвдейАдамАдрианАзатАифалАкакийАкимАлександрАлексейАлиАлимАльбертАльфредАнатолийАндрейАнтонАполлонАрамАристархАркадийАрманАрменАрсенийАрсланАртемАртурАрхипАфанасийАхмедАшотБогданБорисБулатВадимВалентинВалерийВарфоломейВасилийВениаминВикторВиталийВладимирВладиславВладленВольдемарВсеволодВячеславГавриилГарриГеворгГеннадийГенрихГеоргийГерманГлебГордейГригорийДавидДамирДаниилДаниярДементийДемидДемьянДенисДжамалДмитрийЕвгенийЕгорЕлизарЕлисейЕмельянЕремейЕфимЗахарИбрагимИванИгнатИгорьИисусИлларионИльдарИльхамИльяИльясИннокентийИосифИраклийИскандерИсмаилКамильКаренКириллКлимКонстантинКристианКузьмаЛаврентийЛевЛеонЛеонардЛеонидЛеонтийЛукаЛукьянМайМакарМаксимМаксимилианМаликМансурМаратМаркМартинМатвейМиланМиронМирославМитрофанМихаилМстиславМуратНазарНаильНатанНесторНикитаНиколайНилОлегОскарОстапПавелПетрПлатонПотапПрохорРавильРадикРадомирРамильРатмирРафаэльРашидРенатРифатРичардРобертРодионРоланРоманРостиславРусланРустамРушанСавваСавелийСамвелСамсонСамуилСвятославСевастьянСеменСерафимСергейСимонСоломонСпартакСтаниславСтепанТагирТарасТеодорТигранТимофейТимурТихонТрофимФаридФедорФеликсФилиппФомаХаритонШамильЭдгарЭдуардЭльдарЭмильЭммануилЭрастЭрикЭрнестЮлианЮлийЮрийЯковЯнЯромирЯрополкЯрослав

Совместимость в любви и браке 24%

Алена и Павел плохо совместимы в любви. В силу противоположности характеров эти люди легко притягиваются друг к другу. Мужчине интересна эта реалистичная и эмоциональная женщина. Он стремится к знакомству с ней. Однако после плотного общения резко меняет о ней свое мнение. Его отталкивают ее капризность и своенравность. Женщину привлекает этот мечтательный и общительный мужчина. Но после нескольких свиданий она осознает, что в его мире иллюзий ей нет места. Разочарование толкает партнеров к расставанию.

Эти люди редко создают семью. Их брак в большинстве случаев несчастливый. Супруга не может смириться с тем, что муж пропадает в шумных компаниях. Своими скандалами она приближает развод, который часто наступает после нескольких лет брака.

Секс

В постели эти люди забывают о проблемах. Женщина любит соблазнять и удивлять партнера, чтобы у него и мысли не было пойти налево. Благодаря ее тяге к экспериментам пара никогда не скучает. Мужчина отличается инициативностью и желанием доминировать в любовных играх. Партнерша не всегда готова подчиняться, что раздражает избранника.  

Дети

Дети могут существенно продлить период существования этой пары. Они вынуждают своих родителей мириться с недостатками и давать друг другу шансы, чтобы начать семейную жизнь с чистого листа. Женщина становится хорошим педагогом, который учит ребенка отстаивать свое мнение, противостоять злу и бороться с несправедливостью. Когда этого требует ситуация, она может нагрубить, в чем после раскаивается и пытается загладить свою вину. Мужчина сильнее всего беспокоится о здоровье наследников. Он водит их в спортивные секции, покупает полезные продукты, консультируется с хорошими врачами по поводу их лечения независимо от того, как складываются отношения с их матерью.

Как улучшить совместимость в любви и браке

Не доверяйте первому впечатлению, которое сложилось об этом человеке. Узнайте его получше, и лишь потом делайте выводы.

Женщине необходимо предоставить супругу больше свободы. Стремясь привязать его к себе, вы только усилите существующее между вами непонимание и заставите его оправдать ваши опасения. Мужчине стоит равнодушнее относиться к словам второй половинки. Прощайте ей обиды, колкие фразы и упреки. Когда ей овладевают эмоции, она не контролирует себя. 

Совместимость в дружбе 26%

Алена и Павел редко становятся друзьями. Женщина стремится к уединению, поэтому коммуникабельность этого мужчины не производит на нее должного впечатления. Мужчина видит в этой даме исключительно плохие стороны личности. Ее замкнутость, приземленность и чрезмерная эмоциональность настораживают его и заставляют отказаться от дружбы.

Как улучшить совместимость в дружбе

Не предъявляйте завышенные требования к своему другу. Чтобы смириться с его несовершенством, признайте, что вы сами далеки от идеала.

Совместимость в работе 33%

Сотрудничество Алены и Павла сложно назвать взаимовыгодным и плодотворным. Женщина не противится тяжелой работе, но ей легче трудиться в одиночку. Ее отягощают грандиозные проекты, в которые партнер вовлекает множество людей. Мужчина любит строить планы и формировать долгосрочные цели. Однако партнерша не готова к их реализации из-за своей нетерпеливости. Это становится последней точкой в их партнерстве.

Как улучшить совместимость в работе

Сосредоточьтесь на краткосрочных проектах. Острая нехватка времени лишит вас обоих возможности придираться к компаньону и устраивать скандалы.

Совместимость имен Алёна и Павел в любви и браке

  • Главная
  • Совместимость имен
  • Алёна и Павел

Алёна и Павел

Терпение и такт помогут вам наладить отношения с партнером

70%
Совместимость характера

30%
Совместимость духовная

80%
Совместимость в браке

90%
Совместимость физиологическая

Совместимость по стихии имени

Алёна: огонь   +  Павел: земля

К огненным знакам относятся Овен, Лев и Стрелец, а к земным – Телец, Дева и Козерог.

Огненные знаки – это пассионарии, они вспыльчивы, нетерпеливы, им нужно все сразу и немедленно, они не могут и не хотят ждать. Кроме того, огненные знаки отличаются большим эгоцентризмом, они почти всегда сконцентрированы на себе, и окружающим их внимания достается мало. Человек, решившийся связать свою жизнь с огненным знаком, должен знать, что в этом союзе придется забыть о себе и полностью посвятить себя партнеру. Особенно это касается союза с Овном. Земные же знаки спокойны, неторопливы, они умеют ждать своего часа и добиваться задуманного. Огненные знаки относятся к субстанции Ян, а земные – к Инь. Так что союз огненных и земных знаков представляется проблематичным, слишком разные у них устремления и жизненные ритмы. Союз возможен при условии, что огненным знакам удастся обуздать свою нетерпеливость и вспыльчивость, а земным знакам удастся накопить некоторое количество энтузиазма и умерить свою критичность.

Совместимость по числу имени

Алёна: 1   +  Павел: 4

Алёна и Павел – огонь и лед, партнеры в паре – полные противоположности. Энергия единицы бьет через край, она в любой момент готова к новым открытиям и приключениям, окружающий мир вызывает в ней бешеный интерес ко всему. Четверка же, напротив, обладает сдержанным и холодным характером. Вдумчиво и осмысленно подходит к каждому новому этапу в жизни, взвешивает каждое решение, скупа на эмоции. Партнерам в этом союзе необходимо научиться слушать и дополнять друг друга.

Черты характера имени Алёна

упрямство, целеустремленность, обаяние

Узнать о значении имени Алёна

Черты характера имени Павел

доброта, эмоциональность, спокойствие

Узнать о значении имени Павел


Проверить совместимость имен:

Женское:

Мужское:

Чаще всего наши посетители проверяют эти имена:


  • Совместимость имен Аврора и Юстин
  • Совместимость имен Агния и Салават
  • Совместимость имен Аграфена и Инсаф
  • Совместимость имен Азалия и Фируз
  • Совместимость имен Айна и Ильдар
  • Совместимость имен Алиана и Симон
  • Совместимость имен Алисия и Ренат
  • Совместимость имен Аля и Авраам
  • Совместимость имен Анелия и Арман
  • Совместимость имен Анисия и Виталий
  • Совместимость имен Аяна и Шон
  • Совместимость имен Беатриса и Рус
  • Совместимость имен Вида и Фома
  • Совместимость имен Дана и Ильшат
  • Совместимость имен Евангелина и Игорь
  • Совместимость имен Симона и Руслан

[76%] Совместимость Алены и Павла в любви и браке по именам

Портал магии

Знаки зодиакасовместимость знаков зодиака

Давайте рассчитаем число имени пары Павел и Алена. Что их ждет в любви и браке.

Содержание

  • Общие буквы в именах
  • Совместимость по буквам имен
  • Совместимость по цвету имен
  • Схожие черты характера
  • Рейтинг взаимоотношений в разных сферах жизни
  • Голосование
  • Популярные совместимости

Общие буквы в именах

Алена

Павел

Совпадают 3 буквы из 5 возможных (А, Л, Е).

Если совпадает больше половины букв, это говорит об идеальной совместимости рассматриваемых партнеров. У них есть все шансы построить гармоничные отношения, основанные на взаимной любви, уважении и понимании. Этот союз принадлежит к числу тех, что заключаются на небесах. Счастливый брак, крепкая семья, партнеры понимают друг друга буквально с полуслова.

БукваЗначение
А Определяет силу воли и целеустремленность в разных жизненных позициях. Личности с буквой «А» в своем имени характеризуются как трудолюбивые, настойчивые, изредка проявляющие чуткость и ласковость в своих чувствах. В любых направлениях наблюдаются лидерские позиции и нацеленность на результативность.
Л Люди с буквой «Л» в имени — творческие личности, которые предпочитают неожиданные и неординарные ситуации. Их решают посредством своей развитой логики. Профессионально могут реализоваться в любой сфере. Поэтому профессию выбирают из личностных предпочтений.
Е Эти люди характеризуются, как коммуникабельные, дружелюбные, импульсивные и энергичные. Они подвластны решительным действиям, но чаще всего не думают о полученном результате. Богатый внутренний мир дает возможность людям с этой буквой в имени проводить жизнь ярко и красочно.

Совместимость по числу имени

Рассчитываем число имени Алена:

А (1) + Л (13 = 1 + 3 = 4) + Е (6) + Н (15 = 1 + 5 = 6) + А (1) = 18 = 1 + 8 = 9

Число имени Алена:

9

Рассчитываем число имени Павел:

П (17 = 1 + 7 = 8) + А (1) + В (3) + Е (6) + Л (13 = 1 + 3 = 4) = 22 = 2 + 2 = 4

Число имени Павел:

4

Рассчитываем число пары:

9 + 4 = 13 = 1 + 3 = 4

Общее число пары:

4

Вашу пару обьеденяет число 4

  • Совместимость в любви: 60%
  • Совместимость в браке: 90%
  • Тип отношений: партнерство и доверие

Это зрелый союз, где партнеры подходят к отношениям продуманно и основательно. Вы готовы мириться с недостатками и принимать друг друга такими, какие вы есть. Любовь строится на совместных предпочтениях, спокойствии, доверии.

Для партнеров важны не эмоции, а стабильность и чувство безопасности. Все развивается на основе разумных доводов, а заключение брака и рождение детей становится главной целью. Вы хотите заложить прочный фундамент будущей семейной жизни. Чувства бескорыстны, но сексуальной страсти может и не быть. Не позволяйте своей робости и предрассудкам затянуть себя в рутину. Флиртуйте с любимым и постарайтесь стать кем-то большим, чем напарники.

Совместимость по цвету имен

1А И С Ъ

Красный

2Б Й Т Ы

Оранжевый

3В К У Э

Желтый

4Г Л Ф Ю

Зеленый

5Д М Х Я

Голубой

6Е Н Ц

Синий

7Ё О Ч

Фиолетовый

8Ж П Ш

Розовый

9З Р Щ

Золотой

Произведем рассчет имени Алена:

А (1) + Л (4) + Е (6) + Н (6) + А (1) = 18 = 1 + 8 = 9

Произведем рассчет имени Павел:

П (8) + А (1) + В (3) + Е (6) + Л (4) = 22 = 2 + 2 = 4

Цвет имени: Золотой

Цвет имени: Зеленый

Ваши цвета не сходятся.

Из таблицы вы можете увидеть, наибольшее и наименьшее пересечение ваших имен по цвету.

ЦветПавелАлена
Красный 1 2
Оранжевый 0 0
Желтый 1 0
Зеленый 1 1
Голубой 0 0
Синий 1 2
Фиолетовый 0 0
Розовый 1 0
Золотой 0 0

Схожие черты характера

По характеру вы совместимы на 76%

Рейтинг взаимоотношений в разных сферах жизни

ХарактеристикаЗначение (от 1 до 5)Расшифровка
Секс5Партнеры настолько тонко чувствуют друг друга, что порой им даже не требуется слов. Одинаковые темпераменты способствуют достижению гармонии в сексе. Между этими людьми настоящая химия: достаточно полувзгляда, полунамека, чтобы мгновенно вспыхнула страсть. Интимная близость дарит незабываемые эмоции обоим.
Дружба2Разное мировоззрение не позволяет установить абсолютно гармоничные отношения, но найти общий язык вполне реально. Главное — идти на уступки, слушать и слышать собеседника.
Любовь4Эти личности имеют схожие представления о том, как должны выстраиваться любовные отношения. Их тянет друг к другу, им приятно находиться вместе. Если и возникают конфликты, партнерам удается быстро и безболезненно решать их.
Деловые отношения2Идет ли речь о коллегах, деловых партнерах, подчиненном и руководителе, установить взаимопонимание бывает непросто, а без него сложно прийти к консенсусу. Если эти люди постараются быть терпимее по отношению друг к другу, ситуация может измениться.
Семья5Тот самый брак, который заключен на небесах. Партнеры относятся друг к другу с глубоким уважением и трепетом, имеют одинаковые жизненные цели. В их семье царит атмосфера душевного тепла, уюта и взаимопонимания. Совет да любовь, как говорится!

Голосование

Ваше отношение к паре
Отличная пара

100% (2 голоса)

Плохая пара

0% (0 голосов)

Много общего

100% (2 голоса)

Разные интересы и взгляды на жизнь

0% (0 голосов)

Партнерам легко друг с другом

100% (2 голоса)

Сложные взаимоотношения

0% (0 голосов)

Крепкий союз

100% (2 голоса)

Отношения бытро закончатся

0% (0 голосов)

Сильная страсть между партнерами

100% (2 голоса)

Слабое влечение

0% (0 голосов)

Отношения построены на уважении

100% (2 голоса)

Много претензий и обид

0% (0 голосов)

Популярные совместимости

Совместимость Елены и Павла | ГОРОСКОПЫ 365

90%1. по Характеру

5+42. по Нумерологии

Меркурий   Уран

ЕП3. по Буквам

100%Совместимость
в браке 90%Совместимость

в любви

90%100% Совместимость в
любвиСовместимость в
браке

Тип отношений:«Гармония хаоса»

Елена и Павел легко увлекаются друг другом – им достаточно одной беседы, чтобы возник взаимный интерес. Это очень эмоциональный союз, причем не только в начале отношений – эти двое всегда будут жарко спорить и не менее жарко мириться. Оба партнера страдают одной болезнью – склонностью к перемене настроения, а потому отлично понимают своего избранника, более того, нередко сами становятся причиной эмоциональных «качелей», успокаивая и веселя свою вторую половинку, либо выводя её из себя.

В совместной жизни Елена и Павел отлично ладят, хотя со стороны может показаться, будто в их семье конфликты случаются ежедневно. В то же время, эта пара отличается лёгким отношением практически ко всему, а потому готова переносить некоторую неустроенность быта и отсутствие чёткого распределения обязанностей. Гороскоп совместимости утверждает: в браке обладателей этих имен есть то, чего эти двое ищут и порой не находят с другими партнерами – дружба и взаимопонимание. А это ли не настоящее счастье?

Совет для Елены

Совет для Павла

Секреты общения с Еленой

В общении с Еленой никогда не следует забывать, что, какова бы ни была ее маска, за ней скрывается ранимая и тонко чувствующая душа. Проявите к ней немного тепла – и перед вами появится совершенно другой человек!

Секреты общения с Павлом

Интересно, что в большинстве случаев от Павла трудно чего-либо добиться путем воздействия на его самолюбие, но это не значит, что данное чувство у него отсутствует, просто обычно оно удовлетворяется хорошим отношением окружающих и не нуждается в лишних доказательствах. Если же вы хотите завоевать внимание Павла, то хорошо бы помнить, что, как и большинство уравновешенных людей, он наверняка испытывает тягу к теме приключений и из всех эмоций предпочитает беззлобный юмор.

Все тайны Елены

начало статьи

читать>

Пожалуй, главная особенность звучания имени Елена состоит в том, что оно начинается гораздо энергичнее, чем заканчивается. Больше того, по сути, в нем не наблюдается большого напряжения, однако контраст между «заводным» началом и спокойным окончанием способен резко усилить даже это незначительное напряжение. Примерно как горящая спичка, которую трудно заметить солнечным днем, зато в темноте ночи иной раз ее пламя видно даже за несколько километров. Обычно это приводит к тому, что в повседневном поведении Елены внимательный человек может уловить некоторую напряженность. Иногда это выражается в сдержанности Елены, быть может, даже в ее замкнутости, бывает же и наоборот, когда это не совсем понятное ей самой внутреннее возбуждение заставляет Лену держаться несколько вызывающе, как будто она только и ждет нападок со стороны окружающих.

Полная характеристика имени >

Все тайны Павла

начало статьи

читать>

Лучше всего энергетику этого имени можно выразить, ответив простым пожатием плеч на нервный срыв своего начальника, – примерно так в имени Павел проявляется уравновешенное спокойствие. Это, конечно, не означает, что с возрастом Павлик превратится в этакого бесстрастного и холодного человека, но все же большинству носителей этого имени на протяжение всей жизни свойственна достаточно заметная флегматичность.

Еще о характере Павла >

1. по Характеру2. по Нумерологии3. по Буквам

Елена
5
число имени
Меркурий
планента имени

Павел
4
число имени
Уран
планента имени

Елена: расчет числа и планеты имени

Числовое соотвествие букв имени: Е — 6, Л — 4, Е — 6, Н — 6, А — 1

Расчет числа имени: 6 + 4 + 6 + 6 + 1 = 23 = 2 + 3 = 5

Числу 5 в нумерологии соответствует планета Меркурий

Елена и Павел: совместимость по нумерологии 5 + 4 (Меркурий + Уран)

Общение скучновато для Пятерки. Партнер утомляет правильностью, учит жизни, контролирует траты. Он предпочитает проводить свободное время дома, и привыкшая к большим компаниям девушка чувствует себя одиноко. Если мужчина, с присущей ему тягой к постоянству, пытается договориться, уступить и спасти отношения, то любимой не хватает терпения.

В стабильном союзе Пятерка научится самоконтролю: жизнь с педантичной Четверкой дисциплинирует, заставляет обдумывать слова и поступки. Неробкой девушке все же приятно иметь возле себя уверенного и авторитетного мужчину.

Жизнь Четверки настолько размерена, что надоедает ему самому. Подруга подарит самые яркие мгновения в жизни, сделает ее разнообразной, научит смотреть на мир незашоренными глазами. Избранник умеет создавать интимную атмосферу, женщина наполнит ее весельем.

1. по Характеру2. по Нумерологии3. по Буквам

ЕЛенА
пАвЕЛ

Дополнительным тестом на совместимость имен считается самый простой: надо посмотреть, сколько именно букв (и каких) в именах мужчины и женщины совпадают. Общие буквы имен указывают на их общие увлечения, черты характера, хобби. Это дополнительный потенциал, который пара может реализовать.

Совместимость по буквам имен Елена и Павел

В именах Елена и Павел совпадают 3 буквы из 5 возможных (буквы Е, Л, А). Это свидетельствует о том, что партнеры при желании смогут найти достаточно много общего – это могут быть общие хобби, увлечения, досуг. А любые общие интересы крепко связывают влюбленных между собой, повышая их совместимость!

Согласно буквенной совместимости имен, у Елены и Павла общие интересы могут быть основаны на:

  • На самых простых совместных делах, которые не требуют тратить на них много денег или много сил: прогулках в парке, просмотр любимых фильмов, чтение вслух любимых книг.
  • На интересах, связанных с музыкой, пением или ораторским искусством, а также с общением с людьми: чем больше общения – тем лучше!
  • На совместных активных действиях и увлечениях, в основе которых лежит общение или взаимодействие с окружающим миром. Участие в проектах в качестве активистов или волонтеров, посещение мероприятий с большим количеством людей, участие в вечеринках с друзьями, родными, коллегами.

«Его не каждый сможет вытерпеть»: новую подругу Павла Деревянко предупредили об испытаниях

Комсомольская правда

ЗвездыШоу-бизнесЗвезды: семья

Елена ПЕТРОВА

28 января 2021 15:50

Звездный нумеролог Клара Кузденбаева рассчитала совместимость актера с красавицей-танцовщицей

Павел Деревянко представил публике новую девушку Алену ИвановуФото: Владимир ВЕЛЕНГУРИН

Спустя всего месяц после расставания с женой Павел Деревянко представил публике новую девушку Алену Иванову — «чемпионку по бальным танцам всея Руси», как выразился актер.

Судя по всему, именно она стала причиной разлада Деревянко с супругой, которая воспитывает от него двоих дочерей. Любопытно, что для экспертов новые отношения Павла не стали сюрпризом: так, эксперт по лжи и языку жестов Илья Анищенко еще месяц назад предсказывал эту ситуацию.

— Мой прогноз: в ближайшее время мы увидим Павла Деревянко в компании новой спутницы, и тогда уже ему ничего не придется объяснять, — сказал «Комсомолке» профайлер, посмотрев видеозаявление Деревянко о разводе.

Красавица-блондинка, на странице которой еще несколько недель назад появились смайлики-сердечки от знаменитого бойфренда, действительно танцует: в ее Инстаграме множество фото с соревнований, где Иванова поражает членов жюри не только пластикой, но и роскошными нарядами с голой спиной, захватывающими вырезами и сотнями страз. Как выяснил сайт kp.ru, чаще всего Алена выступала в паре с Кириллом Кеппером и «золотым мальчиком российского танцевального спорта» Никитой Бровко. Оба младше своей партнерши, которой в прошлом году исполнилось 34 года.

И с тем, и с другим танцовщица тренировалась самостоятельно, без наставников, и похоже, далеко не всегда занимала призовые места.

От танцевальных нарядов Алены Ивановой захватывает дух Фото: a_ivi

Кроме того, Инстаграм новой подруги актера пестрит всеми атрибутами красивой жизни: пышные букеты, ужины в дорогих ресторанах, отдых на фешенебельных курортах… Немало и профессиональных снимков: Алена не раз позировала в качестве модели, например, магазинам одежды. В Москву она переехала несколько лет назад из Новосибирска, где успела попробовать себя и в роли дизайнера: в 2013 году Иванова представила свою коллекцию женских платьев — в местной прессе до сих пор сохранились фотоотчеты с модного показа. Впрочем, все это — и танцы, и моделинг, и дизайн одежды — скорее, хобби. Чем зарабатывает подруга Деревянко, и кто оплачивает ей красивую жизнь, неизвестно.

Новая подруга актера — обладательница точеной фигуры Фото: a_ivi

О том, есть ли будущее у этой пары, kp.ru рассказала звездный нумеролог Клара Кузденбаева.

— Сейчас для актера наступило время перемен в личной жизни: 44-45 лет для Павла Деревянко — хорошее время, — уверена наш эксперт. — Он родился 2 июля 1976 года, в нумерологии эта дата называется «день бессвязности». Носитель знака известности, относится к особой категории людей, которым среднего пути не дано: либо наверху, либо внизу. На самом деле, он обладает огромной харизмой — баловень судьбы, всеми любим. Очень обаятельный, душа компании. Но в быту с ним совсем не легко, эмоции преобладают над разумом. Может проявлять категоричность, гордыню, амбициозность. Чтобы его выдержать, нужно иметь большое терпение, которое как раз-таки есть у Алёны. В их отношениях все зависит от того, насколько она готова терпеть.

Звездный нумеролог Клара Кузденбаева.

По словам Клары Кузденбаевой, эти отношения могут быть удачными для обоих партнеров, ведь они дополняют друг друга.

— Алена родилась 15 июня 1986 года — в день «приятного соблазна», — продолжает нумеролог. — Она носитель знака прогресса и артистизма. Умная, обладает аналитическими способностями, и поэтому ей далеко не с каждым человеком интересно, всегда нравились люди постарше (новая подруга на 10 лет моложе Деревянко — Ред.). Алена забирает энергию, и Павел для нее хорош — он донор. Что интересно, у нее всегда исполняются мечты, даже самые смелые. Поэтому можно сказать, что она намечтала себе Павла. Сейчас у неё подъем и судьбоносный год — тоже время перемен в личной жизни. Девочка она любознательная, но максимально реализует себя после 37 лет — до этого отрабатывает карму рода. Ей нужно избавляться от упёртости, но с другой стороны, это качество помогает ей достигать поставленных целей. А Павлу я бы посоветовала отказаться от сомнений, которые постоянно тянут его назад. Ему нужно всегда завышать планку и претендовать на большее, тогда удача будет на его стороне.

ЧИТАЙТЕ ТАКЖЕ

«Жена не хотела расставаться»: что скрывается за разводом Павла Деревянко

Эксперт по лжи и языку жестов проанализировал заявление пары (подробности)

Возрастная категория сайта 18+

Сетевое издание (сайт) зарегистрировано Роскомнадзором, свидетельство Эл № ФС77-80505 от 15 марта 2021 г. Главный редактор — Сунгоркин Владимир Николаевич. Шеф-редактор сайта — Носова Олеся Вячеславовна.

Сообщения и комментарии читателей сайта размещаются без предварительного редактирования. Редакция оставляет за собой право удалить их с сайта или отредактировать, если указанные сообщения и комментарии являются злоупотреблением свободой массовой информации или нарушением иных требований закона.

АО «ИД «Комсомольская правда». ИНН: 7714037217 ОГРН: 1027739295781 127015, Москва, Новодмитровская д. 2Б, Тел. +7 (495) 777-02-82.

Исключительные права на материалы, размещённые на интернет-сайте www.kp.ru, в соответствии с законодательством Российской Федерации об охране результатов интеллектуальной деятельности принадлежат АО «Издательский дом «Комсомольская правда», и не подлежат использованию другими лицами в какой бы то ни было форме без письменного разрешения правообладателя.

Приобретение авторских прав и связь с редакцией: [email protected] ru

Совместимость Имен В Любви Алена – Telegraph



💣 👉🏻👉🏻👉🏻 ВСЯ ИНФОРМАЦИЯ ДОСТУПНА ЗДЕСЬ ЖМИТЕ 👈🏻👈🏻👈🏻

Знаки зодиакасовместимость знаков зодиака
ZagovorMaga.ru » Имена » Совместимость имен » Совместимость Алены c мужскими именами
Подробное описание совместимости имен Терентий и Алена
Подробное описание совместимости имен Никодим и Алена
Подробное описание совместимости имен Евдоким и Алена
Подробное описание совместимости имен Варлам и Алена
Подробное описание совместимости имен Вениамин и Алена
Подробное описание совместимости имен Ираклий и Алена
Подробное описание совместимости имен Ефрем и Алена
Подробное описание совместимости имен Артур и Алена
Подробное описание совместимости имен Рем и Алена
Подробное описание совместимости имен Феофан и Алена
Подробное описание совместимости имен Кир и Алена
Подробное описание совместимости имен Елеазар и Алена
Подробное описание совместимости имен Панкрат и Алена
Подробное описание совместимости имен Севастьян и Алена
Подробное описание совместимости имен Игорь и Алена
Подробное описание совместимости имен Петр и Алена
Подробное описание совместимости имен Константин и Алена
Подробное описание совместимости имен Аверкий и Алена
Подробное описание совместимости имен Касьян и Алена
Подробное описание совместимости имен Степан и Алена
Подробное описание совместимости имен Эрик и Алена
Подробное описание совместимости имен Мефодий и Алена
Подробное описание совместимости имен Аввакуум и Алена
Подробное описание совместимости имен Пахом и Алена
Подробное описание совместимости имен Гарри и Алена
Подробное описание совместимости имен Капитон и Алена
Подробное описание совместимости имен Борис и Алена
Подробное описание совместимости имен Августин и Алена
Подробное описание совместимости имен Теодор и Алена
Подробное описание совместимости имен Архип и Алена
Подробное описание совместимости имен Эльдар и Алена
Подробное описание совместимости имен Симон и Алена
Подробное описание совместимости имен Аскольд и Алена
Подробное описание совместимости имен Дорофей и Алена
Подробное описание совместимости имен Корнелий и Алена
Подробное описание совместимости имен Кузьма и Алена
Подробное описание совместимости имен Корней и Алена
Подробное описание совместимости имен Демид и Алена
Подробное описание совместимости имен Артем и Алена
Подробное описание совместимости имен Никита и Алена
Подробное описание совместимости имен Иван и Алена
Подробное описание совместимости имен Остап и Алена
Подробное описание совместимости имен Лаврентий и Алена
Подробное описание совместимости имен Христофор и Алена
Подробное описание совместимости имен Пантелеймон и Алена
Подробное описание совместимости имен Платон и Алена
Подробное описание совместимости имен Мстислав и Алена
Подробное описание совместимости имен Юлий и Алена
Подробное описание совместимости имен Спиридон и Алена
Подробное описание совместимости имен Харалампий и Алена
Подробное описание совместимости имен Аполлон и Алена
Подробное описание совместимости имен Герасим и Алена
Подробное описание совместимости имен Галактион и Алена
Подробное описание совместимости имен Венедикт и Алена
Подробное описание совместимости имен Ефим и Алена
Подробное описание совместимости имен Валентин и Алена
Подробное описание совместимости имен Косма и Алена
Подробное описание совместимости имен Наум и Алена
Подробное описание совместимости имен Исак и Алена
Подробное описание совместимости имен Адриан и Алена
Подробное описание совместимости имен Леон и Алена
Подробное описание совместимости имен Елисей и Алена
Подробное описание совместимости имен Тимур и Алена
Подробное описание совместимости имен Богдан и Алена
Подробное описание совместимости имен Потап и Алена
Подробное описание совместимости имен Глеб и Алена
Подробное описание совместимости имен Исмаил и Алена
Подробное описание совместимости имен Алим и Алена
Подробное описание совместимости имен Антон и Алена
Подробное описание совместимости имен Кукша и Алена
Подробное описание совместимости имен Владислав и Алена
Подробное описание совместимости имен Максим и Алена
Подробное описание совместимости имен Осип и Алена
Подробное описание совместимости имен Зиновий и Алена
Подробное описание совместимости имен Пафнутий и Алена
Подробное описание совместимости имен Михей и Алена
Подробное описание совместимости имен Завулон и Алена
Подробное описание совместимости имен Гедеон и Алена
Подробное описание совместимости имен Фома и Алена
Подробное описание совместимости имен Всеволод и Алена
Подробное описание совместимости имен Моисей и Алена
Подробное описание совместимости имен Сильвестр и Алена
Подробное описание совместимости имен Устин и Алена
Подробное описание совместимости имен Аифал и Алена
Подробное описание совместимости имен Кондратий и Алена
Подробное описание совместимости имен Климент и Алена
Подробное описание совместимости имен Клим и Алена
Подробное описание совместимости имен Савва и Алена
Подробное описание совместимости имен Панкратий и Алена
Подробное описание совместимости имен Пантелеимон и Алена
Подробное описание совместимости имен Серафим и Алена
Подробное описание совместимости имен Леонтий и Алена
Подробное описание совместимости имен Вадим и Алена
Подробное описание совместимости имен Владлен и Алена
Подробное описание совместимости имен Парамон и Алена
Подробное описание совместимости имен Адам и Алена
Подробное описание совместимости имен Август и Алена
Подробное описание совместимости имен Елизар и Алена
Подробное описание совместимости имен Виталий и Алена
Подробное описание совместимости имен Мирослав и Алена
Подробное описание совместимости имен Абрам и Алена
Подробное описание совместимости имен Юлиан и Алена
Подробное описание совместимости имен Вилен и Алена
Подробное описание совместимости имен Макар и Алена
Подробное описание совместимости имен Нестор и Алена
Подробное описание совместимости имен Юстин и Алена
Подробное описание совместимости имен Алан и Алена
Подробное описание совместимости имен Козьма и Алена
Подробное описание совместимости имен Ибрагим и Алена
Подробное описание совместимости имен Василий и Алена
Подробное описание совместимости имен Океан и Алена
Подробное описание совместимости имен Гай и Алена
Подробное описание совместимости имен Никон и Алена
Подробное описание совместимости имен Аверьян и Алена
Подробное описание совместимости имен Афанасий и Алена
Подробное описание совместимости имен Натан и Алена
Подробное описание совместимости имен Ярослав и Алена
Подробное описание совместимости имен Ясон и Алена
Подробное описание совместимости имен Арис и Алена
Подробное описание совместимости имен Кирилл и Алена
Подробное описание совместимости имен Игнат и Алена
Подробное описание совместимости имен Кифа и Алена
Подробное описание совместимости имен Павел и Алена
Подробное описание совместимости имен Яков и Алена
Подробное описание совместимости имен Авдий и Алена
Подробное описание совместимости имен Арсений и Алена
Подробное описание совместимости имен Святослав и Алена
Подробное описание совместимости имен Никандр и Алена
Подробное описание совместимости имен Назар и Алена
Подробное описание совместимости имен Тихон и Алена
Подробное описание совместимости имен Аристарх и Алена
Подробное описание совместимости имен Дементий и Алена
Подробное описание совместимости имен Игнатий и Алена
Подробное описание совместимости имен Поликарп и Алена
Подробное описание совместимости имен Евлампий и Алена
Подробное описание совместимости имен Фрол и Алена
Подробное описание совместимости имен Руслан и Алена
Подробное описание совместимости имен Рафаэль и Алена
Подробное описание совместимости имен Никанор и Алена
Подробное описание совместимости имен Эмиль и Алена
Подробное описание совместимости имен Иероним и Алена
Подробное описание совместимости имен Варлаам и Алена
Подробное описание совместимости имен Феликс и Алена
Подробное описание совместимости имен Варфоломей и Алена
Подробное описание совместимости имен Андроник и Алена
Подробное описание совместимости имен Тимон и Алена
Подробное описание совместимости имен Ростислав и Алена
Подробное описание совместимости имен Тарас и Алена
Подробное описание совместимости имен Еремей и Алена
Подробное описание совместимости имен Филимон и Алена
Подробное описание совместимости имен Карп и Алена
Подробное описание совместимости имен Азамат и Алена
Подробное описание совместимости имен Марин и Алена
Подробное описание совместимости имен Спартак и Алена
Подробное описание совместимости имен Власий и Алена
Подробное описание совместимости имен Марьян и Алена
Подробное описание совместимости имен Николай и Алена
Подробное описание совместимости имен Даниил и Алена
Подробное описание совместимости имен Виталиан и Алена
Подробное описание совместимости имен Арнольд и Алена
Подробное описание совместимости имен Арсен и Алена
Подробное описание совместимости имен Альфред и Алена
Подробное описание совместимости имен Аким и Алена
Подробное описание совместимости имен Донат и Алена
Подробное описание совместимости имен Аввакум и Алена
Подробное описание совместимости имен Родион и Алена
Подробное описание совместимости имен Ерофей и Алена
Подробное описание совместимости имен Далмат и Алена
Подробное описание совместимости имен Анатолий и Алена
Подробное описание совместимости имен Георгий и Алена
Подробное описание совместимости имен Денис и Алена
Подробное описание совместимости имен Гурам и Алена
Подробное описание совместимости имен Максимилиан и Алена
Подробное описание совместимости имен Лука и Алена
Подробное описание совместимости имен Алексей и Алена
Подробное описание совместимости имен Марк и Алена
Подробное описание совместимости имен Рустик и Алена
Подробное описание совместимости имен Кондрат и Алена
Подробное описание совместимости имен Ким и Алена
Подробное описание совместимости имен Модест и Алена
Подробное описание совместимости имен Порфирий и Алена
Подробное описание совместимости имен Киприан и Алена
Подробное описание совместимости имен Ипполит и Алена
Подробное описание совместимости имен Виктор и Алена
Подробное описание совместимости имен Валериан и Алена
Подробное описание совместимости имен Иннокентий и Алена
Подробное описание совместимости имен Лукьян и Алена
Подробное описание совместимости имен Акакий и Алена
Подробное описание совместимости имен Роберт и Алена
Подробное описание совместимости имен Давид и Алена
Подробное описание совместимости имен Трифон и Алена
Подробное описание совместимости имен Нифонт и Алена
Подробное описание совместимости имен Фока и Алена
Подробное описание совместимости имен Михаил и Алена
Подробное описание совместимости имен Ахмет и Алена
Подробное описание совместимости имен Вольдемар и Алена
Подробное описание совместимости имен Пантелей и Алена
Подробное описание совместимости имен Артемий и Алена
Подробное описание совместимости имен Гордей и Алена
Подробное описание совместимости имен Филипп и Алена
Подробное описание совместимости имен Демьян и Алена
Подробное описание совместимости имен Пимен и Алена
Подробное описание совместимости имен Ермолай и Алена
Подробное описание совместимости имен Иосиф и Алена
Подробное описание совместимости имен Соломон и Алена
Подробное описание совместимости имен Лукиан и Алена
Подробное описание совместимости имен Софрон и Алена
Подробное описание совместимости имен Федор и Алена
Подробное описание совместимости имен Аркадий и Алена
Подробное описание совместимости имен Юрий и Алена
Подробное описание совместимости имен Наркисс и Алена
Подробное описание совместимости имен Валерий и Алена
Подробное описание совместимости имен Станислав и Алена
Подробное описание совместимости имен Феодосий и Алена
Подробное описание совместимости имен Сармат и Алена
Подробное описание совместимости имен Прокл и Алена
Подробное описание совместимости имен Евстафий и Алена
Подробное описание совместимости имен Епифан и Алена
Подробное описание совместимости имен Евграф и Алена
Подробное описание совместимости имен Тит и Алена
Подробное описание совместимости имен Гурий и Алена
Подробное описание совместимости имен Иуда и Алена
Подробное описание совместимости имен Сидор и Алена
Подробное описание совместимости имен Александр и Алена
Подробное описание совместимости имен Ермак и Алена
Подробное описание совместимости имен Юстиниан и Алена
Подробное описание совместимости имен Эрнест и Алена
Подробное описание совместимости имен Харитон и Алена
Подробное описание совместимости имен Илларион и Алена
Подробное описание совместимости имен Кассиан и Алена
Подробное описание совместимости имен Корнилий и Алена
Подробное описание совместимости имен Лавр и Алена
Подробное описание совместимости имен Феоктист и Алена
Подробное описание совместимости имен Влас и Алена
Подробное описание совместимости имен Эраст и Алена
Подробное описание совместимости имен Емельян и Алена
Подробное описание совместимости имен Захар и Алена
Подробное описание совместимости имен Бронислав и Алена
Подробное описание совместимости имен Эдуард и Алена
Подробное описание совместимости имен Герман и Алена
Подробное описание совместимости имен Гордий и Алена
Подробное описание совместимости имен Егор и Алена
Подробное описание совместимости имен Владимир и Алена
Подробное описание совместимости имен Исай и Алена
Подробное описание совместимости имен Савелий и Алена
Подробное описание совместимости имен Тимофей и Алена
Подробное описание совместимости имен Исаак и Алена
Подробное описание совместимости имен Роман и Алена
Подробное описание совместимости имен Азарий и Алена
Подробное описание совместимости имен Фортунат и Алена
Подробное описание совместимости имен Ипат и Алена
Подробное описание совместимости имен Себастьян и Алена
Подробное описание совместимости имен Иисус и Алена
Подробное описание совместимости имен Аарон и Алена
Подробное описание совместимости имен Прокоп и Алена
Подробное описание совместимости имен Ярополк и Алена
Подробное описание совместимости имен Никифор и Алена
Подробное описание совместимости имен Митрофан и Алена
Подробное описание совместимости имен Евгений и Алена
Подробное описание совместимости имен Нил и Алена
Подробное описание совместимости имен Лазарь и Алена
Подробное описание совместимости имен Павлин и Алена
Подробное описание совместимости имен Авраам и Алена
Подробное описание совместимости имен Семен и Алена
Подробное описание совместимости имен Пров и Алена
Подробное описание совместимости имен Викентий и Алена
Подробное описание совместимости имен Матвей и Алена
Подробное описание совместимости имен Дмитрий и Алена
Подробное описание совместимости имен Олег и Алена
Подробное описание совместимости имен Иона и Алена
Подробное описание совместимости имен Эммануил и Алена
Подробное описание совместимости имен Флор и Алена
Подробное описание совместимости имен Разумник и Алена
Подробное описание совместимости имен Зосим и Алена
Подробное описание совместимости имен Антип и Алена
Подробное описание совместимости имен Фаддей и Алена
Подробное описание совместимости имен Ахмед и Алена
Подробное описание совместимости имен Изяслав и Алена
Подробное описание совместимости имен Авдей и Алена
Подробное описание совместимости имен Гавриил и Алена
Подробное описание совместимости имен Прохор и Алена
Подробное описание совместимости имен Клавдий и Алена
Подробное описание совместимости имен Самсон и Алена
Подробное описание совместимости имен Антоний и Алена
Подробное описание совместимости имен Вахтанг и Алена
Подробное описание совместимости имен Генрих и Алена
Подробное описание совместимости имен Леонид и Алена
Подробное описание совместимости имен Андрей и Алена
Подробное описание совместимости имен Казимир и Алена
Подробное описание совместимости имен Илья и Алена
Подробное описание совместимости имен Трофим и Алена
Подробное описание совместимости имен Ян и Алена
Подробное описание совместимости имен Вячеслав и Алена
Подробное описание совместимости имен Геннадий и Алена
Подробное описание совместимости имен Феодот и Алена
Подробное описание совместимости имен Альберт и Алена
Подробное описание совместимости имен Виссарион и Алена
Подробное описание совместимости имен Азат и Алена
Подробное описание совместимости имен Сергей и Алена
Подробное описание совместимости имен Григорий и Алена
Подробное описание совместимости имен Мартин и Алена
Подробное описание совместимости имен Самуил и Алена
Подробное описание совместимости имен Мирон и Алена
Подробное описание совместимости имен Лев и Алена
Подробное описание совместимости имен Филарет и Алена
© 2017-2021 ZagovorMaga. ru копирование материала запрещено, все права на статьи принадлежат их авторам. Наш канал в Яндекс.Дзен, подписывайтесь! 18+ Строго для совершеннолетних! Политика конфиденциальности

Отношения в этой паре зарождаются с красивых ухаживаний. Надо сказать, что Андрей – мужчина видный. Он умеет хорошо одеваться и производить впечатление манерами. Но и женщину ищет себе под стать. Алена, обожающая красивые вещи, парфюмерию и косметику, не может быть обделена его вниманием. Кроме того, она отнюдь не глупа и всегда поддержит разговор, порой может развить тему довольно глубоко.
Совместимость имен Андрей и Алена практически 100%. Все благоволит их союзу. Молодые люди быстро находят общий язык. Они оба общительны и любят немного философствовать. Это сделает вечерние прогулки особенно запоминающимися. Андрей придает большое значение первым встречам, он делает подарки и говорит комплименты. Это помогает очаровать ветреную Аленку.
Партнеры быстро понимают, что лучшего партнера у них не было и, скорее всего, не будет. Это не говорит о том, что они торопятся со вступлением в брак. Напротив, встречи и прогулки могут продолжаться долго, что позволяет партнерам еще раз подумать, не ошиблись ли они с выбором. Совместимость Андрея и Алены идеальная, поэтому пара редко распадается.
Андрей не слишком разговорчив, но перед Аленой открывается. Она всегда поддержит и будет на его стороне. В свою очередь, девушка видит, что перед ней надежный мужчина, готовый взять в свои руки не только бразды правления в семье, но и все вопросы, связанные с материальным обеспечением. Это один из самых главных критериев для Алены, поскольку в любви и браке для нее существуют только мужчины, способные выполнять свои обязанности.
Совместимость имен Андрей и Алена и в интимной сфере также на высоте. Если на начальном этапе сексуальную составляющую немного портит стеснение, то, узнавая друг друга ближе, партнеры растворяются в близости без остатка. В постели царит полное равноправие, они очень внимательны к желаниям и чувствам партнера.
Ощущение безопасности и защищенности согревает обоих и дарит понимание, что это именно тот единственный человек, которого они так долго ждали. Отношения основаны на безграничном доверии. Удивительно, но оно пронизывает все сферы жизни пары, вместе они способны достичь любых высот. Измены
Записки Астролога
Запчасти Для Рыболовных Кресел Купить В Рязани
Мокша Ведическая Астрология
Кресло Груша Купить В Рязани
Купить Кресло Вращающееся Для Гостиной
Совместимость Алены c мужскими именами в любви …
[69%] Совместимость Алены и Александра в любви и браке …
Совместимость имен Алена и Виктор в любви, браке, сексе …
Совместимость имен Алена и Владислав в любви, браке, се…
Совместимость имен Алена и Сергей в любви, браке, сексе …
Совместимость имен в любви и браке
Совместимость Имен В Любви Алена

Что означает имя Алена? Женское имя Алена

Как только Алена начинает говорить, у нее сразу же появляется свое мнение абсолютно по любому вопросу. Этот «свой» взгляд на мир позволяет девушке открыть его для себя таким, каким его не видит никто другой. Ей интересны абсолютно все сферы жизни, но самыми интересными являются философия, психология, дизайн, экономика и археология. Алена любит что-то кому-то объяснять очень подробно и в красках, но не любит, когда это делают по отношению к ней, особенно когда речь идет о малопонятных ей вещах. Это человек настроения, но, как правило, она более в хорошем настроении.

Значение имени Алена

Точной информации о значении имени нет, есть только гипотетические версии. В одной говорится, что Алена — это еврейское «Алона», что переводится как «дуб». Другая говорит о древнегреческом происхождении имени, которое переводится как «солнечный».

Характер имени Алена

В чужих походах Алена может показаться замкнутой и необщительной, но когда девушка попадает в знакомый круг, она сразу же расцветает, как цветок, и проявляет всю свою активность и жизнерадостность. Она впечатлительна и умеет сопереживать, бережлива. Это скорее можно отнести к слабо подверженным влиянию аутсайдеров. По характеру она больше похожа на своего отца. У девушки разносторонние интересы, она всегда старается заниматься чем-то конкретным, но через какое-то время может бросить все из-за потери интереса. С Аленой всегда приятно общаться и быть, она как лучик тепла, всегда поддержит и поднимет настроение.

Хоть Алёна и не любит физический труд, но при необходимости может им заниматься, но предпочитает заниматься чисто умственным трудом. Эта девушка больше других любит, когда ее хвалят, но сама никогда не попросит похвалы, так как считает, что это низко. Она может достичь небывалых высот в карьере благодаря своему уму и выдержке, но ни в коем случае не может брать семью полностью на свою опеку, так как в этом случае она напрочь растратит свою нежность и , что приведет к разладу с возлюбленным.

В детстве Алёна любит сказки, очень доверчива, но ровно до первого обмана. Если она его узнает, то тут же даст вам знать об этом. Более того, он постарается наказать виновных самым неординарным образом. Но на самом деле это не злопамятная девушка и месть совсем не в ее стиле. Это очень сострадательный человек, но от рождения обладающий очень мягким характером. Она может принести домой грязного щенка, накормить его и поплакать о его судьбе, но если только родители возмутятся и попросят выгнать, то чаще она так и сделает.

Алёна любит всё и понемногу. Она умеет немного шить, немного вязать и т. д. Алена всегда делает уроки вовремя, но среди них не так много отличников, отличников гораздо больше. У нее отличная память, и она лучше ладит с учителями в школе.

Это скорее прирожденный оптимист, жизнерадостный человек с большим воображением. Она любит общаться и хотела бы выбрать сферу, которая требует этого навыка.

Эта девушка редко проявляет любовь в чистом виде, как правило, сначала возникает сострадание, а уже потом, как следствие, любовь. Иногда может дойти до того, что здоровый и состоятельный молодой человек будет предпочтительнее того, о ком она сожалеет. Но при этом она будет ждать, что возлюбленный ответит на ее любовь взаимностью.

Для Алены болезненно все, что в любом виде отнимает у любимого мужчины: работа, друзья, увлечения, привязанности. Она склонна погружаться в свои переживания, ей не свойственна придирчивость, она может довольствоваться тем, что имеет.

В стенах дома девушки часто царит спокойствие и умиротворение. Из нее выходит любящая мать и внимательная жена. Откровенно говоря, она привыкла быть хорошей хозяйкой по настроению. Если она на нуле, то она безразлична к экономике и наоборот.

Алену можно считать воплощением женственности, загадочности, бесстрашия и изменчивости. Удивительно, но каждый мужчина может найти в ней свой идеал. Девушке не свойственно упрямство, ее ум гибок, когда речь не идет о достижении цели. Девушка очень капризна, но в ее случае это одновременно обаятельная и слабая черта. При всей своей мягкости она корыстна и никогда не упустит своего.

Взрослая Алена всегда слишком требовательна к себе, ответственна и сильна. С окружающими ведет себя осторожно и в то же время мягко. Он всегда стремится не навязывать или заставлять что-то делать, а доходчиво объяснять и разбираться, зачем это нужно. При этом ее по праву можно назвать врожденной, так как она хоть и мягко, но все же добьется своего. Самое интересное, что в большинстве случаев девушки с этим именем сами не подозревают, что у них есть этот талант.

Алене лучше изначально определиться, чему она посвятит свою жизнь, семье или карьере, ведь тянуть две «лямки» на себя будет практически невозможно.

Судьба имени Алена

Некоторые аспекты жизни Алены.

  • Здоровье . У Алена часто бывают очень слабые легкие, поэтому за их здоровьем нужно следить и следить. Показано активное укрепление иммунитета и частые прогулки на свежем воздухе, лучше, если это будет сосновый бор. В остальном особых проблем нет.
  • Отношения и брак . При поиске спутника жизни девушке лучше искать любимого человека в сфере экономики, математики, технарей. Алена может обеспечивать себя и жить, ни в чем не нуждаясь, поэтому ей скорее нужна вторая половинка. Ей, конечно, нужна семья, но однообразие и будни ее быстро утомляют. Ей гораздо больше нравится ездить в командировки. Но не исключено, что Алена все же предпочтет семью карьере. Если девушка уверена, что мужчина может полностью взять на себя финансовые обязательства, то она полностью погрузится в семейную жизнь.
  • Карьера и бизнес . Алена не любит физический труд, она больше творческая личность, поэтому нужно выбирать соответствующие профессии. Удача и ум позволяют девушке при желании добиться неплохих успехов в карьере, но организовывать бизнес все же нежелательно.

Тайны будущего — одна из многих загадок для человечества, разгадать которую не только сложно, но и практически невозможно. Несмотря на эти трудности, можно частично попытаться узнать будущее с помощью некоторых методов, и один из них – проникнуть в тайный смысл имени. Чем будет отличаться Алена, значение имени, характер и судьба для девочек – в этих непростых загадках непременно стоит попытаться разгадать взрослых родственников малышки.

Значение имени Алена для девочки кратко

После рождения ребенка у родителей наступает период, когда нужно не только привыкнуть к новым обязанностям по уходу за малышкой, но и попробовать выбрать самое многообещающее и красивое имя. Многие взрослые стараются изучать специальную литературу, в которой без труда можно найти самые популярные и благозвучно звучащие имена, но этого не всегда достаточно. Крайне важно, чтобы вы не только делали выбор на основе красивого звука, но и пытались выяснить, что это значит и как это может повлиять на будущее.

Алена, значение имени, характер и судьба — эти подробности волнуют взрослых, именно поэтому стоит попытаться узнать тайный смысл, который предки скрывали в этом имени. Чтобы потом не жалеть об этом выборе, необходимо внимательно изучить все особенности.

Значение имени Алена для девочки вряд ли можно кратко объяснить, ведь оно имеет старославянские корни. Так называлось одно из древнейших племен, обитавших на территории России, в ее европейской части. Часто с этим спорят греки, доказывая, что именно им принадлежит это имя и что оно означает «факел» или «вспышка». Это неправда; впервые упоминания о нем можно встретить в древнеславянских легендах или повествованиях.

Что означает имя Алена для девочки по церковному календарю

Часто родители пытаются определиться с выбором имени для своей малышки, внимательно изучая христианскую литературу. Именно в святцах или в церковном календаре содержится самая полезная и интересная информация, которая поможет проникнуть в тайный смысл имени, узнать, какие непредсказуемые события могут повлиять на жизнь малыша. С помощью православной литературы также можно определить, какие святые будут покровительствовать малышке, и сколько раз в году она будет отмечать именины.

Что означает имя Алена для девочки по церковному календарю и когда нужно отмечать именины? К сожалению, этого имени нет ни в святцах, ни в церковном календаре, поэтому у малыша не будет и святых покровителей. Не стоит преждевременно огорчаться и менять имя, повторно выбирая его из сотен подходящих, ведь сам Господь покровительствует ребенку, нужно только хорошо его об этом попросить. Главное, не забывать учить малышку молиться своему покровителю и просить наставления в делах, помощи в решениях, дарования крепкого здоровья и помощи в работе и домашних делах.

Тайна имени Алена — есть ли в нем скрытый смысл

Какую тайну имени Алена следует знать родителям, и не скрыто ли в нем что-то необъяснимое? Взрослым стоит приготовиться к тому, что с малышом с самого рождения начнут происходить довольно странные вещи. У нее может быть невероятная интуиция, которую довольно сложно объяснить. Родители настолько привыкнут к этой особенности своего любимого чада, что будут часто советоваться с ней в самых важных вопросах, а дочь непременно подскажет правильное решение.

Хорошо развитая интуиция также поможет в выборе профессий Алены. Если ей удастся занять место главы крупной компании или стать банкиром, ее доверие будет безграничным — средства, вложенные в ценные акции, благодаря интуиции будут приумножаться с невероятной скоростью.

Еще одно необъяснимое качество — редкий дар провидения. Ребенок с детства расскажет свои сны, которые часто сбываются или предостерегут от действий, которые могут привести к проблемам в жизни. Поначалу никто особо не поверит Алене. Со временем эта особенность малышки станет привычной в семье, и ей будут безоговорочно доверять.

Происхождение имени Алена и его значение для детей

Практически каждый ребенок, который уже подрастает и начинает увлекаться различными науками, необъяснимыми фактами и суевериями, рано или поздно начинает интересоваться происхождением своего имени . Именно поэтому родителям лучше заранее вооружиться соответствующими знаниями и выяснить происхождение имени Алена и его значение для детей.

Так как корни этого имени полностью славянские, проблем с поиском подходящей литературы не возникнет. Существует множество легенд, связанных именно с племенем ален, воины которого отличались невероятной отвагой, умениями, доблестными подвигами и любовью к своей родине. Насколько это может быть важно в жизни ребенка? Остается только надеяться, что предки благосклонно отнесутся к малышке, носящей их имя, и помогут родителям в воспитании малыша.

Алена, значение имени, характер и судьба — все эти понятия тесно переплетены и могут сыграть очень важную роль в будущем. Именно поэтому родителям нужно постараться выяснить все, что связано именно с тем, как они назвали своего ребенка – это очень поможет предотвратить проблемы, которые могут возникнуть в жизни девочки.

Характер девушки по имени Алена

Будет ли характер девушки по имени Алена добрым, или стоит готовиться к непредвиденным осложнениям? Среди черт характера, безусловно, будут преобладать положительные, среди них:

  1. бодрость;
  2. остроумие;
  3. добродушие;
  4. отзывчивость;
  5. доверчивость;
  6. любопытство;
  7. эмоциональность;
  8. сострадание.

Чаще всего Алена приобретает черты характера, отличающие ее отца. К недостаткам можно отнести небольшую замкнутость, которая проявляется только в том случае, если родители использовали неправильный подход в воспитании. Взрослые непременно должны помнить, что преодолеть этот недостаток помогут только доверительные беседы. Задушевные разговоры с мамой или папой обязательно принесут свои плоды, и малыш станет менее замкнутым.

Судьба девушки по имени Алена

К чему нужно подготовиться заранее и из каких событий будет состоять судьба девушки по имени Алена? Выбирать профессию она начнет еще в детстве, выясняя все плюсы и минусы понравившихся специальностей. Девушка может остановить свой выбор на таких профессиях.

Имя Алена у большинства людей ассоциируется с образом юной краснощекой дамы с обертки всем известной плитки шоколада. Но кто настоящий представитель этого имени? Какой у него характер, есть ли у него русские корни?

Происхождение имени Алена

Происхождение имени связано с древними славянскими племенами аленами или алонами, проживающими на юго-западе России. Бесстрашные и сильные воины избрали своей эмблемой «пламя» и «меч». Если придерживаться этой версии, то значение имени звучит как «алая», «огненная». Однако повесть предлагает и другие вариации, например:

  • в переводе с греческого означает «факел», «факел»;
  • с иврита — «дуб»;
  • Коренные якуты трактуют это как «дождь, шумящий на реке» и называют реку Лену Аленой.

Долгое время все были уверены, что Алёна — вариация более популярной. Но в современном мире большинство ученых сходятся во мнении, что это два разных имени, каждое из которых имеет свою историю и значение.

Имя Алена берет свое начало с 17 века, ведь именно в те времена впервые появилась Алена Арзамасская, воинственная казачка, организовавшая восстание крестьян в поддержку Степана Разина. За неуважение бояр и сановников девушку сожгли в срубе, а имя ее вычеркнули из святца. Даже упоминание имени непокорной казачки считалось страшным грехом. Таким образом, бояре надеялись, что народ забудет об их героине и сотрет ее из памяти. Именно поэтому долгое время считалось, что такого имени не существует и есть только варианты имени Елена.

Первое упоминание имени Алена относится к Алене Арзамасской, воинственной казачке, организовавшей восстание крестьян в поддержку Степана Разина

Формы имени Алена

Варианты имени: Аленушка, Альчик, Аленка, Лёля, Лёка , Алик, Эля, Леся, Оля.


Аленочка — ласковое обращение к девушке по имени Алена

церковное имя

Алена не имеет своих именин, т.к. не входит в список церковных календарей. Однако в связи с тем, что ранее оно считалось производным от имени Елена, покровителями принято считать одних и тех же святых: равноапостольную императрицу Елену, преподобную Елену Дивеевскую, преподобную царицу Сербскую Елену. . Именно поэтому Алена празднует свои именины одновременно с Еленой:

  • 10 августа;
  • 3 июня;
  • 24 июля;
  • 17 сентября;
  • 19 марта;
  • 12 ноября.

Таблица: имя Алена на разных языках

Транслитерация имени

Имя Алены для паспорта или банковской карты: Алена.


Осенняя Алена щепетильна в любом деле

Какое отчество гармонирует с именем Алена

Имя Алена сочетается со многими отчествами, но звучит красивее всего:

  • Алена Александровна;
  • Алена Сергеевна;
  • Алена Юрьевна;
  • Алена Павловна;
  • Алена Викторовна.

Исключение составляет только отчество Андреевна, так как оно оказывает негативное влияние на нашу героиню и в ней формируются не очень хорошие качества. Алене Андреевне свойственны жадность, сварливость, лень, потребительское отношение к другим людям.

Видео: Славянское «Аленушка»

Характеристика и влияние имени

Еще в древности люди были уверены, что имя и судьба его владельца тайно связаны. В то же время считалось, что зная только одно имя, можно легко навредить человеку. Вот почему младенцам всегда давали два имени: одно — для людей, другое — тайное, для души. С тех пор ходят слухи, что если хочешь изменить свою судьбу, смени имя. Такого же мнения придерживаются и некоторые современные ученые. Например, известный профессор психологии Борис Хигирь, зная имя (а в идеале еще и отчество и год рождения), мог говорить о незнакомом ему человеке как о лучшем друге, доверившем ему самые сокровенные тайны.

Ученый Павел Александрович Флоренский поддерживает своего коллегу и также уверяет, что имя человека и его характер взаимосвязаны. На эту тему он даже написал исследовательскую работу, опубликованную в 1988 году в журнале Sociological Research.

Незадолго до этого темой заинтересовались чикагские специалисты, которые выяснили, что имя сильно влияет на судьбу и здоровье его владельца. Если оно способно вызвать насмешки, то человеку с детства приходится занимать оборонительную позицию, бороться за нормальное отношение к себе, которое отпечатывается в его психике, здоровье и характере. Также они рассказали историю оригинальных родителей, которые назвали своих детей: Менингит, Ларингит и Аппендицит, в результате чего сильно испортили себе жизнь.

Французский теолог Пьер Руже опубликовал книгу «Влияние имени на жизнь человека», в которой написал о «музыке имени». Он считал, что каждая буква является источником определенной вибрации, влияющей на характер человека.

Рифмы к имени: Алена — достойная престола; Алена – очаровательная, как Мадонна; Алена – в своей тарелке; Алена серьезный и интеллигентный человек.


Среди чужих маленькая Алена держится особняком

Как имя Алена влияет на характер ребенка

Маленькую Аленушку нельзя назвать чересчур общительным и открытым ребенком. Наоборот, среди незнакомцев девушка будет стараться держаться особняком, никому не навязывая своего общества и живя только своим внутренним миром. Однако в привычной обстановке она преображается, становится веселой и жизнерадостной.

Девочка растет доброй, честной, сочувствующей чужому горю, чем часто пользуются ее сверстники. Единственный минус — отсутствие твердости в характере. Например, Аленушка может привести домой уличного котенка, искупать его, обогреть, накормить и даже поплакать о его горькой судьбе, но если родители выгонят животное из дома, девочка не скажет ни слова в его защиту. . Несмотря на это, Аленку нельзя назвать «милым, пушистым зайчиком», который никогда не показывает зубки. Если она понимает, что ей угрожает хоть малейшая опасность, то практически мгновенно превращается в хитрую и изворотливую тигрицу, способную навредить любому, кто попытается посягнуть на ее душевный покой.

В детстве Алёнка очень любит сказки и, благодаря хорошей памяти, многие из них знает наизусть. Однако в целом она идеальный ребенок: девочка умна, трудолюбива, усидчива, что помогает ей осваивать чтение, математику, а иногда и иностранные языки еще в дошкольные годы. Именно поэтому, отправляя малышку в первый класс, родители уверены в ее успехах. Однако лень и нежелание сосредотачиваться на науках, которые ей неинтересны, не позволяют Алене быть отличницей – учится девушка средне.


Природная лень не позволяет Алене отлично учиться

Как имя Алена влияет на характер и судьбу взрослого человека

По мере взросления меняется и характер Алены. Из робкого, спокойного ребенка она превращается в целеустремленную девушку, готовую добиться своей цели любой ценой. Алена – творческий человек, поэтому у нее бывают перепады настроения. Возможно, именно из-за этого она часто берется за несколько дел одновременно, но ее быстро угасающий интерес не позволяет ей доделать хоть что-то до конца.

Недостатком характера Алены можно назвать излишнюю импульсивность и эмоциональность — качества, которые она переняла у отца. Из-за них девушка не может трезво оценивать ситуацию и быстро принимать правильные решения. По этой причине Алена иногда попадает в неприятные истории, которые «отрезвляют» ее, действуя подобно кадке с холодной водой, вылитой прямо на ее горячую голову.

К счастью, даже эти внезапные повороты судьбы не сломили девушку. Алена снова берет себя в руки и планомерно движется к обозначенной цели. Следует сказать, что обладательницы этого имени часто добиваются больших высот, но при этом теряют настоящих друзей.


Алена — привлекательная девушка, не лишенная внимания противоположного пола

Стихи, посвященные Алёнам: И. Бунин «Аленушка», А. Барто «Загадочный вопрос», Е. Мартынов «Алёнушка».

Профессии, бизнес и карьера

Алена очень остроумна и не приемлет тяжелый физический труд. Поэтому он выбирает профессии, в которых необходимо думать головой. Часто она становится учителем, врачом, социальным работником, экономистом или бухгалтером.

Но Алене желательно не лезть в коммерцию. Девушка быстро устает от регулярных поездок, встреч с партнерами, козней конкурентов, в результате чего перестает развивать свое детище и вкладывать в него деньги. Алена удержится на плаву только в том случае, если ее начнет толкать более опытный человек.

Здоровье

Благодаря подвижному образу жизни у Алены хорошо развит иммунитет, поэтому она редко болеет. Единственным уязвимым местом девушки является спина, но если ей изначально удастся найти хорошего специалиста, который выявит проблему, она избавится от боли раз и навсегда.


Единственным слабым местом Алены является спина, поэтому ей следует найти хорошего специалиста в этой области

Любовь, сексуальность, брак

Любовные отношения для Алены — это не просто близость. Это беззаветная преданность, милосердие, граничащее с жалостью. В итоге не стоит удивляться, если девушка вместо состоявшегося, уверенного в себе парня отдаст предпочтение витающему в облаках неудачнику. Чувства девушки всегда искренние, чистые, настоящие, граничащие с самопожертвованием. Алену мало интересует финансовая сторона. Главное, чтобы избранник любил, уважал и ценил ее как личность.

Природная харизма, привлекательная внешность, чувственность — все это не ускользает от мужского взгляда, поэтому Алена никогда не испытывает недостатка в поклонниках. Однако сама девушка предпочитает не размениваться по пустякам и хранить верность одному избраннику, если, конечно, он не соответствует ее требованиям. Сексуальная сторона отношений очень важна для Алены, поэтому она будет требовать от своего спутника полной самоотдачи, иначе быстро найдет ему замену.

Алена далеко не примерная хозяйка, хотя старается содержать дом в чистоте и заботится о семье. В ее доме всегда чисто и есть вкусная еда, но делает это девушка по необходимости, без энтузиазма. Среди домашних Алена всегда старается занять лидирующие позиции, что ей часто удается. Мнение девушки никогда не обсуждается и принимается домочадцами в первозданном виде.


Алена не слишком любит работу по дому

Таблица: Совместимость Алены с другими именами

Судьбоносные годы жизни Алены

В жизни Алены есть периоды, которые играют огромную роль в ее судьбе:

  • 21 год – именно в этом возрасте девушка примет важное решение, которое перевернет ее жизнь на 180º;
  • 27 лет — произойдут серьезные внутренние изменения, как морально-психологические, так и физические;
  • 32 года — срок, который определяет, кем быть и что оставить;
  • 35 лет — время окончательного определения в жизни в плане профессии и семьи. возможен второй брак;
  • 42 года – очередной кризис, который может отразиться как на семейной жизни, так и на здоровье;
  • 63 года — переоценка ценностей.

В жизни Алены есть периоды, которые играют огромную роль в ее судьбе.

Астрология и талисманы имени Алены

У каждого имени свои талисманы, у Алены они тоже есть:

  • планета — Солнце, Плутон;
  • Знак Зодиака — Близнецы, Весы, Рыбы;
  • элемент — огонь;
  • номер — 5, 7;
  • цвет — красный, оранжевый, алый;
  • тотемное животное — скарабей, лев;
  • сезон — весна;
  • дерево — китайская вишня;
  • растение — роза садовая, лаванда;
  • металл — золото;
  • минерал — авантюрин, халцедон и оникс;
  • счастливый день — вторник, воскресенье.

Толкование значения букв имени Алена

Каждая буква в слове несет особую смысловую и эмоциональную нагрузку. Зная значение букв в имени, можно прочувствовать всю его глубину, предположить, какое влияние оно окажет на судьбу:

  • А — жажда физического и душевного комфорта, стремление творить и достигать новых высот;
  • Л — утонченность, артистизм, постоянный поиск себя и своего предназначения в жизни, стремление быть всем полезным;
  • Йо — повышенная эмоциональность, сексуальность, легкая приспособляемость к любой ситуации;
  • Н — наличие внутреннего «железного» стержня, остроумие, умение критиковать свои действия, исполнительность.

Первая буква считается самой значимой, особенно если она повторяется в имени несколько раз.


«А» считается самой значимой буквой имени, так как она стоит в начале и повторяется дважды.

Характеристика имени в соответствии со временем года

Большое значение имеет время года, в которое родился человек:

  • Алена, родившаяся зимой, настойчивый и принципиальный человек, который всегда добивается желаемого. Для нее очень важно иметь все самое лучшее, поэтому она слишком разборчива даже в выборе друзей и спутника жизни. Целеустремленность и педантичность помогают Алене воплощать все свои идеи в жизнь;
  • весна Алёна любит комфорт и материальный достаток. Она умна, амбициозна, упряма и расчетлива. Замуж девушка вступает поздно, потому что лучшие годы посвящает карьере;
  • лето Алёна любит интриги и часто сама становится их главной героиней. Существенным недостатком ее характера является зависть. Возможно, поэтому у летней Алены нет близких друзей. Она дарит заботу, нежность и внимание только своей семье;
  • осень Алена предусмотрительна и осторожна, требовательна и немного разборчива в любом деле. Девушка привыкла доминировать, поэтому близким приходится нелегко. Однако справедливости ради стоит отметить, что наставления Алены зачастую не лишены смысла.

Фотогалерея: известные люди в истории по имени Алена

Алена Апина — российская эстрадная певица, композитор и поэтесса, заслуженная артистка России (2002), экс-солистка группы «Комбинация» Алена Водонаева — медийная личность, получившая известность как самая скандальная участница телепрограммы Дом-2 Мисс Россия 2012 Алена Свиридова — российская певица, автор песен, композитор, актриса, телеведущая Алена Яковлева — российская актриса Московского театра Сатиры, получившая звание Народной артистки России в 2008 году Алена Хмельницкая — российская актриса театра и кино, телеведущая Алена Венум — успешный блогер, который за год существования канала собрал миллионную аудиторию

Песни про Алену: В. Горбунов «Дорогая Аленушка», гр. Нэнси «Аленушка», Мистер Кредо «Аленушка».

Гороскоп Алены

Знак Зодиака также влияет на значение имени и характер его обладательницы:

  • Овен — девушка чрезмерно авторитарна, что проявляется как в отношениях с домочадцами, так и в общении с коллегами . Однако если родственники готовы простить Алену, то коллеги обрывают с ней все контакты, так как не намерены терпеть ее излишнюю эмоциональность и импульсивность;
  • Телец принципиальный и уверенный в себе человек, который привык манипулировать людьми и так добивается целей. Однако в отношениях со своим избранником Алена-Телец резко меняется, становится беспомощной, слабой женщиной, готовой на все ради своих чувств;
  • Близнецы — очаровательная и привлекательная девушка, оптимистично смотрящая на все, что ее окружает. Имеет много поклонников и легко преодолевает все жизненные препятствия;
  • Рак — девушка редко добивается поставленных целей, так как ее доминирующие качества — неусидчивость и излишняя суетливость. Кроме того, дама убеждена, что она никогда и ни в чем не виновата и что злодейская судьба отвернулась от нее. Алена также проявляет недовольство своими близкими, считая, что домочадцы не принимают участия в ее жизни и ничем ей не помогают;
  • Лев — постоянное желание быть центром Вселенной, излишняя самоуверенность и назойливость играют с Аленой злые шутки — окружающие стараются ее избегать, так как девушка их просто раздражает своей напористостью. Алена часто обращается с мужем как с мебелью, считая, что он должен безоговорочно признавать ее авторитет и никогда не пытаться оспаривать ее решения;
  • Дева — девушка живет по строго намеченному плану, поэтому ей очень сложно найти партнера. Как правило, ее избранником становится человек, который может легко идти по жизни, не обращая внимания на излишнюю самоорганизацию своего спутника;
  • Весы — Алена, рожденная под этим знаком, часто является душой компании. Веселая болтушка и хохотун легко идет по жизни и всегда добивается желаемого. У него нет недостатка в партнерах, но в жены он выберет только свою полную противоположность – серьезного мужчину, твердо стоящего на ногах;
  • Скорпион – настоящая творческая личность, которой свойственны невнимательность, вспыльчивость, впечатлительность. Она всегда действует в порыве чувств, о чем часто потом жалеет. Девушка не может контролировать свои эмоции даже с любимым человеком, что является причиной частых ссор между возлюбленными;
  • Стрелец — характерное для Алены непостоянство и желание ни от кого не зависеть приводят к тому, что девушка не может добиться гармонии ни в семье, ни в отношениях с коллегами. Она слишком ветреная, любит новые отношения и знакомства. Поэтому долго не может определиться с кандидатурой спутницы жизни;
  • Козерог — рассудительная и великодушная женщина, требовательная как к себе, так и к другим. Не любит мелочности и фальши, таких людей сразу вычеркивает из своей жизни;
  • Водолей — главное качество этого человека — интеллект. Она никогда не позволит себе осуждать поступки других людей или вмешиваться в их жизнь. Она выйдет замуж только за того человека, который не будет пытаться контролировать ее и посягать на ее свободу;
  • Рыбы — девушка очень нежная, чувствительная и добродушная. Она никогда не будет навязывать свою компанию или пытаться помочь, если ее об этом не попросят. У него нет недостатка в поклонницах, он верит в любовь с первого взгляда.

Видео: значение и толкование имени Алена

Значение имени помогает узнать характер человека и дает возможность приоткрыть завесу тайны будущего. Если родители решат назвать дочь Аленой, то могут быть уверены, что эта девочка будет обладать необыкновенно яркими внешними данными, артистизмом и решительностью.

Если вы слышите имя Алёна, то кажется, что сейчас появится героиня сказки или круглощекая девочка с обложки плитки шоколада. Какая Алена на самом деле? Происхождение имени, его толкование помогут понять это. Имеет ли оно древнерусские корни, а может, так называли девушек в Древней Греции? Ответы на эти и другие вопросы будут даны ниже.

Происхождение и значение имени Алена

Близко по созвучию к Но, в отличие от него, имеющего древнегреческие корни, имя Алена впервые появилось в Древней Руси, причем еще во времена язычества. Считается, что именно так толковали славянские народы. Оно означает «огненный», «алый», «сияющий». Так переводится греческое слово «хеленос», от которого произошло «Елена», а затем «Алена». Происхождение имени, его тайну поможет раскрыть богиня Селена. Именно в честь нее так стали называть девушек в Древней Греции.

У греков Селена олицетворяла луну. Селена утонченная, загадочная, нежная. Так и Алена. Она взяла лучшие черты от своего прародителя. Это имя означает «солнечный». Итак, девушка, а потом девушка, женщина будет солнечным человеком, излучать тепло, дарить радость окружающим. «Огненный» в значении имени проявляется с годами.

Секрет превращения Елены в Алену

Что дало носительнице имя Алена? Тайна его появления раскрыта. Выяснилось, что славяне изменили имя Елена на Алена. Но становится интересно, как это произошло?

Когда это слово пришло на русскую землю в языческие времена, оно постепенно стало подвергаться различным языковым изменениям. Он пережил 2 лабиализации. Результатом первого стало имя Олена. Но в старославянском языке не было слов на букву «О» — и «О» трансформировалось в «А».

Алена: происхождение имени и его влияние на характер

Маленькая Аленушка радует родителей. Это милый ребенок, у которого веселый, добрый характер. Она любит сказки, мечтательна. В незнакомой компании часто держится особняком. Но ее энергия проявляется в знакомой обстановке. Здесь она душа компании. Девушка от природы доверчива. Если она узнает, что ее каким-то образом обманули, то непременно захочет отомстить. Об этом лучше не упоминать, так как Алена найдет для этого очень изощренный способ.

Здесь проявляются качества истинной богини-женщины. Недаром имя небожителя стало основой для имени наших Аленушек. Но происхождение есть происхождение, и влияние русского духа на девушек, называемых Алёнами, не могло не отложиться. Ведь какую бы сказку ни взяли, там героиню зовут так, добрая и очень искренняя. Поэтому славянские Аленушки отличаются таким же характером. Происхождение имени Алена, безусловно, наложило отпечаток на ее характер. Но потом к ее доверчивости и нежеланию прощать обиды добавилась большая доброта.

Девушка Алена, какая она

Однако Алена не на 100% сердечна к другим. Происхождение имени повлекло за собой определенную двойственность характера. Алена может пожалеть бездомного котенка, привести его к себе домой. Но если родители будут недовольны, она без сожаления выведет его обратно на улицу.

Что касается умственных способностей этих девушек, то они на должном уровне. Благодаря отличной памяти прекрасно запоминают материал, но не всегда доводят до конца уроки.

Алена — зависимый человек. Он быстро загорается, но так же быстро и остывает до нового. Сначала девушку интересует один круг, но его надолго не хватает. Она остывает к этому занятию и пробует что-то другое. Впоследствии ребенок поймет, что ему интереснее заниматься вышиванием, танцами, рисованием, пением. Девушкам с этим именем чужд физический труд. Поэтому известных спортсменов, носящих это имя, почти нет.

Взрослая Алена

Когда девочка взрослеет, становится артистичной, начинает мыслить творчески, ее мышление становится более гибким. Девушка учится контролировать себя. Она может влюбиться в одночасье, если захочет. Но может и разлюбить, если необходимо или в том случае, когда чувства влекут за собой негативные эмоции.

Но женщины Алены стараются не допустить этого, так как хорошо разбираются в людях. Их трудно кому-то склонить на свою сторону, они практически не поддаются влиянию. Они предпочитают самостоятельную работу.

противоположный пол

Вот среди кого авторитет Алены непререкаем. Женщина с этим именем всегда окружена мужским вниманием. Девушки добиваются этого не только благодаря своей привлекательной внешности и умению одеваться. Важную роль играет эмоциональная сдержанность, соседствующая с темпераментом, а также высокая самооценка. Окружающие мужчины проявляют интерес, обращая внимание на неординарность девушки.

Алена сама прекрасно разбирается в представителях сильного пола. Иногда ей достаточно одного взгляда на мужчину, чтобы определить, какой он на самом деле. Прежде чем влюбиться, она подумает. Ее разум неотрывно следует за ее чувствами, поэтому в данном случае это почти исключено.

Вряд ли душу девушки тронут лестные слова, она просто на них не попадется. Но если процесс ухаживания будет очень оригинальным, то он ее обязательно заинтересует. Об этом необходимо помнить тем, кто пытается добиться благосклонности Алены. Ведь такие девушки, женщины любят, чтобы все было по-особенному, не так, как у других.

Она будет счастлива с мужчиной со спокойным характером. Подходят Ярослав, Тимофей, Илья, Виталий. А вот Игорям, Владимирам и Русланам лучше даже не пытаться знакомиться с обладателями этого имени.

именины

Вот имя Алена, история его происхождения. Это основные черты характера девушек и женщин, которые его носят. Остается рассказать, когда носительницам этого красивого имени нужно будет испечь и позвать друзей в гости. Разумеется, они будут рассылать приглашения только известным людям, в чьей компании они чувствуют себя комфортно. Тем нужно быть готовыми надевать фраки и вечерние платья весной — 3 марта, летом — 17 июня или осенью — 4 сентября. Чтобы узнать, когда именины той или иной Алены, нужно взять дата из этих трех, ближайшая к ее дню рождения. Подарок должен быть оригинальным.

Алена слишком требовательна к партнеру и капризна в сексе. Она очень избирательна, она должна хорошо узнать мужчину, его психологию, чтобы перейти к близким отношениям. Ее часто мучают противоречия между желаниями и возможностью их удовлетворения. Она эротична и влюбчива, но при этом строго соблюдает внешние приличия. Из-за этого ее страсть часто остается неудовлетворенной, что может вызывать многочисленные комплексы. Она стремится к своему идеалу. Задолго до начала близких отношений она способна определиться с будущим партнером. Накапливающиеся в ней чувства и сила притяжения время от времени сметают все преграды, и, отбросив свои принципы, она поражает партнера темпераментностью и утонченностью. Несколько лет в юности она тратит на свое оздоровление, и в этот период ее жизнь протекает размеренно и рационально. Практичность и здравый смысл делают из нее скучного партнера, но необычайно надежного и выгодного. Она охотно поможет возлюбленному устроить свою жизнь, используя свое служебное положение. Ее щедрость, однако, граничит с благоразумием, позволяя Алене извлекать выгоду даже из, казалось бы, бескорыстной помощи. Он не станет делиться своим имуществом и тщательно все обдумает, прежде чем вступить в брак. Она ярко выраженный материалист, но с ней никогда не бывает сложностей. Она сначала стремится стать богатой, а потом, по возможности, счастливой. В любви ей немного не хватает воображения. Но она идеальная хозяйка. В зрелые годы у нее может быть одно-два любовных приключения — и то не потому, что ей это нужно, а больше из желания доказать себе и окружающим, что она еще достаточно молода, привлекательна. Алена может выходить замуж не один раз. Не любит флиртовать с мужчинами, в сексе выбирает спокойного и умеренного партнера, так как сама очень эмоциональна. Она должна быть лидером в семье. «Декабрьская» Алена более равнодушна к сексу, поэтому может часто менять партнеров, пока не найдет человека по душе. Она любит мужчин с развитым чувством юмора, инициативных, и не только в постели. Если семейная жизнь не соответствует ее представлениям, она может по собственной инициативе расстаться с супругом независимо от наличия детей. Она очень привлекательна, как никакая другая женщина, она может очаровать мужчину и увести его от жены. Любит оральный секс. Хотя Алена по натуре независима, в сексуальных отношениях предпочитает быть ведомой, чувствовать страсть своего партнера и подчиняться ей.

«Июль» Алене Юльевне лучше всего выйти замуж за «февральского» мужчину. Она влюбчива, и первый брак может закончиться разводом. Второй раз она выходит замуж не скоро, долго присматривается к мужчине: ошибок не повторяет.

Для удачного брака подходят Андрей Никитич, Валентин Григорьевич, Виталий Захарович, Владимир Викторович, Вячеслав Алексеевич, Наум Михайлович, Сергей Эдуардович, Юрий Владимирович.

Азарий Давидович, Александр Дмитриевич, Адриан Станиславович, Богдан Августович, Валериан Эммануилович, Вениамин Антонович, Георгий Юрьевич, Давыд Арнольдович, Илья Ростиславович, Леонид Анатольевич, Станислав Родионович, Степан Николаевич, Феликс Богданович не подходят.

Легенда полиции и кино Ford Crown Victoria уходит на пенсию

Код на дорогие автомобили. Коды гта сан андреас. Коды на деньги

Повторное использование текстильных отходов для производства волокнистой антибактериальной мембраны с фильтрующим потенциалом

1. Жагар Э., Чешарек Ю., Дринчич А., Ситар С., Шляпников И.М., Паховник Д. Количественное определение ПА6 и /или содержания ПА66 в полиамидосодержащих отходах. ACS Sustain. хим. англ. 2020;8:11818–11826. doi: 10.1021/acssuschemeng.0c04190. [CrossRef] [Google Scholar]

2. Станеску, М. Д. Современное состояние переработки бывших в употреблении текстильных отходов для достижения рубежа без отходов. Окружающая среда. науч. Опрос. Рез. 2021;28:14253–14270. doi: 10.1007/s11356-021-12416-9. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

3. Новотна К., Чермакова Л., Пивоконска Л., Кайтамл Т., Пивоконский М. Микропластики при очистке питьевой воды. Современные знания и потребности в исследованиях. науч. Общая окружающая среда. 2019; 667: 730–740. doi: 10.1016/j.scitotenv.2019.02.431. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

4. Пивоконский М., Чермакова Л., Новотна К., Пир П., Кайтамл Т., Янда В. Наличие микропластика в сырой и очищенной питьевой воде. науч. Общая окружающая среда. 2018; 643:1644–1651. doi: 10.1016/j.scitotenv.2018.08.102. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

5. Заявление о Седьмом заседании Комитета по чрезвычайным ситуациям Международных медико-санитарных правил (2005 г. ) в связи с пандемией коронавируса (COVID-19). [(по состоянию на 8 декабря 2021 г.)]. Доступно в Интернете: https://www.who.int/news/item/19.-04-2021-заявление-на-седьмом-совещании-международных-правил-здравоохранения-(2005)-чрезвычайного-комитета-относительно-коронавирусной-болезни-(covid-19)-пандемии

6. Дамаянти Д., Вуландари Л.А., Багаскоро А., Рианджану А., Ву Х.С. Возможности для технологии переработки текстиля. Полимеры. 2021;13:3834. doi: 10.3390/polym13213834. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

7. Хармсен П., Шеффер М., Бос Х. Текстиль для круговой моды: логика вариантов переработки. Устойчивость. 2021;13:9714. doi: 10.3390/su13179714. [CrossRef] [Google Scholar]

8. Патти А., Чикала Г., Асьерно Д. Экоустойчивость текстильного производства: утилизация отходов и текущая переработка в мире композитов. Полимеры. 2021;13:134. doi: 10.3390/polym13010134. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

9. Салас М. А., Перес-Асебо Х., Кальдерон В., Гонсало-Орден Х. Анализ и экономическая оценка использования переработанного полиамидного порошка в мансори минометы. Полимеры. 2020;12:2657. дои: 10.3390/polym12112657. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

10. Кумар Д., Зоу П.Х.В., Мемон Р.А., Алам М.Д.М., Санджаян Дж.Г., Кумар С. Анализ стоимости жизненного цикла строительных стен и изоляционных материалов. Дж. Билд. физ. 2019;43:428–455. doi: 10.1177/174425

57749. [CrossRef] [Google Scholar]

11. Цай З., Фарук М.А.А.Ф., Кизилтас А., Милевски Д., Наэбе М. Устойчивые легкие изоляционные материалы из текстильных отходов для автомобильной промышленности. Материалы. 2021;14:1241. дои: 10.3390/ma14051241. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

12. Сактхивел С., Мелезе Б., Эдаэ А., Абедом Ф., Меконнен С., Соломон Э. Отходы одежды из переработанного хлопка/полиэстера, термические и акустические свойства нетканых материалов воздушной укладки. Доп. Мат. науч. англ. 2020;2020:8304525. doi: 10.1155/2020/8304525. [CrossRef] [Google Scholar]

13. Сингх Р., Кумар Р., Ранджан Н., Пенна Р., Фратернали Ф. О возможности вторичной переработки устойчивых композитных конструкций в гражданском строительстве. Композиции Структура 2018; 184:704–713. doi: 10.1016/j.compstruct.2017.10.036. [Перекрестная ссылка] [Академия Google]

14. Шишкова А.О., Пер П., Экстайн Андиксова А., Йорданов И., Рихтер П. Циркуляционное обращение с полимерными отходами: переработка в тонкие волокна и их применение. Материалы. 2021;14:4694. doi: 10.3390/ma14164694. [Статья бесплатно PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

15. Мориам К., Савада Д., Ниеминен К., Хуммель М., Ма Ю., Риссанен М., Сикста Х. Навстречу регенерированным целлюлозным волокнам с высокой жесткостью. Целлюлоза. 2021; 28: 9547–9566. doi: 10.1007/s10570-021-04134-9. [Перекрестная ссылка] [Академия Google]

16. Хомем Н.К., Аморим М.Т.П. Синтез ацетата целлюлозы с использованием в качестве сырья текстильных отходов. Матер. Сегодня проц. 2020;31:S315–S317. doi: 10.1016/j.matpr.2020.01.494. [CrossRef] [Google Scholar]

17. Фокинк Д.Х., Андреус Дж., Рамос Л.П., Лукасик Р.М. Предварительная обработка остатков хлопкопрядения для оптимального ферментативного гидролиза: тематическое исследование с использованием зеленых растворителей. Продлить. Энергия. 2020; 145: 490–499. doi: 10.1016/j.renene.2019.06.042. [CrossRef] [Google Scholar]

18. Хуссейн З., Саджад В., Хан Т., Вахид Ф. Производство бактериальной целлюлозы из промышленных отходов: обзор. Целлюлоза. 2019;26:2895–2911. doi: 10.1007/s10570-019-02307-1. [CrossRef] [Google Scholar]

19. Юсеф С., Татарянц М., Тихоновас М., Ключининкас Л., Кукошюте С.И., Ян Л. Экологически чистая технология восстановления хлопкового волокна и полиэстера из текстильных отходов. Дж. Чистый. Произв. 2020;254:120078. doi: 10.1016/j.jclepro.2020.120078. [CrossRef] [Google Scholar]

20. Герцог Б., Кохан М.И., Местемахер С.А., Пагилаган Р.У., Редмонд К. Энциклопедия промышленной химии Ульмана. Wiley-ВЧ; Вайнхайм, Германия: 2013. Полиамиды. [Перекрестная ссылка] [Академия Google]

21. Шишкова А.О., Фрайова Й., Носко М. Переработка полиэтилентерефталата электропрядением для повышения эффективности фильтрации. Матер. лат. 2020;278:128426. doi: 10.1016/j.matlet.2020.128426. [CrossRef] [Google Scholar]

22. Dissanayake D.G.K., Weerasinghe D. Управление постпромышленными текстильными отходами: Текущее состояние и перспективы для Шри-Ланки. Дж. Текст. Инст. 2020; 112: 1804–1810. doi: 10.1080/00405000.2020.1845461. [CrossRef] [Google Scholar]

23. Topuz F., Abdulhamid M.A., Hardian R., Holtzl T., Szekely G. Нановолоконные мембраны, состоящие из микропористых полиимидов с внедренными металлоорганическими каркасами для улавливания летучих органических соединений. Пт АЖ. Опасность. Матер. 2022;424:127347. doi: 10.1016/j.jhazmat.2021.127347. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

24. Исык Т., Демир М.М. Индивидуальные электропряденые волокна из отходов полистирола для высокой адсорбции масла. Поддерживать. Матер. Технол. 2018;18:e00084. doi: 10.1016/j.susmat.2018.e00084. [CrossRef] [Google Scholar]

25. Зандер Н.Е., Свитсер Д., Коул Д.П., Гиллан М. Формирование нановолокон из чистых и смешанных потоков отходов с помощью электропрядения. Инд инж. хим. Рез. 2015;54:9057–9063. doi: 10.1021/acs.iecr.5b02279. [CrossRef] [Google Scholar]

26. Раджак А., Хапидин Д.А., Искандар Ф., Мунир М.М., Хайрурриджал К. Контролируемая морфология электроспряденных нановолокон из отходов пенополистирола для фильтрации аэрозолей. Нанотехнологии. 2019;30:425602. doi: 10.1088/1361-6528/ab2e3b. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

27. Баджио А., Доан Х.Н., Во П.П., Кинаши К., Сакаи В., Цуцуми Н., Фьюз Ю., Сангермано М. Хитозан-функционализированный переработанный полиэтилентерефталат Нановолокно Мембрана для устойчивого разделения нефти и воды по требованию. Глоб. Чал. 2021;5:2000107. doi: 10.1002/gch3.202000107. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

28. Лю Ю., Ли К., Мохидин М.М., Рамакришна С. Электроформование расплава: экологически чистый метод производства сверхтонких волокон. Эльзевир Инк .; Амстердам, Нидерланды: 2019 г.. [Google Scholar]

29. Наксуван П., Комарек М., Салачова Ю., Милитки Ю. Исследование переработанных нановолокон поли(этилентерефталата) из ПЭТ-бутылки. заявл. мех. Мат. 2016; 848:3–6. doi: 10.4028/www.scientific.net/AMM.848.3. [CrossRef] [Google Scholar]

30. Хейккиля П., Харлин А. Исследование параметров электроформования полиамида-6. Евро. пол. Дж. 2008; 44:3067–3079. doi: 10.1016/j.eurpolymj.2008.06.032. [CrossRef] [Google Scholar]

31. Ge Q., Ding L., Wu T., Xu G., Yang F., Xiang M. Влияние поверхностно-активного вещества на морфологию и размер пор полисульфоновой мембраны. Дж. Полим. Рез. 2018;25:21. doi: 10.1007/s10965-017-1410-5. [CrossRef] [Google Scholar]

32. Liu C., Hsu P.C., Lee H.W., Ye M., Zheng G., Liu N., Li W., Cui Y. Прозрачный воздушный фильтр для высокоэффективных БДМ 2,5 захват. Нац. коммун. 2015;6:6205. doi: 10.1038/ncomms7205. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

33. Зульфи А., Мунир М.М., Хапидин С.А., Раджак А., Эдикредня Д., Искандар Ф., Хайрурриаджал К. Фильтрующая среда из отходов электропряденого ударопрочного полистирольного волокна мембрана. Матер. Рез. Выражать. 2018;5:035049. doi: 10.1088/2053-1591/aab6ef. [CrossRef] [Google Scholar]

34. Liu Y., Li S., Lan W., Hossen M.A., Qin W., Lee K. Электропрядение антибактериальных и противовирусных поли(ε-капролактон)/зеин/Ag шариков -струнные мембраны и их применение в фильтрации воздуха. Матер. Сегодня Адв. 2021;12:100173. doi: 10.1016/j.mtadv.2021.100173. [CrossRef] [Google Scholar]

35. Ане Дж., Ли К., Круазе Э., Тан З. Нановолокна из ацетата целлюлозы методом электропрядения для фильтрации наночастиц в воздухе. Текс Рез. Дж. 2019;89:3137–3149. doi: 10.1177/0040517518807440. [CrossRef] [Google Scholar]

36. Шишкова А.О., Мосначкова К., Хруза Ю., Фрайова Ю., Опалек А., Бучкова М. , Козиц К., Пер П., Экстайн Андиксова А. Электропряденный полиэтилен композит терефталат/шелковый фиброин для фильтрации. Полимеры. 2021;13:2499. doi: 10.3390/polym13152499. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

37. Wang Z., Zhao C., Pan Z. Пористые волокнистые мембраны из поли(молочной кислоты) на нитях для фильтрации воздуха. Дж. Коллоид. Интерфейс наук. 2015; 441:121–129. doi: 10.1016/j.jcis.2014.11.041. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

38. Kim HJ, Choi D.I., Sung S.K., Lee S.H., Kim SJ, Kim J., Han B.S., Kim D.I., Kim Y. Экологически чистый поли(виниловый спирт) воздушный фильтр на основе нановолокна для эффективного улавливания твердых частиц. заявл. науч. 2021;11:3831. doi: 10.3390/app11093831. [CrossRef] [Google Scholar]

39. Орландо Р., Полат М., Афшари А., Джонсон М.С., Фоян П. Воздушные фильтры из электропрядения из нановолокна для частиц и газообразных загрязнителей. Устойчивость. 2021;13:6553. дои: 10.3390/su13126553. [CrossRef] [Google Scholar]

40. Sanyal A., Sinha-Ray S. Ультратонкие нановолокна PVDF для фильтрации взвешенных в воздухе твердых частиц: всесторонний обзор. Полимеры. 2021;13:1864. doi: 10.3390/polym13111864. [PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

41. Liu H., Huang J., Mao J., Chen Z., Chen G., Lai Y. Прозрачные антибактериальные воздушные фильтры из нановолокна с высокой эффективностью влагостойкость для надежного улавливания твердых частиц. iНаука. 2019;19:214–223. doi: 10.1016/j.isci.2019.07.020. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

42. Bergshoef M.M., Vancso G.J. Прозрачные нанокомпозиты с ультратонким армированием волокнами нейлона-6, полученными методом электропрядения. Доп. Матер. 1999; 11:1362–1365. doi: 10.1002/(SICI)1521-4095(199911)11:16<1362::AID-ADMA1362>3.0.CO;2-X. [CrossRef] [Google Scholar]

43. Пант Х.Р., Пандея Д.Р., Нам К.Т., Пэк В.И., Хонг С.Т., Ким Х.Ю. Фотокаталитические и антибактериальные свойства электроформованного нанокомпозитного мата TiO2/нейлон-6, содержащего наночастицы серебра. Дж. Азар. Матер. 2011;189: 465–471. doi: 10.1016/j.jhazmat.2011.02.062. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

44. Abdal-hay A., Pant H.R., Lim J.K. Супергидрофильная электроформованная нейлон-6/гидроксиапатитная мембрана для инженерии костной ткани. Евро. Полим. Дж. 2013; 49:1314–1321. doi: 10.1016/j.eurpolymj.2013.02.004. [CrossRef] [Google Scholar]

45. Джекман Дж., Юн Б.К., Ли Д., Чо Н. Составы нанотехнологий для антибактериальных свободных жирных кислот и моноглицеридов. Молекулы. 2016;21:305. doi: 10.3390/молекулы21030305. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

46. Долезалкова И., Янис Р., Бункова Л., Слободян П., Вича Р. Получение, характеристика и антибактериальная активность 1-моноацилглицерина адамантан-1-карбоновой кислоты. Дж. Пищевая биохимия. 2013; 34: 544–553. doi: 10.1111/jfbc.12005. [CrossRef] [Google Scholar]

47. Севчикова П., Каспаркова В., Хауэрландова И., Гумпочек П., Куцекова З., Бунькова Л. Состав, антибактериальная активность и цитотоксичность микроэмульсий 1-моноацилглицерина. Евро. J. Науки о липидах. Технол. 2014; 116:448–457. doi: 10.1002/ejlt.201300171. [Перекрестная ссылка] [Академия Google]

48. Хауэрландова И., Лоренцова Е., Бунька Ф., Навратил Й., Янечкова К., Бунькова Л. Влияние жира и моноацилглицеролов на рост спорообразующих бактерий в плавленых сырах. Междунар. Дж. Пищевая микробиология. 2014; 182–183:37–43. doi: 10.1016/j.ijfoodmicro.2014.04.027. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

49. Janis R., Klasek A., Krejci J., Bobalova J. Влияние некоторых комплексов хрома на скорость превращения реакции глицид-жирная кислота. Тенсайд сурфакт. Дет. 2005; 42:44–48. дои: 10.3139/113.100250. [CrossRef] [Google Scholar]

50. Sutter M., Dayoub W., Métay E., Raoul Y., Lemaire M. Синтез 1-O-алкил(ди)глицериновых эфиров из метиловых эфиров и триглицеридов двумя путями: Каталитическое восстановительное алкилирование и переэтерификация/восстановление. Зеленый хим. 2013; 15: 786–797. doi: 10.1039/c3gc36907b. [CrossRef] [Google Scholar]

51. Zhu M., Han J., Wang F., Shao W., Xiong R., Zhang Q., Pan H., Yang Y., Samal S.K., Zhang F., и другие. Мембраны из электропряденных нановолокон для эффективной фильтрации воздуха. макромол. Матер. англ. 2017;302:1600353. doi: 10.1002/mame.201600353. [Перекрестная ссылка] [Академия Google]

52. Al-Attabi E., Dumée L.F., Kong L., Schütz J.A., Morsi Y. Высокоэффективные поли(акрилонитриловые) электроформованные нановолоконные мембраны для фильтрации переносимых по воздуху наноматериалов. Доп. англ. Матер. 2017;20:1700572. doi: 10.1002/адем.201700572. [CrossRef] [Google Scholar]

53. Хес Л. Неразрушающее определение параметров комфорта при маркетинге функциональной одежды. [(по состоянию на 23 декабря 2021 г.)]; Indian J. Fiber Text Res. 2008 33: 239–245. Доступно в Интернете: http://nopr.niscair.res.in/bitstream/123456789/2012/1/IJFTR%2033%283%29%20239-245.pdf [Google Scholar]

54. Раззак А., Тесинова П., Хес Л., Салакова Дж., Абид Х.А. Исследование гидростатической стойкости и тепловых характеристик многослойных водонепроницаемых дышащих тканей. Волокно. Полим. 2017; 18:1924–1930. doi: 10.1007/s12221-017-1154-1. [CrossRef] [Google Scholar]

55. Ирфан М., Уддин З., Ахмад Ф., Рашид А., Кадир М.Б., Ахмад С., Айкут Ю., Назир А. Экологичная разработка электропряденных антибактериальных мембран, содержащих серебро наночастицы. Дж. Инд. Техас 2021:1–14. дои: 10.1177/15280837211012590. [CrossRef] [Google Scholar]

56. Феррер С., Рамон Д., Мугерса Б., Марко А., Мартинес А. Влияние оливкового порошка на рост и ингибирование Bacillus cereus. Фодборн Патог. Дис. 2009; 6: 33–37. doi: 10.1089/fpd.2008.0133. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

57. Захиби Э., Бабаи А., Шахрампур Д., Араб-Бафрани З., Миршахиди К. С., Маджиди Х. Дж. Легкий и быстрый синтез на месте хитозан-ZnO нано- гибриды, применимые в медицинских целях; Новое сочетание биоминерализации, ультразвука и биобезопасного морфологически проводящего агента. Междунар. Дж. Биол. макромол. 2019;15:107–116. doi: 10.1016/j.ijbiomac.2019.01.224. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

58. Molecular Probes, Inc. Molecular Probes, Invitrogen Detection Technologies. [(по состоянию на 17 мая 2021 г.)]. Доступно в Интернете: https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets/LSG/manuals/mp07007.pdf

59. Джаббари М., Скрифварс М., Окессон Д., Тахерзаде М.Дж. Новый растворитель для полиамида 66 и его применение для изготовление ткани с однополимерным композитным покрытием. Междунар. Дж. Полим. науч. 2018;2018:6235165. doi: 10.1155/2018/6235165. [Перекрестная ссылка] [Академия Google]

60. Charlet L., Mathot V., Devaux J. Кристаллизация и растворение систем полиамид-6-вода под давлением. Полим. Междунар. 2010;60:119–125. doi: 10.1002/pi.2920. [CrossRef] [Google Scholar]

61. Пападопулу Э.Л., Пигнателли Ф., Маррас С., Марини Л., Дэвис А., Афанассиу А., Байер И.С. Композитные пленки нанопластин нейлон 6,6/графем, полученные из нового растворителя. RSC Adv. 2016;6:6823–6831. doi: 10.1039/C5RA23647A. [CrossRef] [Google Scholar]

62. Chang C.W., Liou G.S., Hsiao S. H. Высокостабильные анодно-зеленые электрохромные ароматические полиамиды: синтез и электрохромные свойства. Дж. Матер. хим. 2007; 17:1007–1015. дои: 10.1039/B613140A. [CrossRef] [Google Scholar]

63. Матулявичюс Дж., Клюцинискас Л., Мартузявичюс Д., Круглый Э., Тихоновас М., Балтрусайтис Дж. Дизайн и характеристика электроформованного полиамидного нановолоконного материала для приложений фильтрации воздуха. Дж. Наноматер. 2014;2014:859656. doi: 10.1155/2014/859656. [CrossRef] [Google Scholar]

64. Мори С. Эксклюзионная хроматография полиэтилентерефталата с использованием гексафтор-2-пропанола в качестве подвижной фазы. Анальный. хим. 1989; 61: 1321–1325. doi: 10.1021/ac00188a005. [Перекрестная ссылка] [Академия Google]

65. Шишкова А.О., Макова Е., Берек Д. Жидкостная хроматография в предельных условиях десорбции 4 разделения смесей, содержащих малорастворимые полимеры. Евро. Полим. Дж. 2012; 48: 155–162. doi: 10.1016/j.eurpolymj.2011.10.016. [CrossRef] [Google Scholar]

66. Yu Y., Ma R., Yan S., Fang J. Получение многослойных нановолокнистых мембран из нейлона-6 методами электропрядения и горячего прессования для фильтрации красителей. RSC Adv. 2018;8:12173. doi: 10.1039/C8RA01442F. [Перекрестная ссылка] [Академия Google]

67. Parlayici S., Avci A., Pehlivan E. Электропрядение полимерного нановолокна (нейлон 6,6/оксид графема) для удаления Cr (VI): Синтез и адсорбционные исследования. Дж. Анал. науч. Технол. 2019;10:13. doi: 10.1186/s40543-019-0173-5. [CrossRef] [Google Scholar]

68. Разавизаде Б.М., Ниазманд Р. Характеристика электропряденных волокон из смеси полиамида-6/прополиса. Гелион. 2020;6:e04784. doi: 10.1016/j.heliyon.2020.e04784. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

69. Аббаси А., Насеф М.М., Такеши М., Фариди-Маджиди Р. Электропрядение растворов нейлона-6,6 в нановолокна: отношения реологии и морфологии. Подбородок. Дж. Полим. науч. 2014; 32: 793–804. doi: 10.1007/s10118-014-1451-8. [CrossRef] [Google Scholar]

70. Черемисинов Н. Справочник по промышленным растворителям. 2-е изд. Марсель Деккер Инк .; Нью-Йорк, штат Нью-Йорк, США: 2008. стр. 51–53. [Google Scholar]

71. Hou Q., Zhen M., Qian H., Nie Y., Bai X., Xia T., Rehman M.L.U., Li Q., ​​Ju M. Переработка и каталитическая деградация пластиковых отходов. Представитель Cell Phys. науч. 2021;2:100514. doi: 10.1016/j.xcrp.2021.100514. [Перекрестная ссылка] [Академия Google]

72. Крифа М., Юань В. Морфология и распределение размеров пор электропрядных и центробежных мембран из нановолокна из нейлона-6. Текс Рез. Дж. 2015; 86: 1294–1306. doi: 10.1177/0040517515609258. [CrossRef] [Google Scholar]

73. Чжэн Дж.Ю., Чжуан М.Ф., Юй З.Дж., Чжэн Г.Ф., Чжао Ю., Ван Х., Сунь Д.Х. Влияние поверхностно-активных веществ на диаметр и морфологию ультратонких электроформованных нановолокон. Дж. Наноматер. 2014;2014:689298. doi: 10.1155/2014/689298. [Перекрестная ссылка] [Академия Google]

74. Пер П., Седларикова Дж., Джаналикова М. , Куцерова Л., Плева П. Новая поливинилбутиральная/моноацилглицероловая нановолокнистая мембрана с противообрастающей активностью. Материалы. 2020;13:3662. doi: 10.3390/ma13173662. [PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

75. Пир П., Джаналикова М., Седларикова Ю., Зеленкова Ю., Плева П., Филипп П., Опалькова Сиськова А. Антибактериальные фильтрационные мембраны на основе нановолокон PVDF-co-HFP с добавлением среднецепочечных 1-моноацилглицеролов. Приложение ACS Матер. Интерфейсы. 2021;13:41021–41033. doi: 10.1021/acsami.1c07257. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

76. Европейский комитет по стандартизации. Европейский стандарт EN 1822 Высокоэффективные воздушные фильтры (EPA, HEPA и ULPA) CEN; Брюссель, Бельгия: 2009 г. [(по состоянию на 28 октября 2021 г.)]. Доступно в Интернете: http://www.gttlab.com/uploads/soft/161025/EN1822-1-2009Highefficiencyairfilters(EPA,HEPAandULPA)Part1Classification,performance.pdf [Google Scholar]

77. Sambaer W., Zatloukal M. , Киммер Д. Трехмерное моделирование фильтрации воздуха для фильтров на основе нановолокна в диапазоне сверхмелких частиц. хим. англ. науч. 2012;82:299–311. doi: 10.1016/j.ces.2012.07.031. [CrossRef] [Google Scholar]

78. Ан А.К., Ли Э.Дж., Го Дж., Чон С., Ли Дж.Г., Гаффур Н. Улучшенный перенос пара при мембранной дистилляции с помощью функционализированных углеродных нанотрубок, закрепленных в электропряденых нановолокнах. науч. 2017;7:41562. doi: 10.1038/srep41562. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

79. Zhang H., Wei H., Cui Y., Zhao G., Feng F. Антибактериальные взаимодействия монолаурина с обычно используемыми противомикробными препаратами и пищевыми компонентами. Дж. Пищевая наука. 2009 г.;74:M418–M421. doi: 10.1111/j.1750-3841.2009.01300.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

80. Плетнев П., Остерман И., Сергиев П., Богданов А., Донцова О. Руководство по выживанию: Escherichia coli в стационарной фазе. [(по состоянию на 28 октября 2021 г. )]; Acta Nat. 2015 7: 22–33. doi: 10.32607/20758251-2015-7-4-22-33. Доступно в Интернете: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4717247/pdf/AN20758251-27-022.pdf [бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

81 , Кришнамурти В.Р., Нийоншути И.И., Чен Дж., Ван Ю. Новый метод анализа для оценки роста бактерий с помощью ридеров для микропланшетов. ПЛОС ОДИН. 2021;16:e0245205. doi: 10.1371/journal.pone.0245205. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

82. Harkes G., Feijen J., Dankert J. Адгезия Escherichia coli к ряду полиметакрилатов, различающихся по изменению и гидрофобности. Биоматериалы. 1991; 12: 853–860. doi: 10.1016/0142-9612(91)

-K. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

83. Тан Ю.-В. Молекулярная медицинская микробиология. 2-е изд. Том 1. Академическая пресса; Кембридж, Массачусетс, США: 2015. Глава 5. [Google Scholar]

Гомолог протеинкиназы Mζ поддерживает контекстно-аверсивную память и лежит в основе долговременной фасилитации у наземных улиток Helix 9.

0001

Введение

Было показано, что конститутивно активный фрагмент атипичной протеинкиназы Cζ протеинкиназы Mζ млекопитающих (PKMζ) играет критическую роль в сохранении долговременной потенциации (LTP) в гиппокампе млекопитающих (Ling et al. ., 2002; Pastalkova et al., 2006), а также в нескольких формах памяти млекопитающих (Serrano et al., 2005; Shema et al., 2007; Gámiz and Gallo, 2011; недавний обзор Glanzman, 2013). Способность PKMζ поддерживать LTP и память обусловлена ​​его уникальной структурой в виде автономно активной изоформы протеинкиназы C (Sacktor et al., 19).93; Сактор, 2011). Белок PKMζ постоянно увеличивается в области CA1 гиппокампа во время LTP, и это увеличение коррелирует со степенью и продолжительностью синаптической потенциации во время поддержания LTP (Osten et al., 1996). Персистентная активность PKMζ необходима и достаточна для поддержания синаптической LTP (Ling et al., 2002) и хранения долговременной памяти (Pastalkova et al., 2006; Shema et al., 2011). Недавно показанная локализация PKMζ в постсинаптических плотностях и шипиках (Hernández et al., 2013) подтверждает ранее предложенную (Sajikumar et al., 2005; Sacktor, 2011) модель «синаптической автомаркировки» для объяснения того, как эта киназа хранит и поддерживает терминальная память.

Недавние находки в модельных организмах беспозвоночных показывают эволюционно законсервированную роль атипичных PKC, гомологичных PKMζ млекопитающих, в приобретении и поддержании памяти (Drier et al., 2002; Cai et al., 2011). Атипичная РКС была клонирована из нервной системы Aplysia (Bugie et al., 2009). Этот Aplysia PKC, PKC Apl III, может подвергаться протеолитическому расщеплению кальпаином с образованием фрагмента PKM, PKM Apl III. Также показано, что 5-HT, по-видимому, активирует PKM Apl III в моторных нейронах Aplysia (Villareal et al., 2009). Недавно было продемонстрировано, что долговременная память у Aplysia поддерживается посредством петли положительной обратной связи, включающей PKM Apl III-зависимое фосфорилирование белка (Cai et al. , 2011).

В настоящем исследовании, используя в качестве животной модели филогенетически развитую легочную наземную улитку Helix , которая способна демонстрировать ассоциативные формы обучения и хорошо описала нейронные цепи, лежащие в основе ее поведения (Balaban, 2002), мы получили исследовали: (а) существует ли гомолог PKMζ в нейральном транскриптоме этого животного; (б) где эта молекула находится в нервной системе; в) блокирует ли ингибитор ПКМζ долговременную (дни) ассоциативную аверсивную память в поведенческих экспериментах; и (d) блокирует ли ингибитор PKMζ долговременные синаптические изменения (часы) в идентифицированных премоторных интернейронах, запускающих реакции отдергивания.

Методы

Эксперименты проводились на взрослых улитках Helix lucorum L . (крымская популяция) массой 20–30 г. Всех животных содержали в террариумах при температуре 22 ± 2°С, в цикле свет/темнота 12:12. Улиток содержали в активном состоянии не менее 2 нед перед экспериментом во влажной среде и регулярно кормили капустой. За два дня до тренировки улиток лишали пищи. Каждая улитка использовалась только в одной серии экспериментов. При общей сумме баллов 43 животных, которые выдержали процедуры обучения и тестирования и были в хорошем состоянии по крайней мере через неделю после окончания эксперимента, использовали для статистической оценки в поведенческих экспериментах. Для электрофизиологических экспериментов использовали изолированную центральную нервную систему (ЦНС). Подробности подготовки и идентификации нейронов приведены в другом месте (Иерусалимский и др., 19).92; Балабан, 2002; Малышев, Балабан, 2002). Перед изоляцией ЦНС была сделана инъекция холодного изотонического раствора MgCl 2 , чтобы свести к минимуму боль. Экспериментальные процедуры соответствовали Руководству по уходу и использованию лабораторных животных, опубликованному Национальным институтом здравоохранения, а протокол был одобрен Этическим комитетом Института высшей нервной деятельности и нейрофизиологии РАН.

Поведенческие эксперименты

Аппаратура и анализ поведения

В экспериментальной установке (Контекст 1) улитка была привязана к своей раковине таким образом, что позволяла ей ползать по шару, который свободно вращался в водном растворе, содержащем 0,01% NaCl (рис. 3А, правая вставка). Шар был покрыт алюминиевой фольгой, чтобы замкнуть электрическую цепь между ногой животного и угольным электродом, помещенным в воду. Электрошок наносили с помощью тока 1–4 мА в течение 1 с через макроэлектрод, прикладываемый вручную к дорсальной поверхности стопы улитки (рис. 3А). Точечные механические стимулы применялись с калиброванными волосками фон Фрея, что позволяло оказывать давление в диапазоне от 6 (оценивается как слабое) до 68 г/мм 9 .0676 2 (оценивается как вредный). После нескольких экспериментальных серий были выбраны поведенческая реакция, интенсивность (25 г/мм 2 ) и место тактильной стимуляции. Отдергивание омматофоров (задних щупалец) в ответ на выбранную интенсивность тактильной стимуляции ростральной части кожи в 4–5 мм позади задних щупалец было на уровне 10–30% от максимального у нормальных животных. В пилотных экспериментах было показано, что ответы на такое тестовое раздражение сенсибилизируются после болевых раздражителей, и эта часть кожи стопы была выбрана в качестве эталонного места тактильной стимуляции. Исследователь, не знакомый с историями экспериментов с животными, применил тактильные раздражители к коже улитки и записал на видео отдергивание щупалец. Чтобы количественно оценить и усреднить результаты, мы проанализировали в автономном режиме расстояние между кончиком и основанием щупальца и оценили амплитуду отдергивания в процентах от начальной длины щупальца в каждом испытании.

Протокол обучения и напоминания

Перед обучением каждую улитку ежедневно в течение 2 дней в течение 30 минут подвергали воздействию экспериментальной установки. Затем для всех групп была проведена первая тестовая сессия (Т) (первый день, рис. 3А). Слепое тестирование проводилось для каждой улитки в двух чередующихся контекстах (Контекст 1 представлял собой плавающий в воде мяч, а Контекст 2 представлял собой плоское стекло, похожее на стекло террариума, в котором улитки содержались между сеансами эксперимента, см. вставку на рисунке 3A). . После получения предварительных оценок все группы улиток получали пять ударов током в день с интервалом 20–30 минут в течение 10 дней только в контексте 1. Величина тока подбиралась индивидуально для каждой улитки таким образом, чтобы в ответ на толчок наблюдалось полное отдергивание передней части тела. Во время тренировки тестирование не проводилось. На вторые сутки после завершения тренировки (животных кормили в период покоя в террариуме) сравнивали реакцию на одни и те же тестовые тактильные раздражители (Т1, рис. 3А) во всех параллельных группах улиток. Порядок, в котором животных тестировали в каждом контексте, был случайным.

На следующий день после второго тестового сеанса (T1) одной группе улиток (G2) напомнили о тренировке, поместив улиток на 20 минут (напоминание) в тот же контекст 1, где они ранее подвергались электрошоку (на шаре, рис. 3А). За двадцать минут до напоминания улиткам вводили либо ZIP, либо взбитый ZIP (scrZIP, 0,4 мг в 0,2 мл физиологического раствора плюс 0,5 мл физиологического раствора для выравнивания объема на улитку весом 20–30 г). На второй день после сеанса инъекций наркотиков или «напоминания» был проведен третий сеанс тестирования (Т2) для всех параллельных групп в двух разных контекстах (подробный протокол в Balaban et al. , 2011, 2014).

Лекарства и инъекции

ZIP (TOCRIS) и скремблированный ZIP растворяли в стерильном физиологическом растворе Рингера [в мМ: 100 NaCl, 4 KCl, 7 CaCl 2 , 5 MgCl 2 и 10 Трис-HCl буфер (pH 7.8)]. Предполагаемые конечные концентрации ZIP и scrZIP в гемолимфе свободно ведущих себя животных составляли 2 × 10 -6 M. Выбранные концентрации были эффективны в наших электрофизиологических экспериментах на улитках без явных токсических эффектов. Для расчета конечных концентраций в нервной системе каждый грамм массы тела улитки оценивали как 1 мл.

Препараты для инъекций in vivo были приготовлены в деионизированной воде в виде исходного раствора с концентрацией, превышающей требуемую в 28,6 раз. Поскольку улитки, использованные в этих опытах, были сопоставимы по массе (20 г ± 2), в гемоцель вводили 0,7 мл растворов препаратов, чем достигалась необходимая концентрация в организме животных (0,7 мл × 28, 6 = 20 мл).

Интрацеломические инъекции выполняли тонкой иглой через нечувствительный участок кожи стопы, обычно скрытый под панцирем. Во время инъекций улитки прекращали движение и опускали омматофоры, что, скорее всего, было связано с поднятием раковины экспериментатором. Однако у улиток никогда не было общего ухода в раковину.

Электрофизиологические эксперименты

Внутриклеточные записи изолированных мозговых ганглиев были сделаны с использованием стандартных электрофизиологических методов. Выявленные премоторные интернейроны отведения париетальных ганглиев (Pa3 и Pa2; Balaban, 2002) проникали острыми стеклянными микроэлектродами, наполненными 2 М раствором ацетата калия (сопротивление кончика 15–20 МОм). Кожные и кишечные нервы стимулировали пластиковыми присосками с импульсами длительностью 3 мс. Интенсивность стимулов в каждом эксперименте регулировали таким образом, чтобы вызвать сложные ВПСП амплитудой 5–8 мВ. Внутриклеточные сигналы записывали с помощью предусилителей (Axoclamp 2B, Axon Instruments, Калифорния, США), оцифровывали и сохраняли на компьютере (аналого-цифровой преобразователь Digidata 1400A и программное обеспечение Axoscope 10. 0, оба производства Axon Instruments, Калифорния, США).

В первой серии опытов (гомосинаптическая фасилитация) использовали тестовую стимуляцию кожного нерва, а потенцирование вызывали тетанизацией того же кожного нерва, связанной с аппликацией серотонина в ванне. Экспериментальный протокол начинали с пяти тестовых стимулов с 10-минутным межстимульным интервалом с последующей тетанизацией (три высокочастотных 10 Гц серии стимулов, длительность каждой серии 1 мин, интервал между сериями 5 мин, амплитуда тестового стимула увеличена в 10 раз). с последующим посттетаническим тестированием с одиночными стимулами нормальной амплитуды и 10-минутным межстимульным интервалом в течение нескольких часов. Серотонин наносили на экспериментальную ванну непосредственно перед каждой серией тетанизации до конечной концентрации ванны 10 9 .0676 −5 М с вымыванием через 4 мин после каждой серии тетанизации. Через 90 минут после последней серии тетанизации поток физиологического раствора (0,1 мл/мин) в перфузионной системе отключали и применяли маточный раствор ZIP или scrZIP до конечной концентрации ванны 2 × 10 −6 M.

Во второй серии опытов (гетеросинаптическая фасилитация) использовали также пробную стимуляцию второго кожного нерва, но потенцирование вызывалось тетанизацией кишечного нерва, связанной с аппликацией серотонина в экспериментальную ванну. В остальном экспериментальный протокол был идентичен описанному выше протоколу гомосинаптической фасилитации.

В третьей серии (искусственный синапс) использовали два внутриклеточных электрода, один для записи, другой для стимуляции. Перед записью соматы тех же премоторных теменных гигантских интернейронов были синаптически изолированы путем разрезания нейропиля ганглиев на расстоянии 400 микрометров от сомы, где начинается разветвление одиночного гигантского нейрита этих клеток (наши неопубликованные наблюдения). Все синаптические входы париетальных интернейронов отведения содержатся в нейропиле париетальных ганглиев (Balaban, 2002) и вырезаются в этом типе препарата, что уменьшает возможные полисинаптические эффекты аппликаций передатчиков. Входное сопротивление ячейки контролировали с помощью импульсов тока гиперполяризации фиксированной амплитуды длительностью 2 с. В этой серии глутамат (Glu) растворяли до концентрации 2 × 10 -3 М в растворе Рингера с 0,15% витального красителя Fast Green и всасывали в стеклянную пипетку с наконечником ~1 мкм. Аликвоты хранили в морозильной камере и нагревали при комнатной температуре не менее 30 мин перед использованием. Аппликации Glu на нервную мембрану производили с помощью пикоинъектора (PV830 PicoPump, WPI) и давления 70–80 фунтов на квадратный дюйм, регулируя минимальную длительность импульса для получения стабильных ответов в нейроне с амплитудой 3–10 мВ. Препараты в этой серии экспериментов перфузировали (2 мл/мин, объем ванны 1,5 мл) с помощью аспирационной трубки диаметром 1 мм, расположенной рядом с регистрируемой клеткой, и пипетки с Glu, таким образом вымывая Glu менее чем за 0,5 с после аппликации. Это время оценивалось визуально с помощью Fast Green, нанесенного вместе с Glu. После первых 15 аппликаций Glu с интервалом 1/мин трижды добавляли серотонин в конечной концентрации ванны 10 9 .0676 -5 М в течение 10 мин, затем 10 мин вымывание. За все это время клей наносился неоднократно. ZIP добавляли через 90 минут после окончания последней аппликации серотонина. После применения ЗИП перфузионная система была переведена на замкнутый цикл.

Транскриптомный анализ

Транскриптом Helix lucorum taurica L . был получен из восьми нервных систем, обработанных отдельно на Illumina HiSec 2000. Мы экстрагировали РНК из каждого образца, используя микронабор RNAaquous™ (Ambion, Остин, Техас, США). Качество и количество РНК оценивали с помощью биоанализатора Agilent 2100 (Agilent Technologies, Калифорния, США). Образцы РНК впоследствии использовали для создания библиотеки кДНК и секвенирования Illumina. ДНК обрабатывали, как описано в Руководстве по подготовке образцов ДНК TruSeq (Illumina). Библиотеку количественно определяли с помощью флуориметрии с Qubit (Invitrogen) и ПЦР в реальном времени и разбавляли до конечной концентрации 8 пМ. Разбавленную библиотеку кластеризовали на проточной кювете с парными концами (TruSeq PE Cluster Kit v3) с использованием прибора cBot и секвенировали с использованием секвенатора HiSeq2000 с комплектом TruSeq SBS Kit v3-HS с длиной считывания 101 п.н. с каждого конца. Были сконструированы библиотеки парных концов со вставками длиной 250 п.н. с длиной чтения 100 + 100 п.н. и общим числом прочтений ~200 млн. Сборка транскриптома была сконструирована de novo с использованием программного обеспечения Trinity (Grabherr et al., 2011). Множественное выравнивание последовательностей (MSA) было построено с помощью онлайн-инструмента DIALIGN-PFAM с параметрами по умолчанию (Al Ait et al., 2013).

Иммуногистохимия

Были выбраны два коммерчески доступных антитела к PKMζ: sc-216 и sc-11781 (Santa Cruz Biotechnology). Оба были получены в высококонсервативной (С-концевой) части PKMζ (см. Рисунок 1). Иммунохимической процедуре подвергли головной мозг восьми взрослых улиток, а также четыре индивидуально идентифицированных интернейрона удаления, механически изолированных с первичным нейритом. Мозг фиксировали в 4% параформальдегиде в 0,1 PBS. Продолжительность фиксации составляла 2 ч при 4°С с последующими отмывками в PBS. Мозг помещали в парапласт и делали срезы толщиной 10 мкм. Перед инкубацией с раствором первичных антител срезы промывали блокирующим раствором в течение 2 ч. Блокирующий раствор содержал 0,5% Triton X-100, 0,01% азида натрия, 5% нормальной козьей сыворотки (Sigma) и 1% BSA (Sigma) в PBS. Процедура окрашивания: первичное антитело – 24–48 ч; мыть 2 ч; вторичное антитело на 24 ч; мыть 2 ч. Вторичное антитело представляло собой конъюгированное антитело козла Alexa-488 против кролика (sc-216) или козье антитело Alexa-546 против мыши (sc-17781). Наконец, секции были встроены в Aqua Poly/Mount (Polyscience). Культивируемые нейроны обрабатывали в виде цельного препарата. Препараты просматривали на микроскопе AxioPlan (Zeiss, Германия) с программой анализа визуальных изображений KS-300. Для проверки специфичности иммунного окрашивания первичную антисыворотку не использовали. В этой серии не было окрашивания.

Рисунок 1. Гомология Helix атипичной PKC с PKMζ разных животных . Множественное выравнивание последовательностей (MSA) недавно частично секвенированной предполагаемой атипичной PKC (будет доступна в GenBank под регистрационным номером KM875662) из ​​центральной нервной системы (ЦНС) Helix lucorum с предполагаемыми гомологами. Этот MSA был построен с помощью онлайн-инструмента DIALIGN-PFAM с параметрами по умолчанию (Al Ait et al., 2013). Аминокислоты, консервативные в выровненных последовательностях, заштрихованы. Домены обозначаются именами над регионами. Все последовательности из Genbank, инвентарные номера указаны в правом углу рисунка. Для этого выравнивания были транслированы все нуклеотидные последовательности in silico с соответствующим ORF. Последовательность Helix демонстрирует высокую гомологию с последовательностями Lymnaea (идентичность 94% аа) и Aplysia (идентичность 91% аа) (BLASTP). Сайт PDK – сайт фосфоинозитид-зависимой киназы; Helix — недавно секвенированная предполагаемая PKC из ЦНС Helix lucorum ; Lymnaea—gi|327343821, Lymnaea stagnalis мРНК PKC для атипичной протеинкиназы C; Aplysia—gi|325297018, Aplysia californica атипичная протеинкиназа C (LOC100533284), мРНК; Лоттия — ESO89925.1, 2508375061 Серин/треониновая протеинкиназа Lottia gigantea: sca_46; Drosophila—gi|442623742, Drosophila melanogaster атипичная протеинкиназа С, изоформа М; Rattus—gi|11968080, Rattus norvegicus протеинкиназа C дзета-типа; Homo—gi|338968874, Homo sapiens протеинкиназа C дзета-типа изоформа 3.

Статистическая оценка данных

Слепое тестирование проводилось через разные промежутки времени, как показано на вставке к рисунку 3. Сравнение между группами проводилось только для параллельных группы животных в одной экспериментальной серии. Мы использовали непараметрический критерий суммы рангов Манна-Уитни для сравнения производительности двух групп улиток, а критерий знакового ранга Вилкоксона использовали для сравнения производительности той же группы. На всех рисунках указаны существенные различия в показателях.

Результаты

Helix Гомология последовательности с Aplysia и PKMζ млекопитающих вставки были сконструированы с длиной прочтений 100 + 100 п.н. и всего ~200 млн прочтений. Сборка транскриптома была сконструирована de novo с использованием программного обеспечения Trinity (Grabherr et al., 2011). В результате поиска было найдено много описанных генов моллюсков, и среди них гомолог Aplysia атипичная ПКС с высокой идентичностью аминокислотной последовательности (рис. 1). Атипичная последовательность PKC Helix показала высокую гомологию с последовательностями моллюсков Lymnaea (94% аа) и Opistobranch Aplysia (91% аа идентичность).

Локализация PKMζ в нервной системе

Наш следующий шаг был направлен на анализ распределения PKMζ в нервной системе Helix . Мы выбрали два коммерчески доступных антитела (sc-216 и sc-11781), оба из которых продуцируются высококонсервативной (С-концевой) частью PKMζ (см. Рисунок 1), и иммунохимически проанализировали распределение PKMζ-реактивных сайтов. В основном, результаты были сходными с обоими используемыми антителами. Оказалось, что небольшое количество иммунореактивной флуоресценции можно увидеть в цитоплазме большинства нейронов, включая гигантские париетальные интернейроны, используемые в электрофизиологических экспериментах (звездочки на рисунках 2A, B, F). В крупных нейритах этих клеток флуоресценции не наблюдалось (стрелки на рис. 2Б, Е), в то время как в областях нейропиля наблюдались клубочковидные участки с интенсивной специфической флуоресценцией мелких пятен и нейритоподобных конгломератов (рис. 2В, Г). Полученные результаты позволяют предположить, что PKMζ-иммунореактивные молекулы присутствуют в нейронах H. lucorum , как в телах клеток, так и в местах, где предполагается наличие большинства синапсов. В культивируемых гигантских париетальных нейронах иммунореактивность не наблюдалась в первичных нейритах (стрелка на рис. 2Е), в то время как иммунореактивный продукт в теле клетки обнаруживался в мелких гранулах (рис. 2Е).

Рисунок 2. Характер иммунореактивности PKMζ в срезах размером 10 мкм головного мозга Helix . Распределение PKMζ в нервной системе Helix выявляли с помощью коммерчески доступных антител к высококонсервативным сайтам PKMζ. (A–D) Окрашивание антителом sc-216, E–F : Окрашивание антителом sc-17781. (А) Париетальные ганглии. Стрелки указывают на иммунореактивные тракты, звездочки на (A, B) и (F) отмечают клеточные тела гигантских париетальных интернейронов для поведения отказа. (B) Та же секция при большем усилении. Стрелки указывают на первичные нейриты интернейронов (иммунореактивность отсутствует). (C) Иммунореактивные элементы в нейропиле плевральных ганглиев. (Г) Иммунореактивные варикозы в нейропиле париетальных ганглиев. (E) Культивированный гигантский теменной интернейрон. (F) Срез париетальных ганглиев, звездочками отмечены тела гигантских париетальных интернейронов. В (E) и (F) стрелки указывают на первичные нейриты. Масштабная линейка 100 мкм.

Поведенческие эксперименты

В этой серии экспериментов мы исследовали участие PKMζ в поддержании контекстной памяти у наземных улиток Спираль . Три группы улиток были случайным образом протестированы в двух разных контекстах (мяч и стекло, см. вставку на рис. 2А) перед тренировочной сессией (Т, см. протокол на рис. 3А). Оценивали процент максимального отказа от тактильной стимуляции. Затем улиток обучали (шокировали) в течение 10 дней запоминанию контекста, в котором их били током (Контекст 1 — на мяче), и тестировали с 1-дневным интервалом отдыха на аверсивную контекстную память (Т1 на рис. 3А). После этого группе 1 вводили ZIP без напоминания, группе 2 вводили ZIP за 30 мин до напоминания и напоминали (20 мин в пагубном контексте, без разрядов во время напоминания) о контексте, в котором они подвергались электрошоку. Группе 3 вводили scrZIP без напоминания. Через 24 часа все группы были протестированы на поддержание контекстной памяти (T2, рис. 3A).

Рисунок 3. Инъекция ZIP ухудшает долговременную аверсивную контекстную память у свободно ведущих себя животных. (A) Протокол обучения, приводящий к долговременной ассоциативной памяти о контексте, в котором животные были поражены током, вставка справа — два контекста, «шар» и «стакан». Каждый блок представляет собой день экспериментальной сессии. Улитки получали электрошок только на шарике, тестирование всегда проводилось в обоих контекстах до (Т), на вторые сутки после 8-дневного электрошока (Т1) и на следующие сутки после напоминания и инъекций (Т2). (B) Усредненные амплитуды (±SEM) реакции отдергивания в трех группах улиток, измеренные в двух разных условиях: на шаре (усиленный контекст) и на стекле. Группа 1 (G1), n = 16; Группа 2 (G2), n = 13; Группа 3 (G3), n = 14. 1-я группа вводилась ZIP без напоминания, 2-я группа — ZIP за 20 мин до напоминания, 3-я группа — scrZIP без напоминания. Ось Y — нормированная амплитуда отдергивания щупалец в % от длины до теста. Значимость различий в амплитудах ответов в двух контекстах оценивали для каждой группы с использованием критерия знакового ранга Уилкоксона. *** р < 0,001. Результаты показали высокую значимость различий в двух контекстах после обучения (T1), полное исчезновение контекстной памяти в G1, введенном ZIP, и сохранение памяти в G2 и G3. Результаты предполагают отсутствие неспецифических эффектов ZIP, поскольку G2 и G3 продемонстрировали отличную память, но свидетельствуют о необходимости неингибированного PKMz для поддержания контекстной памяти. (C) Усредненные амплитуды (±SEM) реакции отдергивания в трех группах улиток, оцененные в двух разных контекстах. В этом поведенческом эксперименте 3 группы улиток (G1, G2, G3) были обучены и протестированы аналогично эксперименту на (B) , но все 3 группы получали после T1 инъекции Reminder+ZIP с разным временем: за 20 мин до Reminder, через 2 ч после Reminder (G2), через 4 ч после Reminder (G3). Тестирование на следующий день после Reminder+injections показало отличное сохранение памяти в G1 (аналогично полученному в G2 в эксперименте, показанном на « B »), и исчезновение значительной контекстной памяти в G2, инъецированном ZIP через 2 часа после Reminder, и полное исчезновение памяти в G3, инжектированном с помощью ZIP, через 4 часа после Напоминания. Результаты показывают, что ZIP может быть эффективен в условиях реконсолидации, когда предполагается образование новых молекул памяти/PKMz, если время действия ZIP совместимо со временем появления новых молекул PKMz (2–4 ч после процедуры реконсолидации).

До тренировки поведенческие реакции в двух контекстах существенно не различались во всех группах (панель «до обучения» на рис. 3Б). На вторые сутки после 10-дневного сеанса электрошока в Контексте 1 контекстное обусловливание наблюдалось как высокодостоверная разница амплитуд поведенческих реакций в двух контекстах во всех группах (панель «после обучения», рис. 3Б, р ). <0,001 для всех групп, критерий знакового ранга Вилкоксона, z = 3,6 для G1, z = 3,9 для G2, z = 3,5 для G3). На следующий день после тестирования контекстной памяти проводился сеанс «напоминания» (без электрошока, всего 20 мин в Контексте 1) и инъекций наркотиков с напоминанием или без него. Тестирование долговременной контекстной памяти на следующий день показало, что ZIP-инъекция без напоминания полностью уничтожила память в G1, в то время как ZIP + напоминание и scrZIP без напоминания не оказали существенного влияния на контекстную память (панель «следующий день после инъекций», рис. 3Б, p < 0,001 для G2 и G3, знаковый ранговый критерий Уилкоксона, z = 3,7 для G2, z = 3,4 для G3). Полученные результаты свидетельствуют о том, что блокада PKMζ приводит к потере консолидированной памяти, а такая же блокада в условиях напоминания и дальнейшей реконсолидации памяти (предполагаемой в течение нескольких часов) приводит к сохранению или, что более вероятно, восстановлению памяти. .

Мы решили проверить, будет ли ZIP работать в то время после напоминания, когда память начнет реконсолидироваться. С целью описания временного окна реконсолидации в нашей модели мы повторили эксперименты на другой группе улиток в условиях, полностью повторяющих условия Г2 (рис. 3Б), но вводили ЗИП не только за 20 мин до напоминания, но и в через 2 ч после напоминания и через 4 ч после напоминания. Мы обнаружили, что введение ZIP непосредственно перед напоминанием не влияло на отдергивание улитки, как в предыдущей серии экспериментов. В то же время введение блокатора ПКМξ через 2 и 4 ч после напоминания полностью блокировало контекстуальную память (рис. 3В, G2, G3). Таким образом, полученные результаты с большой значимостью демонстрируют, что инъекция ЗИП начинает действовать через 2 ч и более после напоминания, что полностью соответствует предположению о том, что реконсолидация долговременной памяти начинается примерно через 2 ч после напоминания, а молекулярный субстрат для ЗИП формируется примерно в это время.

Электрофизиологические эксперименты на изолированной ЦНС

Долговременная фасилитация (LTF) возбуждающих синаптических входов от сенсорных нейронов к гигантским премоторным интернейронам, вызывающая отторжение у Helix , как предполагается, является основой обучения отвращению и памяти у наземных улиток (Balaban, 2002). Мы исследовали, принимает ли участие PKMζ в поддержании LTF в нейронной цепи отдергивания щупалец и тела. В норме ДП возбуждающих синаптических входов на идентифицированные премоторные интернейроны, вызванные высокочастотной стимуляцией нервов в сочетании с аппликациями серотонина или внеклеточной стимуляцией серотонинергических клеток, длится не менее 4 ч (Balaban et al., 2004).

В настоящих экспериментах мы сравнили влияние ZIP или scrZIP на динамику LTF сложных возбуждающих синаптических входов на премоторные интернейроны отведения, индуцированные высокочастотной тетанизацией (гомосинаптической — тестируемого нерва или гетеросинаптической — другого нерва) в сочетании с несколькими аппликации серотониновой ванны (пять аппликаций для гетеросинаптически индуцированной LTF и три аппликации для гомосинаптически индуцированной фасилитации, см. раздел «Методы»). Описанный выше протокол (рис. 4А) обычно вызывал сильное и продолжительное увеличение амплитуды сложного ВПСП (примеры на рис. 4В, усредненные данные на рис. 4С, незакрашенные и закрытые кружки). Повторная стимуляция нерва одиночными стимулами с 10-минутными интервалами без тетанизации и без применения серотонина (контрольные опыты) вызывала некоторое привыкание ответов, характерное для этого препарата (рис. 4В, треугольники). Мы обнаружили, что применение ZIP в конечной концентрации ванны 2 мкМ при 90-я мин после окончания тетанизации привела к значительному снижению амплитуд сложных ВПСП, практически вернув их к уровню нететанизированного контроля через 80 мин после применения (рис. 4В, закрашенные кружки). В то же время применение scrZIP не повлияло на LTF (рис. 4С, открытые кружки). Средняя амплитуда ВПСП, измеренная в интервале 210–240 мин после первой тетанизации, в экспериментах с применением scrZIP составила 140,6 ± 15,8% от исходного уровня до тетанизации, тогда как в этот же период времени при применении ZIP усредненная амплитуда ВПСП достоверно снизилась до 68,1. ± 4,5%, ( p < 0,001, критерий суммы рангов Манна-Уитни). Однако она все же значительно ( p < 0,01) превышала усредненную амплитуду ответов в контрольных (не тетанизированных) опытах (46,5 ± 3,2%). Чтобы проверить, может ли ZIP/scrZIP влиять на амплитуду нететанизированных ВПСП, мы провели отдельную серию экспериментов, в которых ZIP/scr ZIP применялись в тот же момент времени, что и в экспериментах с LTF, но тетанизация наряду с обработкой 5-HT была исключена. опущено. В этих экспериментах не было обнаружено значительных изменений средней амплитуды ВПСП после применения ZIP и scrZIP (рис. 4D). В некоторых экспериментах отводящие интернейроны прокалывали двумя электродами, и входное сопротивление клеток контролировали путем подачи отрицательного тока через один электрод при одновременном измерении мембранных ответов с помощью другого. Никаких существенных изменений входного сопротивления ячейки не было обнаружено после применения ZIP или scrZIP (данные не показаны).

Рис. 4. ZIP обращает облегчение ВПСП, вызванное тетанизацией гомосинаптического входа. (A) Протокол эксперимента, тетанизация была применена к тому же нерву с 10-кратным увеличением амплитуды. Курсы стимуляции столбняка применялись вместе с 10 90 676 -5 90 677 М аппликаций серотониновой ванны. (B) Примеры сложных ВПСП в ответ на стимуляцию кожного нерва в разные сроки эксперимента, отмеченные буквами а, б, в и соответствующими серыми стрелками на (С). (C) Усредненные результаты изменения амплитуд сложных ВПСП после тетанизации и после нанесения ZIP или scrZIP в конечной концентрации 2 мкМ через 90 мин после тетанизации. В контрольных опытах (треугольники) тетанизацию и 5ГТ не применяли, отслеживали степень снижения ответа в течение нескольких часов эксперимента. Усредненные данные представлены как среднее ± SEM. (D) Усредненные результаты изменения амплитуд сложных ВПСП после применения ZIP или scrZIP без тетанизации и 5HT. Отмечается достоверное (до контрольных уровней) снижение амплитуд ВПСП после применения ZIP, но не scrZIP. Горизонтальная серая полоса указывает временное окно, в котором EPSP использовались для статистического анализа.

В наших поведенческих опытах улиток тестировали путем нанесения тактильных тестовых раздражителей на кожу головы животного, что соответствовало раздражению кожного нерва в первой серии электрофизиологических экспериментов. Однако электрические разряды, используемые в нашей парадигме обучения в качестве отрицательного подкрепления, применялись к задней части тела улитки. Хотя ток, по-видимому, протекал через все тело животного, максимальная сила раздражения определенно находилась не в области тактильной стимуляции. Чтобы более адекватно воспроизвести нашу поведенческую ситуацию на уровне изолированной ЦНС, мы провели серию электрофизиологических экспериментов, в которых ДП ВПСП в теменных гигантских интернейронах, индуцированная стимуляцией кожного нерва, вызывалась тетанизацией кишечного нерва, иннервирующего каудальный отдел. тела улитки (гетеросинаптическая пластичность). В пилотных экспериментах мы обнаружили, что трех тетанизаций кишечного нерва в сочетании с применением 5-HT было недостаточно для индукции стабильной LTF в нейронах Pa2/Pa3, в то время как пять тетанизаций вызывали облегчение, продолжающееся в течение нескольких часов (рис. 5A-C). Подобно результатам, полученным в экспериментах с гомосинаптической фасилитации, мы обнаружили, что применение ZIP 9Через 0 мин после последней тетанизации кишечного нерва средняя амплитуда сложных ВПСП, индуцированных стимуляцией кожного нерва, снизилась до уровня нететанизированного контроля во временном окне 210–240 мин после первой тетанизации (39,4 ± 4,3 % и 26,3 ± 4,7 %). к начальной амплитуде соответственно). При применении scrZIP средняя амплитуда сложных ВПСП, вызываемых тестовыми стимулами кожного нерва через 210 мин после тетанизации, составила 101,4 ± 8,0% и была достоверно больше, чем амплитуда ответов при применении ZIP в тот же период времени (9).0043 p <0,01, рис. 5C). Таким образом, полученные результаты позволяют предположить, что PKMζ может участвовать в поддержании гетеросинаптической LTF в нервной системе наземных улиток.

Рис. 5. ZIP обращает облегчение ВПСП, индуцированное гетеросинаптической тетанизацией. (A) Схема протокола тетанизации, используемого для индукции долговременного гетеросинаптического облегчения сложных ВПСП в гигантских интернейронах отведения. Сложные ВПСП вызывали стимуляцией кожного нерва, тогда как тетаническую стимуляцию применяли к кишечному нерву вместе с 10 −5 М аппликации серотониновых ванн. (B) Примеры сложных ВПСП в ответ на тестовую стимуляцию кожного нерва в разное время в эксперименте с применением ZIP (закрашенные кружки), отмеченные буквами a, b, c и соответствующими серыми стрелками на (C). (В) Динамика усредненных амплитуд сложных ВПСП в экспериментах с гетеросинаптической тетанизацией + 5НТ под действием ЗИП. Обратите внимание на значительное снижение (до контрольных уровней) амплитуд ВПСП после применения ZIP, но не scrZIP (2 мкМ). В контрольных опытах (треугольники) тетанизацию и 5ГТ не применяли, отслеживали степень снижения ответа в течение нескольких часов эксперимента. Горизонтальная серая полоса указывает временное окно, в котором EPSP использовались для статистического анализа.

Эксперименты «Искусственный синапс»

Как мы показали ранее, первичные механосенсорные нейроны, пресинаптические к гигантским отводящим интернейронам, посылают свои отростки ко второму кожному нерву (Малышев, Балабан, 2002) и используют глутамат в качестве нейротрансмиттера (Браваренко и др. , 2003). Поэтому очень вероятно, что сложные ВПСП, индуцированные стимуляцией кожного нерва в наших текущих экспериментах, опосредованы глутаматом, по крайней мере, частично. Для проверки этого предположения мы провели серию экспериментов с фармакологической блокадой глутаматергической синаптической передачи. Мы обнаружили, что применение конкурентного антагониста AMPA/каинатных рецепторов CNQX в конечной концентрации ванны 5 × 10 -6 М значительно уменьшали амплитуду сложных ВПСП, индуцированных стимуляцией второго кожного нерва (рис. 6А). Вымывание CNQX показало медленное восстановление ответов на контрольные уровни. Полученные данные (рис. 6А) демонстрируют значительное участие Glu в синаптических ответах, вызванных стимуляцией второго кожного нерва. Аналогичные результаты были получены для сложных ВПСП, индуцированных стимуляцией кишечного нерва (данные не показаны).

Рис. 6. Влияние ZIP и scrZIP в экспериментах с Glu-ответами соматической мембраны. (А) Чтобы доказать, что глутамат участвует в синаптических реакциях гигантских теменных интернейронов, во время повторной стимуляции кожного нерва применяли мощный антагонист АМРА/каината CNQX, аналогично тестовой стимуляции на рисунках 3, 4. Результаты свидетельствуют об участии рецепторов глутамата в этих реакциях. нейроны. Контроль – повторная стимуляция кожного нерва в опытах без аппликаций лекарств, демонстрирующая динамику снижения ответа. (Б) На врезке схема экспериментов в условиях «искусственного синапса». Быстрое удаление Glu из физиологического раствора было достигнуто с помощью отсасывающей пипетки, помещенной рядом с сомой. (C) Усредненные данные 4 серий экспериментов, демонстрирующие отсутствие значимых долговременных изменений облегченных ВПСП после применения ЗИП. Ответы на аппликацию Glu медленно снижались в контрольной серии без каких-либо воздействий (треугольники), тогда как при 3-х аппликациях 5ГТ в течение 10 мин («фармакологическая тетанизация») ответы медленно и достоверно увеличивались во всех остальных сериях опытов ( p < 0,001 относительно контроля в окне времени, обозначенном горизонтальной серой полосой, M.-W.). Применение ZIP и scrZIP (светлые кружки, темные кружки соответственно) приводило к небольшому быстрому уменьшению амплитуды ответов. Серия только с 5-НТ-индуцированной тетанизацией (серый квадрат) служила контролем для этого состояния. Glu применяли 1 раз в минуту, однако каждая точка на графике представляет ответы, усредненные с 5-минутными интервалами (кривые уменьшены в 5 раз). (D) На вставке справа показаны примеры записанных ответов, эксперимент 5HT+scrZIP. (E) Дополнительная серия экспериментов без аппликации 5НТ («фармакологическая тетанизация»), приводящая к необлегченным Glu-ответам в синаптически изолированных париетальных интернейронах отведения. Приложения ZIP и scrZIP вызывали резкое и значительное кратковременное падение амплитуды ответа в таком протоколе. Горизонтальные серые полосы обозначают временные окна, в которых ответы использовались для статистического анализа. Существенной разницы между ZIP и scrZIP не наблюдалось. (F) Примеры записей эксперимента с ZIP-приложением, показанные на (E) .

Для проверки участия постсинаптических механизмов в поддержании ДП независимо от пресинаптических нами были разработаны эксперименты, в которых медиатор непосредственно наносился на соматическую мембрану «синаптически изолированных» (см. раздел «Методы») гигантских интернейронов отведения Pa2 или Pa3 (см. вставку на рис. 6B). Ранее на Helix было показано, что применение серотонина в таком препарате «искусственного синапса» приводит к ДП Glu-индуцированных ответов (Balaban et al. , 2004). Усредненные результаты показывают, что в контрольных экспериментах аппликации Glu со скоростью 1/мин вызывали медленное привыкание к реакциям (рис. 6C, треугольники; примеры показаны на рис. 6D).Три применения серотонина в ванне с конечной концентрацией 10 -5 М в течение 10 мин с последующим 10-минутным вымыванием приводило к очень значительному увеличению Glu-PSP (рис. 6C, квадраты). Добавление ZIP (в конечной концентрации ванны 2 мкМ) на 90-й минуте после окончания последнего применения серотонина привело к резкому и преходящему снижению амплитуды ответов Glu с последующим медленным увеличением (рис. 6C, незакрашенные кружки). В итоге средние амплитуды ответов, стимулированных аппликацией серотонина, во временном окне 170–185 мин от начала эксперимента составили 147,8 ± 90,3% от исходного уровня и существенно не отличались от амплитуд облегченного ответа в том же временном окне при применении ZIP (155,2 ± 7,3%). Удивительно, но мы обнаружили, что применение скремблированного ZIP в экспериментах с индуцированным серотонином облегчением ответов Glu также приводило к аналогичному кратковременному падению амплитуд ответов (рис. 6C, закрашенные кружки).

Мы провели дополнительную серию экспериментов с необлегченными Glu-ответами, зарегистрированными в соматах теменных интернейронов, и обнаружили, что ZIP и scrZIP вызывают резкие и значительные (но кратковременные) падения амплитуд ответов с 98,8 ± 1,6–70,2 ± 2,1 для ZIP и от 98,4 ± 2,2–68,6 ± 2,9 для зашифрованного ZIP (рис. 6E, F). Через 20 мин после применения ZIP или scrZIP амплитуды ответов восстанавливались до 96,1 ± 2,7% и 92,8 ± 2,5% соответственно. Как описано в разделе «Методы», эксперименты с Glu-индуцированными ответами проводили на «синаптически изолированных» препаратах, состоящих из верхних сегментов париетальных ганглиев, содержащих тела париетальных интернейронов отведения. Возможно, временный ингибирующий эффект применения ZIP/scrZIP был артефактом этого типа подготовки. Для выяснения этой ситуации мы провели специальную серию экспериментов на изолированной ЦНС в конфигурации, которая использовалась в основной серии наших экспериментов с гомо- и гетеросинаптической фасилитации, но с добавлением повторных измерений входного сопротивления регистрируемой клетки и аппликации Glu. на соме (см. вставку на рис. 7). Мы прикладывали тестовые импульсы ко второму кожному нерву, вызывая сложные ВПСП в интернейронах отдергивания каждые 5 мин. В промежутках между регулярными нервными стимуляциями мы каждую минуту прикладывали импульсы Glu к соме одного и того же нейрона. Мы обнаружили, что применение ZIP или скремблированного ZIP в концентрациях 2 мкМ вызывало временное снижение Glu-ответов в теменных интернейронах, но не вызывало изменений амплитуды сложных ВПСП, вызываемых в той же клетке стимуляцией кожного нерва, или каких-либо изменений входных сигналов. сопротивления (рис. 7A,B). Таким образом, оказалось, что оба пептида (ZIP и скремблированный ZIP) обладают временными неспецифическими эффектами на реакции, вызванные нанесением глутамата на соматическую мембрану париетальных интернейронов отведения. Предположительно, в этих преходящих изменениях участвуют экстрасинаптические глутаматные рецепторы.

Рис. 7. Влияние ZIP и scrZIP в экспериментах с Glu-ответами соматической мембраны в условиях сохраненных синаптических входов . В специальной серии экспериментов на изолированной ЦНС в конфигурации, которая использовалась в основной серии наших экспериментов с гомо- и гетеросинаптической фасилитации (рис. 3, 4), на второй кожный нерв подавались тестовые импульсы, вызывающие ВПСП в теменных интернейронах каждые 5 мин. . В промежутках между регулярными нервными стимуляциями мы каждую минуту прикладывали импульсы Glu к соме одного и того же нейрона. Перед каждым тестовым стимулом измеряли входное сопротивление регистрируемой клетки. (A,B) — применение ZIP или скремблированного ZIP в концентрациях 2 мкМ вызывало временное падение Glu-ответов в интернейронах отдергивания, которое не влияет на ВПСП, вызванные стимуляцией кожного нерва в той же клетке. Существенных изменений входного сопротивления на протяжении всего эксперимента не наблюдалось. ВПСП показали некоторое привыкание, типичное для этого препарата. Отметим, что амплитуды ответов Glu через 20 мин восстанавливались практически до уровня, существовавшего до применения ZIP/scrZIP.

Обсуждение

Активность гомолога PKMζ поддерживает ассоциативную долговременную память в спирали

В наших экспериментах было показано, что гомолог PKMζ существует в нейральном транскриптоме, и что молекулы, иммунореактивные к консервативным участкам PKMζ, являются присутствует в нейронах и нейропиле Helix lucorum . В поведенческих экспериментах было показано, что ассоциативная контекстуальная память о страхе исчезала при блокаде PKMζ селективным ингибитором ZIP, но не при скремблированном ZIP. Если применение ZIP сочеталось с «напоминанием» (20 мин в «вредном» контексте, без ударов), нарушения долговременной контекстной памяти не наблюдалось. Тестирование эффективности ZIP в момент после напоминания, когда начинается реконсолидация памяти, показывает, что ZIP-инъекция начинает действовать через 2 ч и более после напоминания, что полностью соответствует предположению о том, что реконсолидация долговременной памяти начинается примерно через 2 ч после напоминания. напоминание, и это время, когда формируется молекулярный субстрат для ZIP (Debiec et al., 2002; Duvarci et al., 2005). Полученные результаты свидетельствуют о том, что блокада ПКМζ ухудшает существующую память о страхе у наземных улиток, а «напоминание» обращается к этой памяти и запускает процесс ее реконсолидации даже при транзиентном (расчетное время нахождения ЗИП в активном состоянии в гемолимфе не более 4 з) блокада синтеза ПКМζ. Недавно его показывали в Helix , через 4 ч после напоминания в условиях блокады синтеза белка память еще существует, но полностью отсутствует у тех же животных через 24 ч (Balaban et al., 2014). Недавнее исследование морского моллюска Aplysia может помочь в объяснении такого профиля белково-зависимой памяти, поддерживаемой атипичной ПКМ (Bugie et al., 2012). Для активации расщепления изоформы PKM AplIII необходим индуцированный активностью синтез белка кальпаина на ранней фазе формирования памяти.

Активность гомолога PKMζ поддерживает долговременное облегчение в

Helix

В электрофизиологических экспериментах мы пытались доказать, что PKMζ принимает участие в поддержании LTF в нейронной цепи, лежащей в основе отдергивания щупалец. LTF возбуждающих синаптических входов к гигантским теменным премоторным интернейронам индуцировалась высокочастотной стимуляцией в сочетании с аппликациями серотониновой ванны и продолжалась не менее 4 часов. Мы обнаружили, что применение ванны 2 × 10 90 676 −6 90 677 M ZIP при 9На 0-й мин после тетанизации амплитуда ВПСП снижалась до нететанизированных значений ВПСП. Применение скремблированного пептида ZIP в одинаковое время и в одинаковых концентрациях не влияло на амплитуды ВПСП. Наши результаты в значительной степени соответствуют опубликованным в Aplysia (Cai et al., 2011) эффектам ZIP на LTF синаптических связей между совместно культивируемыми сенсорными и моторными нейронами, а также данным, полученным на грызунах, у которых ZIP нарушал сохранение LTP в гиппокампе. (Линг и др., 2002; Пасталкова и др., 2006). Таким образом, полученные здесь результаты подтверждают идею об участии атипичной ПКС в постиндукционном поддержании долговременной пластичности у Спираль .

Гомолог PKMζ не участвует в LTF «искусственного синапса» в

Helix

Чтобы проверить, можно ли воспроизвести эффекты ZIP в модельной ситуации, мы провели эксперименты с LTF ответов соматических мембран на локальные аппликации глутамата. Ранее было показано, что аппликации серотонина в таких условиях «искусственного синапса» вызывают LTF ответов (Balaban et al., 2004). В настоящем исследовании было показано, что ZIP не влиял на LTF в этих условиях, что может быть объяснено очень низкой концентрацией молекул PKMζ в соматах этих идентифицированных нейронов, что подтверждается данными иммунохимии. Транзиторное (минутное) снижение ответа на глутамат при ZIP и scrZIP описано впервые и может представлять интерес для исследования механизма этого явления на канальном уровне.

Препараты вводились внутригемоцелевыми инъекциями и имели доступ ко всей ЦНС. Следовательно, хотя было показано, что облегчение синаптических входов к интернейронам отвода в теменных ганглиях опосредует долговременную сенсибилизацию (Balaban, 2002), и хотя мы показали здесь, что ингибирование PKMζ нарушает поддержание как долгосрочной контекстуальной аверсивной памяти, in vivo и LTF синаптических входов к париетальным интернейронам отведения in vitro , мы не можем исключить возможность того, что наши поведенческие результаты были связаны, по крайней мере частично, с действием ZIP на центральные участки, отличные от синапсов между сенсорными нейронами и интернейронами. Настоящие результаты дополняют накапливающиеся доказательства того, что PKMζ играет решающую роль в сохранении долговременной памяти и долговременной синаптической пластичности как у позвоночных, так и у беспозвоночных (Drier et al., 2002; Ling et al., 2002; Serrano et al. ., 2005; Пасталкова и др., 2006; Шема и др., 2007).

Возможный механизм PKMζ-опосредованного поддержания синаптической фасилитации в

Helix

Как PKMζ поддерживает синаптическое фасилитация, которое, как мы полагаем, лежит в основе ассоциированной долговременной памяти в Helix ? Согласно модели T. Sactor, увеличение синаптической силы в моделях синаптической пластичности у млекопитающих основано на PKMζ-опосредованном увеличении транспорта AMPA-рецепторов в постсинаптическую мембрану (Sacktor, 2012). Как было показано на примере аплизии, в основном по данным лаборатории Д. Гланцмана, усиление трафика АМРА-рецепторов играет решающую роль в поддержании как синаптической пластичности, так и поведенческого обучения у этого моллюска (Chitwood et al. , 2001; Li et al. и др., 2005; Гланцман, 2010). Индукция ассоциативного обучения, а также индукция синаптической фасилитации в наших экспериментах, аналогичная ситуации в Aplysia в значительной степени зависит от серотониновой модуляции глутаматергических синапсов. С помощью селективных блокаторов было показано, что синаптические входы в интернейроны отдергивания, которые изменяются при индукции обучения избеганию у наземных улиток (Балабан, 2002), опосредованы глутаматом (Браваренко и др., 2003). Поэтому весьма вероятно, что синаптическая фасилитация в наших экспериментах также опосредована постоянным увеличением встраивания АМРА-подобных рецепторов в постсинаптическую мембрану. Далее мы можем предположить, что серотонин, который использовался для индукции долговременного синаптического облегчения в Helix индуцирует опосредованное калпаином расщепление ортолога PKCζ Helix с образованием PKMζ, что лежит в основе усиленного переноса AMPA-рецепторов. О таком механизме недавно сообщалось для Aplysia (Bugie et al. , 2009, 2012), и мы полагаем, что он также может играть роль в механизмах синаптической пластичности у Helix . Здесь следует отметить, что Aplysia PKMζ (и, предположительно, у Helix также) образуется не путем альтернативной трансляции с мРНК атипичной изоформы PKC, как это происходит у млекопитающих (Hernandez et al., 2003), а скорее , он продуцируется кальпаин-зависимым расщеплением ортолога PKCζ (Bugie et al., 2009).).

Специфичность ZIP и роль PKMζ в обучении и памяти

В настоящее время имеется много данных, свидетельствующих об участии PKMζ в различных типах синаптической пластичности, обучении и памяти у грызунов, насекомых и моллюсков (для обзора см., например, Sacktor , 2012). Недавно на тараканах было показано, что системные инъекции либо хелеритрина, либо ZIP стирают долговременную обонятельную память, но не влияют на приобретение памяти во время кондиционирования (Deng et al., 2015). С другой стороны, несколько других групп сообщили, что активность PKMζ может не быть необходимой для синаптической пластичности. Так, было продемонстрировано, что мыши с нокаутом гена PKMζ демонстрируют нормальную синаптическую пластичность, обучение и память гиппокампа (Lee et al., 2013; Volk et al., 2013), что указывает на существование других мишеней для ZIP, предположительно изоформ ПКМζ. Также сообщалось, что зашифрованный ZIP с измененной аминокислотной последовательностью также может блокировать PKMζ, хотя и не так эффективно, как сам ZIP (Lee et al., 2013). В наших экспериментах scrZIP не смог вернуть потенцированные ВПСП к базовому уровню, а также не смог стереть память у обученных улиток. Однако мы наблюдали сходное временное снижение глутаматных ответов, вызванное нанесением глутамата на сому нейронов, как ZIP, так и scrZIP, что предполагает существование некоторых сходных свойств у этих двух пептидов. Тем не менее, несмотря на разногласия по поводу роли самого PKMζ в процессах обучения в памяти, никто не спорит, что короткий пептид ZIP может стирать сохраненные воспоминания у самых разных экспериментальных животных — от моллюсков до млекопитающих. Этот факт, без всякого сомнения, требует дальнейших исследований.

Экспрессия PKMζ в ЦНС

С помощью антитела sc-216 ранее была обнаружена PKMζ в мембранах, цитоплазме и ядре культивируемых ненервных клеток PC12 (Crisanti et al., 2005). В эмбриональных нейронах гиппокампа как sc-216, так и sc-17781 антитела обнаруживают PKMζ как в телах клеток, так и в неформирующих аксоны нейритах (Parker et al., 2013). Такая картина окрашивания совпадает с нашими данными. В мозге взрослых крыс было показано, что PKMζ широко экспрессируется в переднем мозге, включая гиппокамп и неокортекс (Hernandez et al., 2013). Он был обнаружен в соматах и ​​дендритах клеток, включая постсинаптические плотности. Мы предполагаем, что эти результаты соответствуют гранулам, которые мы видели в культивируемых нейронах улитки. Таким образом, окрашивание сомы клеток (гранулы) и отсутствие окрашивания аксонов, по-видимому, является обычным случаем в разных мозгах. Таким образом, наши данные показывают сходные паттерны распределения иммунореактивности PKMζ в нейронах грызунов и моллюсков, что предполагает общую роль PKMζ в нервных функциях у этих двух классов животных.

Заключение

Мы продемонстрировали, что ингибирование изоформы PKMζ у наземных улиток устраняет долговременную память, а также специфическую форму долговременной синаптической пластичности, которая лежит в основе обучения у хорошо изученного беспозвоночного Helix .

Заявление о конфликте интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Авторы благодарят Н. Бэннона за исправление английского языка, М. Логачеву и А. Миронова за помощь в анализе транскриптома. Эксперименты поддержаны грантами РФФИ, ​​Программ РАН, грантом РНФ №14–25–0072 ( эксперимента in vitro, эксперимента).

Ссылки

Аль Айт Л., Ямак З. и Моргенштерн Б. (2013). DIALIGN at GOBICS – множественное выравнивание последовательностей с использованием различных источников внешней информации. Рез. нуклеиновых кислот. 41, W3–W7. doi: 10.1093/nar/gkt283

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Балабан, П. М. (2002). Клеточные механизмы пластичности поведения наземных улиток. Неврологи. Биоповедение. Ред. 26, 597–630. doi: 10.1016/s0149-7634(02)00022-2

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Балабан П. М., Коршунова Т. А., Браваренко Н. И. (2004). Постсинаптический кальций способствует подкреплению в трехнейронной сети, проявляющей ассоциативную пластичность. Евро. Дж. Нейроски. 19, 227–233. doi: 10.1111/j.1460-9568.2003.03129.x

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Балабан П. М., Рощин М. В., Коршунова Т. А. (2011). Двуликий оксид азота необходим как для стирания, так и для закрепления памяти. Ж. Выш. нерв. Deiat. Я. ИП Павлова 61, 274–280.

Реферат PubMed | Google Scholar

Балабан П. М., Рощин М. , Тимошенко А. К., Гайнутдинов К. Л., Богодвид Т. К., Муранова Л. Н. и др. (2014). Оксид азота необходим для лабилизации консолидированной контекстной памяти во время реконсолидации у наземных улиток. Евро. Дж. Нейроски. 40, 2963–2970. doi: 10.1111/ejn.12642

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Bougie, J.K., Cai, D., Hastings, M., Farah, C.A., Chen, S., Fan, X., et al. (2012). Индуцированное серотонином расщепление атипичной протеинкиназы C Apl III у аплизии. J. Neurosci. 32, 14630–14640. doi: 10.1523/JNEUROSCI.3026-11.2012

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Bougie, J.K., Lim, T., Farah, C.A., Manjunath, V., Nagakura, I., Ferraro, G.B., et al. (2009 г.). Атипичная протеинкиназа C в Aplysia может образовывать протеинкиназу M путем расщепления. Дж. Нейрохим. 109, 1129–1143. doi: 10.1111/j.1471-4159.2009.06045.x

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Браваренко Н. И., Коршунова Т. А., Малышев А. Ю., Балабан П. М. (2003). Синаптический контакт между механосенсорным нейроном и отводящим интернейроном у наземной улитки опосредуется L-глутамат-подобным передатчиком. Неврологи. лат. 341, 237–240. doi: 10.1016/S0304-3940(03)00213-1

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Цай Д., Пирс К., Чен С. и Гланцман Д. Л. (2011). Протеинкиназа М поддерживает длительную сенсибилизацию и долгосрочное облегчение при аплизии. J. Neurosci. 31, 6421–6431. doi: 10.1523/JNEUROSCI.4744-10.2011

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Читвуд Р. А., Ли К. и Гланцман Д. Л. (2001). Серотонин способствует ответам AMPA-типа в изолированных сифонных мотонейронах Aplysia в культуре. J. Physiol. 534, 501–510. doi: 10.1111/j.1469-7793.2001.00501.x

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Крисанти П., Леон А., Лим Д. М. и Омри Б. (2005). Аспирин предотвращает гибель нейронов, вызванную NMDA, путем прямого ингибирования протеинкиназы Cζ. Дж. Нейрохим. 93, 1587–1593. doi: 10.1111/j.1471-4159.2005.03157.x

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Дебик Дж., Леду Дж. Э. и Надер К. (2002). Реконсолидация клеток и систем в гиппокампе. Нейрон 36, 527–538. doi: 10.1016/s0896-6273(02)01001-2

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Дэн З., Любински А. Дж. и Пейдж Т. Л. (2015). ζ-ингибиторный пептид (ZIP) стирает долговременные воспоминания у таракана. Нейробиол. Учиться. Мем. 118, 89–95. doi: 10.1016/j.nlm.2014.11.011

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Драйер Э. А., Телло М. К., Коуэн М., Ву П., Блейс Н., Сактор Т. С. и др. (2002). Улучшение и формирование памяти за счет атипичной активности ПКМ у Drosophila melanogaster. Нац. Неврологи. 5, 316–324. doi: 10.1038/nn820

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Duvarci, S., Nader, K., и LeDoux, JE (2005). Активация каскада киназ-митоген-активируемых протеинкиназ, регулируемых внеклеточными сигналами, в миндалевидном теле необходима для реконсолидации памяти слухового кондиционирования страха. евро. Дж. Нейроски. 21, 283–289.

Реферат PubMed | Google Scholar

Гамис Ф. и Галло М. (2011). Изучение вкуса и память: окно в изучение старения мозга. Фронт. Сист. Неврологи. 5:91. doi: 10.3389/fnsys.2011.00091

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Гланцман Д.Л. (2010). Общие механизмы синаптической пластичности у позвоночных и беспозвоночных. Курс. биол. 20, Р31–Р36. doi: 10.1016/j.cub.2009.10.023

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Гланцман Д.Л. (2013). ПКМ и обслуживание памяти. F1000 Биол. Респ. 5:4. doi: 10.3410/b5-4 [Epub перед печатью].

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Grabherr, M.G., Haas, B.J., Yassour, M., Levin, J.Z., Thompson, D.A., Amit, I., et al. (2011). Сборка полноразмерного транскриптома из данных RNA-Seq без эталонного генома. Нац. Биотехнолог. 29, 644–652. doi: 10.1038/nbt.1883

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Эрнандес А. И., Блейс Н., Крари Дж. Ф., Серрано П. А., Лейтгес М., Либиен Дж. М. и др. (2003). Синтез протеинкиназы Mζ из мРНК головного мозга, кодирующей независимый каталитический домен протеинкиназы Cζ. Последствия для молекулярного механизма памяти. Дж. Биол. хим. 278, 40305–40316. doi: 10.1074/jbc.m307065200

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Эрнандес А. И., Оксберри В. К., Крари Дж. Ф., Мирра С. С. и Сактор Т. К. (2013). Клеточная и субклеточная локализация PKMζ. Филос. Транс. Р. Соц. Лонд. Б биол. науч. 369:20130140. doi: 10.1098/rstb.2013.0140

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Иерусалимский В. Н., Захаров И. С., Палихова Т. А., Балабан П. М. (1992). Нервная система и картирование нейронов брюхоногих моллюсков Helix lucorum L. Ж. Выш. нерв. Deiat. Я. И П Павлова 42,1075–1089.

Lee, A.M., Kanter, B.R., Wang, D., Lim, J.P., Zou, M.E., Qiu, C., et al. (2013). Нулевые мыши Prkcz демонстрируют нормальное обучение и память. Природа 493, 416–419. doi: 10.1038/nature11803

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Ли, К., Робертс, А.С., и Гланцман, Д.Л. (2005). Синаптическая фасилитация и поведенческая отвыкание в Аплизия : зависимость от высвобождения Ca2+ из постсинаптических внутриклеточных депо, постсинаптический экзоцитоз и модуляция эффективности постсинаптических AMPA-рецепторов. J. Neurosci. 25, 5623–5637. doi: 10.1523/jneurosci. 5305-04.2005

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Линг Д. С., Бенардо Л. С., Серрано П. А., Блейс Н., Келли М. Т., Крари Дж. Ф. и др. (2002). Протеинкиназа Mζ необходима и достаточна для поддержания LTP. Нац. Неврологи. 5, 295–296. doi: 10.1038/nn829

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Малышев А.Ю., Балабан П.М. (2002). Идентификация механоафферентных нейронов наземной улитки: ответные свойства и синаптические связи. J. Нейрофизиол. 87, 2364–2371.

Реферат PubMed | Google Scholar

Остен П., Валсамис Л., Харрис А. и Сактор Т. С. (1996). Зависимое от синтеза белка образование протеинкиназы Mζ при длительном потенцировании. Дж. Неврологи. 16, 2444–2451.

Реферат PubMed | Google Scholar

Паркер С.С., Манделл Э.К., Хапак С.М., Маскайкина И.Ю., Кусне Ю., Ким Дж.Ю. и др. (2013). Конкурирующие молекулярные взаимодействия изоформ aPKC регулируют полярность нейронов. Проц. Натл. акад. науч. США 35, 14450–14455. doi: 10.1073/pnas.1301588110

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Пасталкова Э., Серрано П., Пинхасова Д., Уоллес Э., Фентон А. А. и Сактор Т. С. (2006). Хранение пространственной информации механизмом обслуживания LTP. Наука 313, 1141–1144. doi: 10.1126/science.1128657

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Сактор, ТК (2011). Как PKMζ поддерживает долговременную память? Нац. Преподобный Нейроски. 12, 9–15. doi: 10.1038/nrn2949

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Сактор, ТК (2012). Обслуживание памяти с помощью PKMζ — эволюционная перспектива. Мол. Мозг 5:31. doi: 10.1186/1756-6606-5-31

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Sacktor, T.C., Osten, P., Valsamis, H., Jiang, X., Naik, M.U., и Sublette, E. (1993). Стойкая активация z-изоформы протеинкиназы С при поддержании длительного потенцирования. Проц. Натл. акад. науч. США 90, 8342–8346. doi: 10.1073/pnas.90.18.8342

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Саджикумар С., Наваккоде С., Сактор Т. К. и Фрей Дж. У. (2005). Синаптическая маркировка и перекрестная маркировка: роль протеинкиназы Мзета в поддержании долгосрочной потенциации, но не долгосрочной депрессии. Дж. Неврологи. 25, 5750–5756. doi: 10.1523/jneurosci.1104-05.2005

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Серрано П., Яо Ю. и Сактор Т. К. (2005). Стойкое фосфорилирование протеинкиназой Mζ поддерживает долговременное потенцирование поздней фазы. J. Neurosci. 25, 1979–1984 гг. doi: 10.1523/jneurosci.5132-04.2005

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Шема Р., Харамати С., Рон С., Хазви С., Чен А., Сактор Т. С. и др. (2011). Усиление консолидированной долговременной памяти за счет сверхэкспрессии протеинкиназы Mζ в неокортексе. Наука 331, 1207–1210. doi: 10.1126/science.1200215

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Шема Р., Сактор Т. К. и Дудаи Ю. (2007). Быстрое стирание ассоциаций долговременной памяти в коре ингибитором PKMζ. Наука 317, 951–953. doi: 10.1126/science.1144334

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Цокас П., Яо Ю., Джотианандан Д., Черепанов А., ван де Нес П. и Сактор Т. К. (2013). Условный нокаут гена PKC/PKMz и острая блокада трансляции с помощью антисмыслового PKMz показывают, что новый синтез белка PKMz имеет решающее значение для LTP и долговременной памяти. Соц. Неврологи. Абстр. программа № 233.21. http://www.abstractsonline.com/

Виллареал Г., Ли К., Кай Д., Финк А. Э., Лим Т., Буги Дж. К. и др. (2009). Роль протеинкиназы С в индукции и поддержании серотонин-зависимого усиления ответа глутамата в изолированных сифонных мотонейронах Aplysia californica . J. Neurosci. 29, 5100–5107. doi: 10.1523/jneurosci.4149-08.2009

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Volk, L.J., Bachman, J.L., Johnson, R., Yu, Y., and Huganir, R.L. (2013). PKM-ζ не требуется для синаптической пластичности, обучения и памяти гиппокампа. Природа 493, 420–423. doi: 10.1038/nature11802

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

Сабина Вейер (фортепиано) представлена ​​Gunnar Management

Представление всемирно известных классических музыкантов и певцов

  • Профиль
  • записей
  • Видео

Родившаяся в Люксембурге в 1988 году, Сабина Вейер – пианистка, которая в последние несколько лет неизменно получает высокую оценку международной прессы.

Сначала обучалась на родине (Prix Supérieur в консерватории Эш-сюр-Альзетт в 2007 г.), затем во Франции (CRR в Меце, prix de perfectionnement à l’unanimité du jury в классе Бернара Леружа в 2007) и, наконец, в Брюсселе (Koninklijk Conservatorium, диплом почтмейстера в классе сербского пианиста Александра Мадзара) Вейер по окончании учебы начала международную карьеру и продолжает удивлять слушателей интенсивностью, богатством и ясностью своей игры.

Сабина записала пять альбомов, все они были отмечены критиками и получили награды (премия Supersonic за «Баха в будущее», приз Pasticcio от австрийского радио ORF за «Свет в темноте», номинации на Международную премию классической музыки и Opus Klassik в Германии, премия Supersonic Award за «Тайны» и «Grand Frisson» от журнала Audiophile Magazine за «Тайны»).

Под руководством таких пианистов, как Оксана Яблонская, Акилес Делле Винье, Василь Генов, Марио Патуцци, Мишель Берофф и Франсуаза Бюффе-Арсеньевич, молодой пианист развил сильную музыкальную личность, характеризующуюся огромной чувствительностью и глубоким интересом к искусству. в целом.

Ее карьера концертирующей пианистки и камерного музыканта привела Вейер по всему миру: Филармония в Берлине (с Camerata Berlin в 2017 г.), Tonhalle в Цюрихе (с Павлом Верниковым и Курпфальцским камерным оркестром в 2018 г.), Шанхайский концерт Зал в 2016 г., Зал Корто в Париже в 2015 г., Люксембургская филармония, Большой зал Московской консерватории, Королевский Альберт-холл в Лондоне (на вручение Гран-при Конкурса виртуозов, где она заняла первое место).

С 2015 года Вейер является профессором по классу фортепиано в Консерватории города Люксембург, выполняя свое желание передать музыкальные знания подрастающему поколению. В качестве педагога ее приглашали преподавать на мастер-классах за границей, в том числе в Летней академии Скрябина в Италии, Пекинском педагогическом университете в Китае и Европейской летней музыкальной академии в Дьякове/Косово.

Среди ее партнеров по камерной музыке такие известные музыканты, как Алексей Семененко, Павел Верников, Светлана Макарова, Алена Баева, Гэри Хоффман, Юрий Ревич, Миндаугас Бэкус и Жюльен Бодиман.

Рецензируя запись Сабин (ARS 38313) Сонат для фортепиано №№ 2 и 3 Мясковского для веб-сайта MusicWeb International, Грегор Тасси написал «Пианистка из Люксембурга Сабина Вейер — еще одно новое имя для меня, и, основываясь на ее игре на этом SACD, она должна быть на пороге блестящей карьеры.Помимо того, что она обладает изысканной техникой, она всем сердцем принимает музыку, которую играет, и вполне способна произвести на слушателя сочувственное впечатление от этих сонат, подчеркнутое ее собственными информативными нотами. 0002 … здесь Вейер показывает, что ее интерпретации самого высокого порядка.

Это [Третья соната Мясковского (1920)] — захватывающее произведение, заслуживающее самого широкого распространения. В этих чрезвычайно сложных произведениях Вейер раскрывается не только как мастер игры на клавишных, но и как художник великих моментов. Диск завершается «Чудодействами» соч. 25 (1917–18), шестью краткими контрастными по настроению произведениями, раскрывающими иную и красочную сторону Мясковского и заслуживающими более широкого внимания; Вейер приводит очень убедительные аргументы в пользу того, чтобы они заняли постоянное место в репертуаре.

Это ее четвертая запись для Ars Recordings, и инженеры придали ее Bösendorfer Grand ультрасовременный звуковой образ, как будто кто-то сидит посреди концертного зала. Этот диск SACD совместим с любым проигрывателем компакт-дисков и настоятельно рекомендуется.

Рецензируя запись Сабин (ARS 38313) Сонат для фортепиано № 2 и 3 Мясковского для американского музыкального журнала Fanfare, Филип Борг-Уилер написал : «Нельзя желать более преданных выступлений, чем эти. Технически феноменально — и она, безусловно, должна быть — уроженка Люксембурга Сабина Вейер для меня новая. Она просто потрясающая. Я благодарен за то, что вообще могу услышать эти произведения, но также я не мог представить себе более убедительного защитника. Этот диск страстно рекомендуется и не должен быть упущен».

Активно занимаясь современной музыкой, Вейер регулярно сотрудничает с некоторыми из лучших композиторов современности, такими как французский композитор Николя Бакри, произведения которого она регулярно включает в свои концертные программы.

Знакомство с артистом онлайн

На веб-сайте «Знакомство с артистом онлайн» представлены интервью, в которых музыканты, дирижеры и композиторы обсуждают аспекты своей творческой жизни, в том числе источники вдохновения, влияние, репертуар, исполнение, записи, выдающихся учителей и многое другое. Интервью предлагают разоблачающие взгляды на трудовую жизнь музыканта и увлекательный взгляд «за пределы нот».

Знакомство с художником Онлайн-сайт: Sabine Weyer

Страстный музыкант, Сабина обладает интуитивным и чувствительным чутьем и склонна к новым открытиям. Ее игра часто обращается к сердцу ее слушателей благодаря ее зрелым размышлениям и глубокой поэтической чувствительности.

Фотографии: Клод Шлим, Жюльен Хэнк, Вито Лабалестра

Посетите собственный сайт художника

Веб-сайт: http://www.sabine-weyer.com/

Свяжитесь с нами по поводу Sabine Weyer

Запрещается вносить какие-либо сокращения или изменения в эту биографию без согласия Сабины Вейер.

Bach to the future — Bearbeitungen von Busoni, Siloti & Saint-Saens

Buy this recording
from Amazon >

Bach: Klavierkonzerte BWV 1055 & 1056

Buy this recording
from Amazon >

Дмитрий Шостакович — Клавирконцерт соч. 102, Симфония Nr. 9 соч. 70

Buy this recording
from Amazon >

Images

Buy this recording
from Amazon >

Miaskowsky/Bacri: Mysteries — Werke für Piano solo

Buy this recording
from Amazon >


Лучшие юристы по арбитражу и медиации в Чешской Республике

Выберите город из списка ниже, чтобы найти лучших юристов для ваших нужд.

Города

Мала Страна Острава Прага

Арбитраж и посредничество – Чешская Республика

Вы хотите получить свой профиль юриста?

Свяжитесь с нами

22 результатов

АБ

Алена Баняёва


Баняёва Вожехова

Признан с 2010 г.

Острава, Чехия

Области практики

Арбитраж и посредничество

Корпоративное право

Закон о слияниях и поглощениях

ПД

Павел Дейл


Коциан Шолц Балаштик

Признан с 2010 г.

Прага, Чехия

Области практики

Арбитраж и посредничество

Конкуренция / Антимонопольное право

Судебные разбирательства

ПФ

Павел Франя


Хартманн, Елинек, Франция и партнеры

Признан с 2010 г.

Прага, Чехия

Области практики

Арбитраж и посредничество

Судебные разбирательства

ФХ

Франтишек Гонса


BBH, advokátni kancelář, s.r.o.

Признан с 2010 года

Прага, Чехия

Области практики

Арбитраж и посредничество

Защита по уголовным делам

Судебные разбирательства

ВХ

Вит Горачек


Законность

Признан с 2010 г.

Прага, Чехия

Области практики

Арбитраж и посредничество

Корпоративное право

Закон об интеллектуальной собственности

Особые направления

Телекоммуникации

КХ

Каролина Горакова


ТОО «Вейл, Готшал и Мангес»

Признан с 2010 года

Прага, Чехия

Области практики

Арбитраж и посредничество

Банковское и финансовое право

Закон о рынках капитала

ДХ

Ян Раздира


HKDW Legal s. r.o.

Признан с 2014 года

Прага, Чехия

Области практики

Арбитраж и посредничество

МЗ

Мартин Гродек


ТОО «Бейкер Маккензи»

Признан с 2010 года

Прага, Чехия

Области практики

Арбитраж и посредничество

Законодательство о банкротстве и реорганизации

Судебные разбирательства

ЯВЛЯЮСЬ

Александр Мареш


Мареш Партнеры

Признан с 2010 г.

Прага, Чехия

Области практики

Арбитраж и посредничество

Судебные разбирательства

РП

Ростислав Пекарж


Сквайр Паттон Боггс

Признан с 2014 года

Прага, Чехия

Области практики

Арбитраж и посредничество

депутат

Милан Полак


Weinhold Legal, v. o. с. advokátní kancelář

Признан с 2010 г.

Прага, Чешская Республика

Области практики

Арбитраж и посредничество

Трудовое право

Судебные разбирательства

Специальная направленность

3 90 Коммерческая деятельность

3

депутат

Марек Прохазка


Партнеры ФРК

Признан с 2010 г.

Прага, Чехия

Области практики

Арбитраж и посредничество

Банковское и финансовое право

Корпоративное право

ПШ

Павел Шафарж


Шафар и партнеры

Признан с 2012 года

Прага, Чехия

Области практики

Арбитраж и посредничество

Корпоративное право

Закон о слияниях и поглощениях

ДС

Душан Седлачек


Havel & Partners s. r.o., адвокатское бюро

Признан с 2014 года

Прага, Чехия

Области практики

Арбитраж и посредничество

Законодательство о несостоятельности и реорганизации

Судебные разбирательства

ТС

Томаш Сокол


Брож и Сокол и Новак

Признан с 2010 г.

Прага, Чешская Республика

Области практики

Арбитраж и посредничество

Защита по уголовным делам

Судебные разбирательства

Гражданские дела

3

JS

Иржи Спуста


Vyskočil, Krošlák & spol.

Признан с 2018 года

Прага, Чехия

Области практики

Арбитраж и посредничество

ЛШ

Ладислав Шторек


Дентонс

Признан с 2014 года

Прага, Чехия

Области практики

Арбитраж и посредничество

Корпоративное право

Судебные разбирательства

LT

Любош Тихий


Сквайр Паттон Боггс

Признан с 2013 г.

Прага, Чешская Республика

Области практики

Арбитраж и посредничество

Особые направления

Международное разрешение споров

Джей Ти

Ян Томайер


Tomaier Legal advokátní kancelář s.r.o.

Признан с 2014 года

Прага, Чехия

Области практики

Арбитраж и посредничество

БТ

Борис Треглер


Дентонс

Признан с 2012 года

Прага, Чехия

Области практики

Арбитраж и посредничество

ВУ

Владимир Уде


BBH, advokátni kancelář, s.r.o.

Признан с 2012 года

Прага, Чехия

Области практики

Арбитраж и посредничество

Судебные разбирательства

LV

Людек Врана


Врана и партнеры

Признан с 2010 г.

Мала Страна, Чешская Республика

Области практики

Арбитраж и посредничество

Конкуренция / Антимонопольное право

Корпоративное право

Наша методология


Признание Best Lawyers полностью основано на экспертной оценке. Наша методология призвана максимально точно отразить консенсусное мнение ведущих юристов о профессиональных способностях их коллег в той же географической зоне и области юридической практики.

Процесс

Best Lawyers использует сложный, добросовестный, рациональный и прозрачный процесс опроса, предназначенный для получения содержательных и существенных оценок качества юридических услуг. Мы всегда считали, что качество экспертного обзора напрямую связано с качеством избирателей.

Узнайте больше о нашей методологии

Коротко

Новости, редакционные статьи, аналитические материалы и пресса

Просмотреть всю юридическую информацию

Законы Грузии, вступающие в силу в 2022 году


Три новых законодательных акта Грузии направлены на повышение прозрачности счетов за медицинские услуги, снижение налога с продаж транспортных средств и введение дополнительных гарантий для защиты детей, находящихся в приемных семьях.

Законы Джорджии вступят в силу в 2022 году

На нейтральной территории


Спустя годы после принятия Американской ассоциацией юристов решения о диверсификации пула нейтральных лиц альтернативные комиссии по разрешению споров по-прежнему не работают.

На нейтральной территории

Утверждена самая крупная премия за боль и страдание в истории Нью-Йорка


Выдающийся адвокат Бенедикт Морелли о достижении прецедентного изменения результата.

Утверждена самая крупная премия за боль и страдание в истории Нью-Йорка

Штаты Новой Англии с новым законодательством


Best Lawyers подробно изучает недавно предложенные законопроекты, судебные процессы и дела, поступающие из четырех штатов Новой Англии.

Штаты Новой Англии с вступающим в силу законодательством

Loaded Arguments


Историческое соглашение по делу Сэнди-Хук может создать прецедент для будущей ответственности, в то время как некоторые штаты ослабляют свои законы об оружии.

Нагруженные аргументы

Активизм в действии


От действий к «Действиям!» Проект Джеффри Робинсона «Кто мы есть» и новая документальная хроника о его попытках разоблачить, противостоять и положить конец долгой истории античерного расизма в стране .

Активизм в действии

Ваш запрос был отправлен!

Произошла ошибка, и в настоящее время мы не можем отправить ваше сообщение. Пожалуйста, обновите страницу и повторите попытку позже.

Разблокировать учетную запись

Узнайте сегодня о том, как разблокировать этот профиль и сделать его общедоступным.

Имя

Эл. адрес

Телефон опционально)

Магнитные поли(N-изопропилакриламидные) нанокомпозиты: влияние способа получения на антибактериальные свойства | Письма об исследованиях в области нанотехнологий

  • Nano Express
  • Открытый доступ
  • Опубликовано:
  • Nhung H. A. Nguyen 1,2 ,
  • Мохамед С. А. Дарвиш 1,3 ,
  • PAVER KEJZLAR 1 ,
  • PAVER KEJZLAR 1 ,
  • PAVER KEJZLAR ,
  • PAVER KEJZLAR 1 ,
  • PAVER KEJZLAR 1 ,
  • . ORCID: orcid.org/0000-0001-8772-704X 1,2  

Письма об исследованиях в области наноразмеров том 12 , Номер статьи: 571 (2017) Процитировать эту статью

  • 1896 доступов

  • 9 цитирований

  • Сведения о показателях

Abstract

Наиболее сложная задача получения магнитного поли(N-изопропилакриламида) (Fe 3 O 4 -PNIPAAm) нанокомпозитов для биоприложений заключается в том, чтобы максимизировать их реакционную способность и стабильность. Для получения Fe 3 O 4 -PNIPAAm-1, Fe 3 O 4 -PNIPAAm-2 и Fe 3 O 4 -PNIPAAm-1 использовали эмульсионную полимеризацию, осаждение in situ и физическое добавление. 3 соответственно. Их свойства были охарактеризованы с помощью сканирующей электронной микроскопии (морфология), дзета-потенциала (поверхностный заряд), термогравиметрического анализа (стабильность), магнитометрии вибрационных образцов (намагниченность) и динамического светорассеяния. Кроме того, мы исследовали антибактериальный эффект каждого нанокомпозита в отношении грамотрицательных Escherichia coli и грамположительный Staphylococcus aureus . Как Fe 3 O 4 -PNIPAAm-1, так и Fe 3 O 4 -PNIPAAm-2 нанокомпозиты показали высокую термическую стабильность, дзета-потенциал и значения намагниченности, указывая на стабильные коллоидные системы. В целом, присутствие нанокомпозитов Fe 3 O 4 -PNIPAAm, даже при более низких концентрациях, вызывало значительное повреждение как ДНК E. coli , так и S. aureus и приводило к снижению жизнеспособности клеток. Фе 3 O 4 -PNIPAAm-1 проявлял более сильное противомикробное действие в отношении обоих штаммов бактерий, чем Fe 3 O 4 -PNIPAAm-2 и Fe 3 O 4 -PNIPAAm-3. Staphylococcus aureus был более чувствителен, чем E. coli , ко всем трем магнитным нанокомпозитам PNIPAAm.

История вопроса

Магнитные термочувствительные полимерные нанокомпозиты использовались для широкого спектра применений, включая очистку воды и наномедицину [1,2,3,4]. Каждый нанокомпозит специально разработан, чтобы извлечь выгоду из комбинации свойств, присущих обоим компонентам, то есть магнитным частицам и чувствительным к температуре полимерам, что создает нанокомпозит, который является более конкретным и контролируемым. Магнетит (Fe 3 O 4 ) наночастицы придают магнитные свойства, позволяющие быстро и легко разделяться после приложения внешнего магнитного поля [5]. Поли(N-изопропилакриламид) (ПНИПААм) образует трехмерный гидрогель, который претерпевает обратимый фазовый переход при более низкой критической температуре раствора (НКТР) из одиночного клубка с набухшим гидратированным состоянием в коллапсированное и сморщенное дегидратированное состояние [6] при нагревании в вода выше 32 °C. Покрытие магнитных наночастиц слоем PNIPAAm не только обеспечивает коллоидную стабильность в воде, но также обеспечивает функциональность поверхности за счет связывания с другими молекулами, такими как лекарства, белки или ферменты [7]. Создание нанокомпозитов с двойной чувствительностью достигается путем объединения двух свойств, которые одновременно реагируют на комбинацию температуры и магнетизма. Наиболее распространенные методы, используемые для синтеза Fe 3 O 4 -PNIPAAm Нанокомпозиты представляют собой нанокомпозиты физического сложения, осаждения in situ и эмульсионной полимеризации. Физическое добавление, самый простой метод, требует физического смешивания ранее синтезированных магнитных наночастиц и частиц PNIPAAm. Второй метод, преципитация in situ, заключается в осаждении магнитных наночастиц в присутствии нанополимера ПНИПААм [8]. Третий (и наиболее распространенный) путь, эмульсионная полимеризация, требует полимеризации мономера (N-изопропилакриламида) в присутствии магнитных наночастиц [9].,10,11]. Нанокомпозиты Fe 3 O 4 -PNIPAAm нашли широкое применение в биомедицинских и биотехнологических приложениях. Потребуются высокостабильные, контролируемые и хорошо диспергированные магнитные наночастицы, чтобы повысить пригодность таких нанокомпозитов для будущих приложений. Одно из недавних нововведений включает внешнее магнитное поле, которое создает локальный источник тепла для самонагревающихся частиц, заставляя PNIPAAm сжиматься и, в свою очередь, позволяя высвобождать инкапсулированные лекарства [12]. Это явление в сочетании с магнитными шариками, нацеленными на опухоли, открывает новые потенциальные методы лечения рака, такие как гипертермия. Гипертермия может быть вызвана колебанием наночастиц в колеблющемся магнитном поле на частотах от килогерц до мегагерц. Другое Fe 3 O 4 Нанокомпозиты -PNIPAAm недавно были синтезированы для контроля высвобождения биоактивных молекул, таких как миоглобин или витамин B12, и для доставки лекарств [13]. Недавнее исследование с использованием суперпарамагнитных наночастиц Fe 3 O 4 , покрытых PNIPAAm, показало, что термически индуцированная агрегация наночастиц оксида железа значительно увеличивает контраст T2 во время магнитно-резонансной томографии [14]. Ясно, что Fe 3 O 4 -PNIPAAm показывает большие перспективы для будущих разработок как в биомедицинских, так и в биотехнологических приложениях. Следовательно, важно провести дальнейшие исследования биосовместимости этого материала и его антибактериального действия.

В этом исследовании мы исследовали влияние трех методов приготовления на физико-химические свойства нанокомпозитов Fe 3 O 4 -PNIPAAm. При этом мы стремимся оценить наиболее удобный метод получения нанокомпозитов с улучшенными свойствами для биологических приложений. Впервые мы также описываем антибактериальные эффекты трех нанокомпозитов Fe 3 O 4 -PNIPAAm, используя многоцелевой подход, скорость роста бактерий, жизнеспособность, клеточную морфологию и уровень повреждения ДНК.

Методы

Химикаты

Гексагидрат хлорида железа(III) (FeCl 3 .6H 2 O, ≥ 98%), тетрагидрат хлорида железа(II) (FeCl 2 ≥7 .6 O ,6H 9053 99%), гидроксид аммония (26% NH 3 в H 2 O), N-изопропилакриламид (NiPAM, ≥ 99%), N,N-метиленбис(акриламид) (BIS, ≥ 99%), додецилсульфат натрия (SDS, ≥ 99%) и персульфат аммония (APS, ≥ 98,5%) были куплены свежими у Sigma-Aldrich, Германия.

Получение PNIPAAm путем эмульсионной полимеризации

NiPAM (4 г), BIS (0,2 г) и SDS (0,3 г) растворяли в 350 мл деионизированной воды (DI) при 70 °C в атмосфере азота. АПС (0,0035 г) растворяли в 1 мл ДИ и добавляли в реакционный сосуд, чтобы начать реакцию. Через 4 часа реакцию останавливали и полученные частицы промывали деионизированной водой. Наконец, наночастицы PNIPAAm отделяли центрифугированием (12000 об/мин в течение 30 мин) и использовали в дальнейших реакциях.

Приготовление магнетита (FE

3 O 4 ) Наночастицы

FECL 2 · 4H 2 O (1,9 г) и FECL 3 7 · 6h ). 1:2) растворяли в DI (100 мл) и нагревали до 70 °C. К раствору быстро добавляли гидроксид аммония (NH 4 OH; 6 мл), в результате чего немедленно образовывался темно-черный магнитный осадок. Наконец, суспензию наночастиц Fe 3 O 4 перемешивали в течение 30 минут при 70 °C. Продукт несколько раз промывали DI, после чего Fe 3 O 4 наночастицы сушили на роторном испарителе (25 мбар при 40 °C) до образования мелкодисперсного порошка. Это использовалось во всех дальнейших реакциях.

Получение магнитного нанокомпозита ПНИПААм путем эмульсионной полимеризации (Fe

3 O 4 -PNIPAAm-1)

NiPAM (0,4 г), свежеприготовленный Fe 3 O 4 9050. 7 наночастиц 0,2 г) и SDS (0,3 г) растворяли в 350 мл DI и нагревали до 70 °C в атмосфере азота. Затем АПС (0,0035 г) растворяли в 1 мл ДИ и добавляли в реакционный сосуд, чтобы начать реакцию. Через 4 ч реакцию остановили и приготовленный нанокомпозит промыли ДИ. Наконец, Fe 3 O 4 -PNIPAAm-1 отделяли центрифугированием (12 000 об/мин в течение 30 мин) и затем сушили с использованием роторного испарителя (25 мбар при 40 °C). Порошкообразный материал хранили в темноте при комнатной температуре.

Получение магнитного нанокомпозита PNIPAAm методом осаждения in situ (Fe

3 O 4 -PNIPAAm-2)

FeCl 2 (0,148 г), FeCl 3

7 были смешаны хорошо и добавили к 1 г PNIPAAm. НХ 4 9Затем к раствору быстро добавляли 0537 OH (3 мл), что немедленно приводило к образованию темно-черного магнитного осадка. Затем суспензию перемешивали в течение 30 минут при 70 °C. Приготовленный нанокомпозит промывали ДИ, после чего выделяли Fe 3 O 4 -PNIPAAm-2 центрифугированием (12 000 об/мин в течение 30 мин) и сушили на роторном испарителе (25 мбар при 40 °C). Полученный порошок хранили в темноте при комнатной температуре.

Получение магнитного нанокомпозита PNIPAAm посредством физического добавления (Fe

3 O 4 -PNIPAAm-3)

Свежеприготовленный PNIPAAm (1 г), свежеприготовленный Fe 3 O 4 наночастицы (0,5 г) и DI (5 мл) хорошо перемешали, и полученную смесь суспензию перемешивают в течение 30 мин при 70°С. Полученный таким образом нанокомпозит промывали ДИ, после чего Fe 3 O 4 -PNIPAAm-3 отделяли центрифугированием (12000 об/мин в течение 30 мин) и сушили на роторном испарителе (25 мбар при 40 °C). . Порошкообразный материал хранили в темноте при комнатной температуре.

Характеристика нанокомпозитов

Размер и дзета-потенциал нанокомпозитов Fe 3 O 4 -PNIPAAm измеряли после полного растворения наночастиц в DI (диспергирование в DI с последующей обработкой ультразвуком в течение 2 минут при комнатной температуре). Измерения дзета-потенциала проводили с использованием анализатора Zetasizer Nano (Malvern Instruments, США) при pH 7. Для измерения гидродинамического диаметра агрегатов частиц в DI использовали прибор динамического рассеяния света (DLS) Zetasizer Nano. Для количественной оценки количества покрытия и определения термической стабильности нанокомпозита был проведен термогравиметрический анализ (ТГА). Термические исследования проводились на 3–4 мг сухого образца при температуре от 25 до 900 °С на приборе TGA Q500 (TA Instruments, США) в атмосфере азота (скорость нагрева 10 °С/мин). Магнитные свойства материала измеряли с помощью вибрационного магнитометра MicroMag™ 2900 (Princeton Measurements Corporation, США). Микроскопические изображения получали с помощью сканирующего электронного микроскопа (СЭМ), частицы предварительно тщательно растворяли в ДИ, а каплю раствора помещали на медную сетку автоэмиссионного СЭМ Zeiss ULTRA Plus, оснащенного катодом Шоттки. Все изображения были проанализированы с использованием программного обеспечения Smart SEM версии 5. 05 (Zeiss, Германия) для обработки изображений при напряжении 1,5 кВ.

Бактериальные штаммы и среды

Грамотрицательные Escherichia coli CCM3954 и грамположительные Staphylococcus aureus CCM 3953 (Брно, Чехия) использовались для всех экспериментов. Подробная информация о штаммах представлена ​​на веб-странице «Чешской коллекции микроорганизмов» (http://www.sci.muni.cz/ccm/). Каждая бактериальная культура была свежеприготовленной и перед проведением биологических экспериментов выдерживалась в течение ночи в соевом питательном бульоне (Sigma-Aldrich).

Повреждение ДНК

Кометные анализы проводили по методологии Singh et al. [15] и Solanky et al. [16]. Все химикаты были приобретены у PENTA (Чехия), если не указано иное. Свежую бактериальную культуру (доведенную до 10 7 клеток/мл) выращивали в течение ночи, а затем инкубировали с двумя концентрациями (0,1 и 1 г/л) PNIPAAm и каждым из нанокомпозитов Fe 3 O 4 -PNIPAAm для 30 мин при 37 °C.

Микрогель готовили, нанося 100 мл агарозы на матовую поверхность предметного стекла и закрывая его покровным стеклом 24 × 50 мм (ThermoFisher Scientific, США). Предметные стекла оставляли при комнатной температуре на 5 мин, затем покровные стекла удаляли и давали предметным стеклам высохнуть. Этот высушенный слой агарозы (первый слой) обеспечивал прочную основу для последующих слоев. После воздействия на бактерии PNIPAAm и Fe 3 O 4 Нанокомпозиты -PNIPAAm на 30 мин брали 2 мкл (содержащие примерно 10 000 экспонированных клеток) и смешивали со 100 мкл свежеприготовленной 0,5% агарозы. Эту смесь пипеткой наносили на матовые предметные стекла и сразу же накрывали покровным стеклом (второй слой). Затем предметные стекла охлаждали в стальном лотке над льдом. Покровные стекла удаляли через 1 мин и наносили третий слой из 100 мкл лизирующей агарозы (в том числе 0,5% агарозы с 5 мкг/мл РНКазы А [Ameresco, США], 0,25% N-лауроилсаркозина натрия и 0,5 мг/мл лизоцима). был изготовлен, опять же с использованием покровного стекла. Затем слайды оставляли на льду на 10 минут, а затем помещали во влажную камеру на 30 минут при 37 °C. После снятия покровного стекла предметные стекла погружали в лизирующий раствор, содержащий 2,5 М NaCl, 100 мМ тетранатриевой соли ЭДТА, 10 мМ трис-буфера с pH 10, 1 % лауроилсаркозина натрия и 1 % тритона X-100. После 1 часа лизиса при комнатной температуре предметные стекла переносили в раствор для ферментативного расщепления, содержащий 2,5 М NaCl, 10 мМ ЭДТА и 10 мМ трис, pH 7. Четыре буфера с 1 мг/мл протеиназы K. Затем слайды инкубировали при 37 °C в течение 2 ч, после чего их помещали на горизонтальную плиту электрофоретического блока (Scie-plas, Великобритания) и уравновешивали 300 мМ ацетата натрия и 100 мМ pH 9.Трис-буфер в течение 20 минут, затем электрофорез при 12 В (0,4 В/см, приблизительно 100 мА) в течение 30 минут. После электрофореза предметные стекла погружали в 1 М ацетат аммония в этаноле (5 мл 10 М ацетата аммония и 45 мл абсолютного этанола) на 20 минут, абсолютный этанол на 0,5 часа и 70% этанол на 10 минут, после чего предметные стекла сушили на воздухе при комнатной температуре. Для достижения равномерного окрашивания предметные стекла предварительно обрабатывали 50 мл свежеприготовленного раствора 5% буфера ТЕ и 10 мМ NaH 9.0536 2 Заказ на поставку 4 . Затем предметные стекла окрашивали 50 мкл свежеприготовленного 1 мМ раствора красителя SYBR (Sigma-Aldrich, США) в ТЕ-буфере в течение 30 мин. Миграцию разрывов цепей ДНК (комет) визуализировали с помощью флуоресцентного микроскопа AxioImager при увеличении × 400 и программного обеспечения AxioVision v 4 (Zeiss, Германия). Обычно длина хвоста 50 комет измерялась отдельно для каждой выборки.

Скорость роста бактерий, жизнеспособность клеток и морфология

Протокол эксперимента соответствовал протоколу, описанному Darwish et al. [17]. Вкратце, Fe 3 O 4 Исходную суспензию нанокомпозита -PNIPAAm (10 г/л) добавляли к свежей бактериальной культуре для получения конечных концентраций 0,01, 0,05, 0,5 и 1 г/л. Каждую концентрацию получали в трех экземплярах в 24-луночном планшете. Отрицательные контроли, состоящие из бактериальных клеток только в питательной среде и нанокомпозита Fe 3 O 4 -PNIPAAm только в питательной среде, запускали параллельно. Затем планшет инкубировали при 37 °C, после чего измеряли оптическую плотность образца при 600 нм (ОП600) каждые 2 ч в течение 6 ч с использованием планшет-ридера Synergy™ HTX (Biotek, США). Скорость роста бактерий определяли как линейную регрессию R измерения OD600 (единицы поглощения, AU) в зависимости от времени инкубации в часах. Предварительные измерения образцов нанокомпозитов без клеток (6 ч при 600 нм) показали постоянные значения поглощения, которые не мешали значениям поглощения нанокомпозитов, измеренным с бактериальными клетками.

Для каждой формы Fe 3 O 4 -PNIPAAm рассчитывали эффективную концентрацию нанокомпозита при 10% ингибировании (EC10) скорости роста бактерий ( µ ) по уравнению: I (%) = ( µ С µ Т )/ µ С × 100, где I — ингибирование, мк С – среднее значение скорости роста в контроле, µ Т – скорость роста культуры под действием нанокомпозита [18].

После 24-часовой инкубации аликвоты по 100 мкл каждого образца окрашивали с использованием набора L7007 Bacterial Viability Kit (Molecular Probes, Invitrogen, США) в темноте в течение 15 мин. Определение доли живых (Ex/Em 485/528 нм) и мертвых клеток (Ex/Em 485/645 нм) проводили с помощью планшет-ридера Synergy™ HTX (Biotek, США). Процент мертвых клеток рассчитывали как отношение мертвых клеток к живым. В то же время изображения E. coli и S. aureus получали с помощью флуоресцентного микроскопа AxioImager (Zeiss, Германия) с Ex/Em 470/490–700 нм. Длину клеток E. coli и площадь скоплений клеток S. aureus определяли при увеличении × 600 с использованием программного обеспечения AxioVision v 4 (Zeiss, Германия).

Статистический анализ

Различия между бактериальными штаммами, инкубированными в ПНИПААм, различных нанокомпозитах Fe 3 O 4 -ПНИПААм и контрольных образцах без нанокомпозитов проверяли с помощью ANOVA и критерия Даннета (GraphPad PRISM, США).

Результаты

В этом исследовании мы синтезировали нанокомпозит Fe 3 O 4 -PNIPAAm, используя три различных протокола: эмульсионная полимеризация (Fe 3 O 4 -PNIPAAm-1), осаждение in situ (6Fe 9053 3 O 4 -PNIPAAm-2) и физической добавки (Fe 3 O 4 -PNIPAAm-3). СЭМ-изображение показало, что тип используемого протокола оказывает явное влияние на морфологию образца и размер частиц, с Fe 3 O 4 -PNIPAAm-1, Fe 3 O 4 -PNIPAAm-2 и Fe 3 O 4 -PNIPAAm-3 с широким распределением по размерам, агломерацией из-за высокой поверхностной энергии между наночастицами и наличием магнитного диполя взаимодействия ( рис. 1 ) .

Рис. 1

Электронно-микроскопические изображения и гистограммы ПНИПААм ( a ), Fe 3 O 4 -ПНИПААм-1 ( b ), Fe 3 O 4 -PNIPAAm-2 ( c ) и Fe 3 O 4 -PNIPAAm-3 ( d ). Масштабная линейка = 200 нм

Полноразмерное изображение

ТГА показала, что образцы Fe 3 O 4 -PNIPAAm стали относительно стабильными при температурах выше 400 °C (рис. 2). В целом наночастицы PNIPAAm показали более низкое остаточное содержание, чем нанокомпозиты Fe 3 O 4 -PNIPAAm. Значения дзета-потенциала для поверхностного заряда составляли - 1,58 мВ для PNIPAAm, - 15,6 мВ для Fe 9.0536 3 O 4 -PNIPAAm-1, − 16,4 мВ для Fe 3 O 4 -PNIPAAm-2 и − 1,8 мВ для Fe 3 O 4 -3 -PNIPAAm-3 Значения вибрационного магнитометра для насыщения намагниченности составили 50,4 эме/г для Fe 3 O 4 -PNIPAAm-1, 53,7 эме/г для Fe 3 O 4 -PNIPAAm-2 и 21,0 эме/г для Fe 3 О 4 -ПНИПААм-3. Динамическое светорассеяние выше (45 °C) и ниже (25 °C) LCST указывает на гидродинамический размер PNIPAAm, равный 50 нм при 25 °C и 27 нм при 45 °C; 412 нм при 25 °C и 197 нм при 45 °C для Fe 3 O 4 -PNIPAAm-1; 212 нм при 25°C и 130 нм при 45°C для Fe 3 O 4 -PNIPAAm-2 и 122 нм при 25°C и 60 нм при 45°C для Fe 3 O 4 — ПНИПААм-3 (рис. 3).

Рис. 2

Термогравиметрический анализ ПНИПААм (а), Fe 3 O 4 -ПНИПААм-1 (б), Fe 3 O 4 -ПНИПААм-2 (в) и Fe 3 90 О 4 -ПНИПААм-3 (г)

Изображение в натуральную величину

Рис. 3

Динамическое светорассеяние ниже (25°C) и выше (45°C) нижней критической температуры раствора фазовый переход для ПНИПААм ( a ), Fe 3 O 4 -ПНИПААм-1 ( B ), FE 3 O 4 -PNIPAAM -2 ( C ) и FE 3 O 4 -PNIPAAM -3 ( D )

Полнофункциональный изображение 3

. O 4 -PNIPAAm Нанокомпозит Влияние на бактериальную ДНК

0043 E. coli и S. aureus в клетках, обработанных нанокомпозитами Fe 3 O 4 -PNIPAAm, 40% EtOH (положительный контроль) и необработанных клетках (отрицательный контроль). Все нанокомпозиты Fe 3 O 4 -PNIPAAm продемонстрировали одинаково значимое влияние ( P  < 0,001) на среднюю длину хвоста кометы E. coli и S. aureus при всех концентрациях (рис. 4) по сравнению с контрольными клетками, инкубированными без нанокомпозитов.

Рис. 4

Пример хвоста кометы Escherichia coli , после обработки Fe 3 O 4 -PNIPAAm-3 ( a ). Результаты разрывов цепей ДНК (длина хвоста кометы) для Escherichia coli ( b ) и Staphylococcus aureus ( c ), инкубированных в течение 30 минут с 40% EtOH (положительный контроль), без нанокомпозитов (отрицательный контроль) , PNIPAAm (0,1 и 1 г/л) и (1) Fe 3 O 4 -PNIPAAm-1, (2) Fe 3 O 4 -PNIPAAm-2 и (3) Fe 3 O 4 -PNIPAAm-3 (столбики погрешностей представляют SD для длины кометы 50 ячеек) ). Уровень значимости *** P  < 0,001

Полноразмерное изображение

Fe

3 O 4 -PNIPAAm Нанокомпозит Антибактериальный эффект отрицательный результат E. coli ко всем нанокомпозитам после 6-часовой экспозиции. Фе 3 O 4 -PNIPAAm-1 и Fe 3 O 4 -PNIPAAm-2 сильно ингибируют рост бактерий по сравнению с PNIPAAm и Fe . Coli Скорость роста значительно снизилась с 0,08 до 0,028 ( P <0,001) с Fe 3 O 4 -PNIPAAM -2 и 0,005 ( P <0,001) с FE 3 O — <0,001). ПНИПААм-1 (1 г/л). Никакого влияния на скорость роста E. coli ни PNIPAAm, ни Fe 9 не наблюдалось.0536 3 О 4 -ПНИПААм-3 (рис. 5а). Для сравнения, на скорость роста S. aureus влияли все нанокомпозиты Fe 3 O 4 -PNIPAAm и наночастицы PNIPAAm. При более низких концентрациях (0,01 г/л и 0,05 г/л) скорость роста лишь незначительно снижалась с 0,07 до 0,06 ( P  <0,05). Однако при более высоких концентрациях (0,5 и 1 г/л) наблюдалось значительное снижение с 0,07 до 0,001 для PNIPAAm, 0,0 для Fe 3 O 4 -PNIPAAm-1, 0,01 с Fe 3 O 4 -PNIPAAm-2 и 0,009 с Fe 3 O 4 -PNIPAAm-3 (все P 9 0044 1<; Кроме того, EC10 для всех нанокомпозитов Fe 3 O 4 -PNIPAAm и контроль наночастиц PNIPAAm были ниже для S. aureus , чем для E. coli (таблица 1).

Рис. 5

Относительная скорость роста Escherichia coli ( a ) и Staphylococcus aureus ( b ) после 6-часовой инкубации в различных концентрациях (0,01, 0,05, 0,5 и 1 г/л) ПНИПААм (красные кружки), Fe 3 O 4 -ПНИПААм-1 (оранжевый ромбы [1]), Fe 3 O 4 -PNIPAAm-2 (зеленые треугольники [2]) и Fe 3 O 4 -PNIPAAm-3 (синие треугольники [3]). Столбики погрешностей показывают стандартное отклонение, рассчитанное из n  = 3. Уровень значимости *** P  < 0,001

Полноразмерное изображение

Таблица 1 Эффективная концентрация ПНИПААм, Fe 3 O 4 -PNIPAAm-1, Fe 3 O 4 -PNIPAAm-2 и Fe 3 O 4 -PNIPAAm-наночастицы /l) при 10% ингибировании роста (EC10), определенном для грамотрицательных Escherichia coli и грамположительных Staphylococcus aureus

Полноразмерная таблица

Процент погибших клеток E. coli увеличивался с увеличением концентрации Fe 3 O 4 -ПНИПААм нанокомпозит через 24 часа. PNIPAAm (0,5 и 1 г/л), например, вызвал значительное увеличение количества мертвых клеток E. coli (20%) по сравнению с культурами без нанокомпозита Fe 3 O 4 -PNIPAAm (12%). Fe 3 O 4 -PNIPAAm-1 (0,5 г/л) приводил к образованию до 28% мертвых клеток E. coli и 32% при 1 г/л ( P  < 0,001). Влияние Fe 3 O 4 -PNIPAAm-2 было ниже, чем у Fe 3 O 4 -PNIPAAm-1 и Fe 3 O 4 -PNIPAAm-3, при этом процент погибших клеток увеличивается с 13 до 25% при воздействии концентраций 0,01 и 1 г/л соответственно ( P  < 0,001). Как при 0,5, так и при 1 г/л Fe 3 O 4 -PNIPAAm-3 приводил к примерно 25% мертвых клеток ( P  < 0,001; рис. 6a). На процент мертвых клеток S. aureus значительно влиял только 1 г/л Fe 3 O 4 -PNIPAAm-1 и Fe 3 O 4 -PNIPAAm-3, с мертвыми клетками, достигающими до 50 и 48% соответственно ( P  < 0,001). Контроль без нанокомпозитов содержал около 18% мертвых клеток, тогда как в более низких концентрациях ПНИПААм, Fe 3 О 4 -ПНИПААм-1 и Fe 3 О 4 -ПНИПААм-3 доля мертвых клеток была еще ниже. PNIPAAm в концентрациях 0,5 и 1 г/л приводил к 25 и 30% ( P  < 0,005) мертвых клеток соответственно. Фе 3 O 4 -PNIPAAm-2 не оказывал влияния на культуры S. aureus (рис. 6b).

Fig. 6

Percentage of dead Escherichia coli ( a ) and Staphylococcus aureus ( b ) cells after 24-h exposure to PNIPAAm and (1) Fe 3 O 4 — ПНИПААм-1, (2) Fe 3 O 4 -PNIPAAm-2 и (3) Fe 3 O 4 -PNIPAAm-3. Столбики погрешностей показывают стандартное отклонение n  = 3. Уровни значимости * P  < 0,05, ** P  < 0,005, *** P  < 0,001

Изображение в полный размер площадь скопления клеток . При более высоких концентрациях длина E. coli не изменялась в присутствии Fe 3 O 4 -PNIPAAm-2, как и Область группы клеток S. aureus в присутствии Fe 3 O 4 -PNIPAAm-1. Однако длина E. coli была значительно увеличена в присутствии 1 г/л PNIPAAm (5,4 мкм, P  < 0,005), Fe 3 O 4 -PNIPAAm-1 (6 мкм, P < 0,001) и Fe 3 O 4 -PNIPAAm-3 (10 мкм, P < 0,001) (рис. 7а), а S. aureus образовывали более крупные скопления при воздействии PNIPAAm (1937 мкм0676 2 , P <0,001), FE 3 O 4 -PNIPAAM -2 (924 мкм 2 , P <0,001) и FE 3 7.3 4 4 4 4 .36.36.36.376.376.376.376.376.4 4 4. 6 4 7 4 6. 1722 мкм 2 , P  < 0,001) (рис. 7б).

Рис. 7

Длина клеток Escherichia coli ( a ) и площадь скопления клеток Staphylococcus aureus ( b ) после 24-часовой инкубации с PNIPAAm и (1) 4 -ПНИПААм-1, (2) Fe 3 О 4 -ПНИПААм-2 и (3) Fe 3 О 4 -ПНИПААм-3. Столбики погрешностей показывают стандартное отклонение, определенное из n  = 50. Уровни значимости ** P  < 0,05 и *** P  < 0,001

Полноразмерное изображение

Обсуждение

Оба метода синтеза магнитные наночастицы которых были добавлены в полимерную матрицу, оказали явное влияние на внутренние физико-химические свойства магнитного Fe 3 O 4 -ПНИПААм нанокомпозиты. Поэтапный синтез оказал сильное влияние на свойства нанокомпозита, что привело к изменению формы частиц, распределения по размерам, размеру и химическому составу поверхности, а также к последующим изменениям магнитных свойств [19, 20]. Эмульсионная полимеризация (Fe 3 O 4 -PNIPAAm-1), простой и точный метод, позволила получить стабильные нанокомпозиты с узким распределением частиц по размерам и самой низкой тенденцией к агрегации, качествами, особенно важными в биомедицинских применениях [17]. Образующиеся в результате как стерического, так и кулоновского отталкивания, размеры частиц были достаточно малы, чтобы избежать осаждения [21]. Наименее эффективным методом было физическое добавление (Fe 3 О 4 -ПНИПААм-3). Мало того, что он был произведен в три отдельных этапа и, следовательно, потребовалось больше времени для приготовления, полученный нанокомпозит показал более высокую агрегацию, чем любой из двух других методов производства. Кроме того, наши результаты показали, что Fe 3 O 4 -PNIPAAm-3, полученное таким образом, могло содержать нежелательные остатки наночастиц PNIPAAm и Fe 3 O 4 .

Полимеры могут присоединяться к магнитным наночастицам физическими (нековалентными) или ковалентными связями, при этом полученный гибридный материал проявляет определенные свойства в зависимости от выбранного пути синтеза. Значительное ресуспендирование магнитных наночастиц происходит, когда приготовление происходит в растворителе, в котором происходит образование гибридных наночастиц, после чего агрегация и сегрегация могут стать проблемой. В этом случае формирование магнитных наночастиц in situ во многих случаях может быть лучшей альтернативой. Кроме того, если концентрация поверхностно-активного вещества слишком низкая, коалесценция изменит размер капель, тогда как при слишком высокой концентрации могут образоваться мицеллы, что приведет к мицеллярному зародышеобразованию. В этом отношении важно, чтобы концентрация поверхностно-активного вещества выбиралась тщательно на основе точной характеристики свойств поверхности и степени модификации частиц, чтобы обеспечить совместимость поверхности неорганических частиц с полимерной матрицей.

Для оценки магнитных свойств нанокомпозитов Fe 3 O 4 -ПНИПААм важно знать содержание МНЧ в нанокомпозите. ТГА применяли для количественного определения количества МНЧ и исследования термической стабильности нанокомпозитов Fe 3 O 4 -PNIPAAm по сравнению с наночастицами PNIPAAm. Все три нанокомпозита Fe 3 O 4 -ПНИПААм показали более высокую термостойкость, чем наночастицы ПНИПААм, предположительно из-за присутствия Fe 3 O 4 частиц в матрице (рис. 2). Более высокие остатки в магнитных нанокомпозитах можно объяснить присутствием в образцах неорганических соединений Fe 3 O 4 , которые сохраняют устойчивость даже при более высоких температурах.

Fe 3 O 4 -PNIPAAm-1 показал самую высокую термическую стабильность нанокомпозита наряду с самой низкой потерей веса. До 200 °C основным источником потери массы была потеря воды и физическая адсорбция полимерного слоя [22]; однако выше 200 °C потери были в основном связаны с разложением химического слоя, связывающего ПНИПААм. Остаток образца, ставший стабильным при температуре выше 400 °C, составлял 87 % от первоначальной массы, что соответствует количеству магнитных наночастиц в нанокомпозите. Одной из целей этого процесса подготовки было получение нанокомпозита с магнитными свойствами, предотвращающими агрегацию и позволяющими быстро повторно диспергировать, как только магнитное поле выключается. Такие свойства позволили бы использовать его в ряде различных областей, включая гипертермическое лечение опухолей, в качестве контрастирующих агентов в магнитно-резонансной томографии, при восстановлении тканей, покрытии биомедицинских устройств, иммуноанализе, разделении клеток и биомагнитном разделении биомолекул [18, 23, 24]. ,25,26]. Мы протестировали наши наноматериалы с помощью насыщения намагниченности, которая оценивает максимально возможную намагниченность вещества, за пределами которой не происходит никаких дальнейших изменений, несмотря на усиление магнитного поля. Наши результаты показали Fe 3 O 4 -PNIPAAm-2, чтобы иметь самый высокий уровень насыщения намагниченностью из трех протестированных нанокомпозитов. Наши значения были ниже (53,7 эм.е.м./г), чем те, о которых сообщалось ранее для непокрытых наночастиц Fe 3 O 4 (92 эм.е.е./г) [27], однако, по-видимому, из-за поверхностных взаимодействий порядка/беспорядка в магнитном спиновом моменте. увеличение массы и объема нанокомпозита за счет наличия полимерного слоя ПНИПААм.

Особый интерес с точки зрения биомедицинского применения представляет поведение растворов полимер-вода, стабильных ниже НКТР [28]. После нагревания приготовленного Fe 3 O 4 -PNIPAAm Наноматериалы выше температуры перехода происходил переход клубок-глобула с последующей межмолекулярной ассоциацией. Все три наноматериала Fe 3 O 4 -PNIPAAm продемонстрировали очень похожее поведение, при этом все они сжимались при повышении температуры. PNIPAAm широко используется в качестве термочувствительного полимера из-за близости его НКТР (~ 30–32 °C) к физиологической температуре. Кроме того, термоответственность PNIPAAm оказалась полезной для высвобождения лекарственного средства in vivo [28]. В настоящее время разработаны наноразмерные магнитные гидрогели на основе PNIPAAm для тераностического применения, включая те, в которых содержится Fe 9 в низких концентрациях.0536 3 O 4 магнитные наноструктуры, приводящие к НКТР ~ 40 °C, что делает Fe 3 O 4 -PNIPAAm особенно интересным для приложений с контролируемым высвобождением лекарств [29].

Гистограммы наночастиц с помощью СЭМ показали более широкое распределение по размерам, чем при использовании DLS (рис. 1). Однако интерпретация данных DLS включает взаимодействие множества параметров, включая размер, концентрацию, форму, полидисперсность и свойства поверхности частиц. Измерение гидродинамического размера термочувствительных образцов в зависимости от температуры является распространенным методом характеристики поведения НКТР, при котором наночастицы сжимаются при повышении температуры, осаждаются растворимые полимеры и увеличивается размер частиц. Как и ожидалось, PNIPAAm имеет меньший гидродинамический размер, чем Fe 3 O 4 -ПНИПААм нанокомпозиты. Из нанокомпозитов Fe 3 O 4 -PNIPAAm-3 показал наименьший гидродинамический размер и узкое распределение по размерам. Изменчивость гидродинамического размера, вероятно, связана с присутствием в матрице PNIPAM наночастиц Fe 3 O 4 , что увеличивает как размер частиц, так и агрегацию в воде (рис. 3) [8].

Все Fe 3 O 4 Нанокомпозиты -PNIPAAm проявляли антимикробные свойства (табл. 2), причем как грамотрицательные, так и грамположительные бактерии отрицательно влияли на E. coli скорость роста в порядке Fe 3 O 4 -PNIPAAm-1 > Fe 3 O 4 -PNIPAAm-2 > Fe 3 O 7PNmIP=3PNmIPAA 4 90 537 -PNIPAAm-1 и S. aureus скорость роста как Fe 3 O 4 -PNIPAAm-1 > Fe 3 O 4 -PNIPAAm-2 > Fe 3 O -mPNmIP 3 — 9 AAАА4. Точно так же антибактериальные свойства, необходимые для медицинских применений, таких как покрытия биомедицинских устройств и перевязочные материалы для ран, были подтверждены для ряда новых композитов PNIPAAm, включая ZnO-PNIPAAm, Ag-PNIPAAm и хитозан-PNIPAAm [23,24,25,26]. .

Таблица 2. Резюме антимикробного действия PNIPAAm и трех нанокомпозитов на Escherichia coli и Staphylococcus aureus

Полный размер таблицы

По сравнению с модифицированными наноматериалами Fe 3 O 4 , описанными в наших более ранних исследованиях, нанокомпозиты ПНИПААм-1, ПНИПААм-2 и ПНИПААм-3 показали более сильное влияние как на E. coli и S. aureus , с S. aureus Ингибирование роста EC10 в диапазоне от 0,04 до 0,06 г/л для трех наноматериалов, в то время как модифицированные APTS-, PEG- и TEOS-MNPs варьировались от 0,1 до 0,25 г/л [17] и Fe с полимерным покрытием. 3 O 4 (PEI-mC-, PEI- и OA-MNP) имел значение 0,15 г/л [18]. Ингибирование роста бактерий могло быть вызвано несколькими факторами, включая повреждение клеточной мембраны, окислительный стресс и удлинение клеток, что приводило к образованию летальных клеток. С другой стороны, клетки могли бы выжить в таких неблагоприятных условиях, используя ферменты репарации, антиоксиданты и/или временную остановку роста. Это может частично объяснить явление, когда при более низких концентрациях (0,01 и 0,05 г/л) ПНИПААм Fe 3 O 4 -PNIPAAm-1 и Fe 3 O 4 -PNIPAAm-3 доля погибших клеток S. aureus после 24-часовой инкубации была ниже, чем в контроле, где этот фактор отсутствовал. вызывая мобилизацию системы защиты/ремонта. Более высокие концентрации PNIPAAm и нанокомпозитов действительно вызывали значительное увеличение количества мертвых клеток E. coli и S. aureus , что также соответствовало значительному снижению скорости роста клеточных культур.

Воздействие 1 г/л нанокомпозита привело к изменениям морфологии бактериальных клеток, с наибольшим изменением длины клеток E. coli , вызванным Fe 3 O 4 -PNIPAAm-3 > Fe 3 O 4 -PNIPAAM -1> PNIPAAM> FE 3 O 4 -PNIPAAM -2, и FE 3 O 4 -PNIPAAM -3> FE 3 -O -PNIPAAM -3> FE 3 . -PNIPAAM -3> FE 3 . PNIPAAm > Fe 3 O 4 -PNIPAAm-1 для S. aureus кластеризация. Этот эффект наблюдался и ранее при воздействии на одни и те же бактерии различных функциональных магнитных наночастиц [17]. Удлинение клеток E. coli в присутствии нанокомпозитов свидетельствует о временной остановке роста и свидетельствует об адаптивном ответе на окислительный стресс или повреждение ДНК [30]. В случае S. aureus , который представляет собой вид, образующий биопленку, клетки были внедрены на большей площади, чем в контроле без нанокомпозита, при воздействии PNIPAAm, Fe 3 О 4 -ПНИПААм-2 и Fe 3 О 4 -ПНИПААм-3 (рис. 8). Биопленка № S. aureus образовалась при контакте с Fe 3 O 4 -PNIPAAm-1, возможно, из-за его более сильных антибактериальных свойств. S. aureus обычно образует биопленку в суровых условиях для защиты клеток [31]; однако это также может оказать неблагоприятное воздействие на бактерии, поскольку нанокомпозиты могут интегрироваться через биопленку и повреждать клетки, как это уже было описано для Pseudomonas sp. [32].

Рис. 8

Культура клеток S. aureus без нанокомпозитов ( a ) и клетки, заключенные в биопленку после инкубации с нанокомпозитами в течение 24 ч ( b ). Масштабная линейка 10 мкм

Изображение в полный размер

Железо может привести к повреждению ДНК в бактериальных клетках, как описано в предыдущих обзорах [33, 34]; следовательно, мы попытались проверить, вызывают ли наши MNP повреждение ДНК бактерий. Наличие Fe 3 O 4 Нанокомпозиты -PNIPAAm как в низких, так и в высоких концентрациях (0,01 или 1 г/л) вызывали значительное повреждение ДНК E. coli и S. aureus даже после кратковременного воздействия (30 мин). Насколько нам известно, это первое исследование острой генотоксичности магнитных композитов на бактериях; в результате мы не можем напрямую сравнивать наши результаты с результатами других авторов. Однако предыдущие исследования не показали генотоксичности, связанной с наночастицами PNIPAAm, и снижения жизнеспособности клеток при тестировании против двух видов клеток млекопитающих при концентрациях наночастиц до 800 мг/л [30]. С другой стороны, предыдущие исследования генотоксичности МНЧ (γ-Fe 3 O 4 ) показали негативное влияние на клетки фибробластов человека при 100 мг/л [35]. Однако исследования, проведенные с клеточными линиями млекопитающих, нельзя напрямую сравнивать с исследованиями, проведенными с бактериальными клетками, из-за значительных различий в эукариотических и прокариотических клетках.

Выводы

Магнитные поли(N-изопропилакриламидные) нанокомпозиты были получены путем эмульсионной полимеризации (Fe 3 O 4 -PNIPAAm-1), осаждения in situ (Fe 3 O 4 -PNIPAAm-2) и физической добавки (Fe 3 O 4 -PNIPAAm-3). Как Fe 3 O 4 -PNIPAAm-1, так и Fe 3 O 4 -PNIPAAm-2 показали более высокие значения поверхностного заряда и термической стабильности, что указывает на стабильную коллоидную систему. При комнатной температуре Fe 3 O 4 -PNIPAAm-3 демонстрировал самое высокое насыщение намагниченности. Присутствие нанокомпозитов Fe 3 O 4 -PNIPAAm как в низких, так и в высоких концентрациях вызывало значительное повреждение обоих E. coli и S. aureus ДНК даже после кратковременного воздействия приводили к снижению жизнеспособности клеток. В целом, мы предполагаем, что Fe 3 O 4 -PNIPAAm-1, полученный путем эмульсионной полимеризации, является наиболее подходящим методом для получения магнитного нанокомпозита с высокой антимикробной активностью по отношению к грамотрицательным E. coli и грамположительным S. aureus .

Сокращения

Fe 3 O 4 -ПНИПААм:

Магнитный поли(N-изопропилакриламид)

МНП:

Наночастицы магнетита

Ссылки

  1. Hu X, Hao X, Wu Y et al (2013) Многофункциональные гибридные наночастицы кремнезема для контролируемой загрузки и высвобождения доксорубицина с двойной реакцией на температуру и pH. J Mater Chem B 1:1109–1118

    Статья Google ученый

  2. Cooperstein MA, Canavan HE (2013) Оценка цитотоксичности поверхностей, покрытых (N-изопропилакриламидом) и поли(N-изопропилакриламидом). Биоинтерфазы 8:19

    Статья Google ученый

  3. Филиппова О., Барабанова А., Молчанов В., Хохлов А. (2011) Магнитные полимерные шарики: последние тенденции и разработки в синтетическом дизайне и приложениях. Евро Полим J 47:542–559

    Артикул Google ученый

  4. Lee C-F, Lin C-C, Chien C-A, Chiu W-Y (2008) Термочувствительность и контроль высвобождения поли(N-изопропилакриламида-со-акриловой кислоты)/нано-Fe 3 O 4 магнитные композитные латексные частицы который синтезируется новым методом. Евро Полим J 44:2768–2776

    Артикул Google ученый

  5. Афрасиаби А., Хоффман А.С., Кэдвелл Л.А. (1987) Влияние температуры на скорость высвобождения биомолекул из термически обратимых гидрогелей. J Член науки 33:191–200

    Артикул Google ученый

  6. Macková H, Horák D (2006) Влияние параметров реакции на свойства термочувствительных поли(N-изопропилакриламидных) микросфер, полученных методом осаждения и дисперсионной полимеризации. J Polym Sci Part A Polym Chem 44:968–982

    Статья Google ученый

  7. Мацкова Х., Кралова Д., Хорак Д. (2009) Магнитные поли(N-изопропилакриламидные) микросферы методом дисперсионной и обратной эмульсионной полимеризации. J Polym Sci 47: 4289–4301

  8. Mu J, Zheng S (2007) Поли(N-изопропилакриламид), наносшитый полиэдрическим олигомерным силсесквиоксаном: поведение гидрогелей в зависимости от температуры. J Коллоидный интерфейс Sci 307:377–385

    Статья Google ученый

  9. Zhang X, Zhou L, Zhang X, Dai H (2009) Синтез и свойства растворов термочувствительных сополимеров на основе NIPAM. J Appl Phys 113:1763–1772

    Google ученый

  10. Хоар Т., Тимко Б.П., Сантамария Дж. и др. (2011) Нанокомпозитные мембраны, активируемые магнитным полем: универсальная платформа для триггерного высвобождения лекарств. Nano Lett 11:1395–1400

    Статья Google ученый

  11. Dionigi C, Lungaro L, Goranov V et al (2014) Интеллектуальный магнитный поли(N-изопропилакриламид) для контроля высвобождения биоактивных молекул. J Mater Sci Mater Med 25:2365–2371

    Статья Google ученый

  12. Balasubramaniam S, Pothayee N, Lin Y et al (2011) Суперпарамагнитные наночастицы оксида железа, покрытые поли(N-изопропилакриламидом): релаксометрическое и флуоресцентное поведение коррелируют с температурно-зависимой агрегацией. Chem Mater 23:3348–3356

    Статья Google ученый

  13. Сингх Н.П., Стивенс Р.Э., Сингх Х., Лай Х. (1999) Визуальная количественная оценка двухцепочечных разрывов ДНК у бактерий. Mutat Res — Fundam Mol Mech Mutagen 429:159–168

    Артикул Google ученый

  14. Darwish MSA, Nguyen NHA, Ševcu A, Stibor I (2015) Функционализированные магнитные наночастицы и их влияние на Escherichia coli и Staphylococcus aureus. J Nanomater 2015. doi 10.1155/2015/416012.

  15. Darwish MSA, Nguyen NHA, Ševců A et al (2016) Самонагревающиеся и антибактериальные наночастицы с полимерным покрытием двойного действия для магнитной гипертермии. Mater Sci Eng C 63:88–95

    Статья Google ученый

  16. Lee Y, Lee J, Bae CJ et al (2005) Крупномасштабный синтез однородных и кристаллических наночастиц магнетита с использованием обратных мицелл в качестве нанореакторов в условиях кипячения. Adv Funct Mater 15: 503–509

    Артикул Google ученый

  17. Акбарзаде А., Сами М., Даваран С. (2012) Магнитные наночастицы: получение, физические свойства и применение в биомедицине. Nanoscale Res Lett 7:144

    Артикул Google ученый

  18. Куржалс С., Зирбс Р., Реймхульт Э. (2015) Синтез и магнитотермическое приведение в действие наночастиц ядра оксида железа и оболочки ПНИПАМ. ACS Appl Mater Interfaces 7:19342–19352

    Артикул Google ученый

  19. Yu Q, Cho J, Shivapooja P et al (2013) Умные полимерные поверхности с наноструктурой для контролируемого прикрепления, уничтожения и высвобождения бактерий. ACS Appl Mater Interfaces 5:9295–9304

    Артикул Google ученый

  20. Спасоевич Дж., Радосавлевич А., Крстич Дж. и др. (2015) Антибактериальные нанокомпозиты Ag-поли(N-изопропилакриламид/итаконовая кислота), синтезированные с помощью гамма-облучения. Евро Полим J 69:168–185

    Артикул Google ученый

  21. Kong M, Chen XG, Xing K, Park HJ (2010) Противомикробные свойства хитозана и механизм действия: обзор современного состояния. Int J Food Microbiol 144:51–63

    Статья Google ученый

  22. Fajaroh F, Setyawan H, Widiyastuti W, Winardi S (2012) Синтез наночастиц магнетита электрохимическим методом без поверхностно-активных веществ в водной системе. Adv Powder Technol 23: 328–333

    Артикул Google ученый

  23. Акбарзаде А., Самией М., Даваран С. (2012). Магнитные наночастицы: получение, физические свойства и применение в биомедицине. Nanoscale Res Lett 7:144

  24. Jaiswal MK, De M, Chou SS et al (2014) Термочувствительные магнитные гидрогели как тераностические наноконструкции. ACS Appl Mater Interfaces 6:6237–6247

    Артикул Google ученый

  25. Tamarit J, Cabiscol E, Joaquim R. (1998) Идентификация основных окислительно поврежденных белков в клетках Escherichia coli, подвергшихся окислительному стрессу. J Biol Chem 273:3027–3032

  26. Chien CC, Lin BC, Wu CH (2013) Формирование биопленки и устойчивость к тяжелым металлам под воздействием окружающей среды Pseudomonas sp. Biochem Eng J 78:132–137

    Статья Google ученый

  27. Henle ES, Linn S (1997) Формирование, предотвращение и восстановление повреждений ДНК перекисью железа/водорода. J Biol Chem 272:19095–19098

    Статья Google ученый

  28. Шевцу А., Эль-Темсах Ю.С., Йонер Э.Дж., Черник М. (2011)Окислительный стресс, вызванный у микроорганизмов наночастицами нульвалентного железа. Микробы Окружающая среда 26:271–281

    Артикул Google ученый

  29. Auffan M, Decome L, Rose J et al (2006)Взаимодействия in vitro между наночастицами маггемита, покрытыми DMSA, и фибробластами человека: физико-химическое и цитогенотоксическое исследование. Environ Sci Technol 40:4367–4373

    Статья Google ученый

Скачать ссылки

Благодарности

Мы благодарим доктора Кевина Роше за помощь в коррекции английского языка.

Финансирование

Это исследование было поддержано проектом Центра компетенций «Нанобиоват» №. ТЭ01020218. Дальнейшая поддержка была оказана МШМТ в рамках адресной поддержки по проектам: «Национальная программа устойчивого развития I» проект №. LO1201 и проект «Центр наноматериалов, передовых технологий и инноваций» №. ЧЗ.1.05/2.1.00/01.0005. Работа М. Дарвиша была поддержана в рамках проекта «Разработка исследовательских групп научно-исследовательских проектов» №. ЧЗ.1.07/2.3.00/30.0024. Работа Н. Нгуена была частично поддержана MŠMT в рамках проекта SGS №. 21176/115 Либерецкого технического университета и «Исследовательской инфраструктуры NanoEnviCz» в рамках проекта №. ЛМ2015073.

Информация об авторе

Авторы и организации

  1. Институт наноматериалов, передовых технологий и инноваций, Либерецкий технический университет, 461 17, Либерец, Чехия Алена Шевцу

  2. Факультет мехатроники, информатики и междисциплинарных исследований Либерецкого технического университета, 461 17, Либерец, Чехия

    Нхунг Х. А. Нгуен и Алена Шевчу

  3. Egyptian Petroleum Research Institute, 1 Ahmed El-Zomor Street, El Zohour Region, Nasr City, Cairo, 11727, Egypt

    Mohamed S. A. Darwish

Authors

  1. Nhung H. A. Nguyen

    View author publications

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

  2. Mohamed S. A. Darwish

    Просмотр публикаций автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Академия

  3. Иван Стибор

    Просмотр публикаций автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

  4. Павел Кейзлар

    Посмотреть публикации автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

  5. Alena Ševců

    Посмотреть публикации автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

Вклады

NHAN разработала и провела антимикробные тесты и написала большую часть рукописи. MSAD выполнила синтез и определение характеристик магнетитовых композитов и участвовала в написании текста рукописи. PK помог с анализом SEM. AŠ и IS контролировали концептуальную основу и корректировали рукопись. Все авторы прочитали и одобрили окончательный вариант рукописи.

Автор, ответственный за переписку

Переписка с Алена Шевцу.

Декларация этики

Утверждение этики и согласие на участие

Неприменимо.

Конкурирующие интересы

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.

Примечание издателя

Springer Nature остается нейтральной в отношении юрисдикционных претензий в опубликованных картах и ​​институциональной принадлежности.

Права и разрешения

Открытый доступ Эта статья распространяется в соответствии с условиями международной лицензии Creative Commons Attribution 4.0 (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/), которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии вы должным образом указываете автора (авторов) и источник, предоставляете ссылку на лицензию Creative Commons и указываете, были ли внесены изменения.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.