Кирилл и ольга совместимость: Совместимость имен Кирилл и Ольга в любви и браке

E. coli McC и гомологичные опероны, кодируемые другими бактериями. (A) Схематическое изображение синтеза McC E. coli из пептида MccA. Участвующие ферменты и кофакторы перечислены выше и ниже стрелок; R представляет собой N-концевые остатки MccA (формил-MRTGNA).Числа (в дальтонах [Да]) указывают различия в молекулярных массах между продуктами и субстратами отдельных стадий реакции. (B) Вверху показан оперон mcc E. coli. Стрелки указывают на отдельные гены ( mccA , красный; mccB , желтый; mccC, зеленый; mccD , розовый; mccE , фиолетовый; mccF, синий). Гомологические опероны из указанных источников показаны под стрелками. Открытые рамки считывания, кодирующие предсказанные MccA-подобные пептиды, не масштабированы.Открытые рамки считывания, обозначенные серыми стрелками в опероне Y. pseudotuberculosis mcc , соответствуют гомологам гена yqcI и ycgG . Часть гомолога mccB , обозначенная коричневым цветом, кодирует домен метилазы. Для Synechococcus sp. CC9605 mcc оперон, три открытые рамки считывания, указанные голубым цветом, кодируют транспортеры типа ABC.

В то время как интактный McC подавляет рост чувствительных клеток E. coli при низких микромолярных концентрациях, обработанный McC не влияет на рост клеток даже при миллимолярных концентрациях (6).Таким образом, пептидная цепь способствует активному захвату токсичного процессированного McC, который сам по себе не может проникать в клетки через транспортер YejABEF. Биологическая функция YejABEF (кроме транспорта McC) неизвестна.

Пептид McC кодируется семикодонным геном mccA (7). Во время биосинтеза антибиотика пептид MccA (аминокислотная последовательность MRTGNAN) аденилируется на С-конце синтетазой MccB. Реакция проходит через два раунда аденилирования и приводит к превращению концевого остатка аспарагина пептида MccA в аспартат (8, 9).Продукт аденилирования MccA дополнительно декорируется аминопропильным фрагментом в реакции, которая протекает по механизму, который еще предстоит определить, и требует продуктов генов mccD и mccE (10). Полученный зрелый McC экспортируется из продуцирующих клеток с помощью MccC, транспортера MFS-типа (11-13). Самоиммунитет к процессингу McC, который накапливается в цитоплазме продуцирующей клетки, определяется C-концевым доменом MccE, ацетилтрансферазой семейства GNAT (Gcn5-related acetyltransferase) (14) и MccF, протеазой семейства S66 (15). ).Ген mccF транскрибируется отдельно от оперона mccABCDE и не является строго необходимым для продукции McC и / или иммунитета продуцирующей клетки (11-13).

Продукт аденилирования MccB, катализируемого MccB, аденилата пептида с молекулярной массой 1,119 Да (или 1091 Да для соединения без N-концевой формильной группы), является биологически активным, хотя его активность значительно ниже, чем у зрелый McC (10). Таким образом, гены mccD и mccE , необходимые для дополнительного аминопропилового декора, не являются строго обязательными для биологической функции.Следовательно, расположение из трех генов ( mccABC ) может удовлетворять минимальным требованиям для биосинтеза и экспорта McC-подобной молекулы. Ранее мы проанализировали бактериальные последовательности ДНК на наличие соседних генов, кодирующих белки, подобные E. coli MccB и MccC, и обнаружили такие пары в плазмидах Helicobacter pylori pHPM8 и HPP12 и в геномах Streptococcus thermophilus LMD-9, Lactococcus johnsonii NCC 533 и Bartonella washoensis Sb944nv (16).Никаких других соседних mcc -подобных генов не обнаружено у этих организмов (Рис. 1B). Ручной анализ областей перед гомологами mccB и этих организмов выявил предполагаемые открытые рамки считывания (ORF) длиной в семь кодонов, продукты которых содержат C-концевой аспарагин (16) (рис. 1B и таблица 1). Продукты этих открытых рамок считывания отличаются от MccA E. coli, но могут быть субстратами для родственных MccB аденилаттрансфераз.

Прогнозируемые пептиды MccA, кодируемые mcc -подобными оперонами различных бактерий ^a

В геноме Synechococcus sp.CC9605, mccB -подобный ген, сгруппирован с mccD -подобным геном и двумя генами, кодирующими белки, гомологичные E. coli mccE N- и C-концевым доменам (Рис. 1B). В то время как mccC -подобных генов отсутствуют, три гена, кодирующие ABC-подобные транспортеры, расположены выше гомолога mccB . Две открытые рамки считывания, кодирующие идентичные пептиды длиной 56 аминокислот с концевыми аспарагинами, расположены между кластером генов-переносчиков ABC и геном, подобным mccB (рис.1Б и таблица 1). Было высказано предположение, что эти пептиды являются субстратами аденилирования для родственного продукта гена mccB (16). Очень похожий оперон также кодируется Synechococcus sp. CC9616 (16).

В Yersinia pseudotuberculosis IP32953 присутствует оперон, содержащий гомологи генов mccBCDE E. coli (рис. 1B). Порядок генов mccB и mccC инвертирован по сравнению с тем, который наблюдается в E. coli mcc и в «минимальных» оперонах mccABC , и двух генах, гомологичных генам, кодирующим предсказанную метилазу и функционально не охарактеризованным . Белки семейства yqcI и , кодируемые ycgG , вставлены между гомологами mccB и mccD .Кроме того, гомолог Yersinia pseudotuberculosis IP32953 MccB также слит с доменом метилазы. Открытая рамка считывания, кодирующая пептид длиной 13 аминокислот с концевым аспарагином, была идентифицирована перед гомологом mccC (рис. 1B), и соответствующий пептид (таблица 1) был предложен в качестве субстрата для родственного MccB ( 16).

E. coli McC может быть получен in vitro путем аденилирования синтетического пептида MRTGNAN рекомбинантным E. coli MccB (8). Здесь мы использовали этот подход для проверки предсказанных пар mccA — mccB от бактерий, отличных от E.coli. Мы показываем, что аденилированные пептиды могут быть получены для большинства предполагаемых предполагаемых пар MccA-MccB и что многие из полученных аденилированных пептидов ингибируют рост E. coli в зависимости от YejABEF. По аналогии с E. coli, мы предполагаем, что многие из этих пептидных аденилатов подавляют рост родственных бактерий, у которых отсутствуют опероны, подобные mcc .

РЕЗУЛЬТАТЫ

Ферментативный синтез аденилатов McC-подобных пептидов. Уолш и его коллеги ранее сообщили о синтезе in vitro промежуточного звена созревания McC, аденилированного пептида MccA, лишенного аминопропильного декора и N-концевой формильной группы, в реакционных смесях, содержащих синтетические Пептид MRTGNAN, рекомбинантный E.coli MccB и АТФ (8). Используя их условия и масс-спектрометрический анализ продуктов реакции, мы также наблюдали частичное превращение массового пика, соответствующего реакционному субстрату MRTGNAN ( m / z = 763,5), в аденилированный продукт ( m / z = 1,092,5) (рис. 2А). Также наблюдалось накопление промежуточного продукта реакции, пептида, содержащего С-концевой сукцинимид ( m / z = 745) (обозначено звездочкой в ​​масс-спектре, представленном на нижней панели фиг.2А), что согласуется с более ранними наблюдениями (8).

In vitro

аденилирование предсказанных пептидов MccA родственными гомологами MccB. Химически синтезированные пептиды, соответствующие 7-аминокислотным продуктам MccA E. coli (A), B. washoensis Sb944nv (B), плазмиде H. pylori HPP12 (C), L. johnsonii NCC 533 (D), S. thermophilus LMD-9 (E), Y. pseudotuberculosis PB1 / + (F), Synechococcus sp. Пептид CC9605 (G) и пептиды, соответствующие последним 25 (H) и 20 (I) аминокислотам Synechococcus sp.Пептид CC9605 (таблица 1) объединяли с соответствующими рекомбинантными гомологами MccB в отсутствие (вверху) и в присутствии (внизу) АТФ. Продукты реакции анализировали с помощью MALDI MS. Показаны только соответствующие части спектров. Звездочки указывают пики, соответствующие промежуточным продуктам реакции аденилирования, содержащим концевой сукцинимид (фиг. 1A).

Далее, рекомбинантные версии гомологов MccB, кодируемых плазмидами H. pylori pHPM8 и HPP12 и геномами S. thermophilus LMD-9, L.johnsonii NCC 533, B. washoensis Sb944nv, Y. pseudotuberculosis IP32953 и Synechococcus sp. CC9605 очищали с использованием систем гетерологической экспрессии E. coli. Полноразмерный гомолог Y. pseudotuberculosis IP32953 MccB был очень плохо экспрессирован. Мы полагали, что необычное концевое слияние с метилазоподобным белком (Fig. 1B) могло повлиять на укладку этого белка. Соответственно, была получена рекомбинантная версия Y. pseudotuberculosis MccB, лишенная C-концевого домена метилазы.Этот белок был растворимым и экспрессировался на высоком уровне и использовался в последующих экспериментах. Предсказанные пептидные субстраты получали твердофазным химическим синтезом. Единственным исключением был предполагаемый пептид-субстрат, кодируемый Synechococcus sp. CC9605, который был получен как гибрид с белком MBP. После обработки протеазой вируса травления табака (TEV) был получен пептид из 58 аминокислот, который не содержал N-концевого остатка метионина предсказанного синехококкового гомолога MccA и содержал три дополнительных N-концевых аминокислоты (SerGlySer).

Рекомбинантные гомологи MccB объединяли с предсказанными пептидными субстратами в присутствии или в отсутствие АТФ в условиях, оптимизированных для реакций, катализируемых E. coli MccB. Использовали равные количества синтетических пептидов. Количество рекомбинантного Synechococcus sp. Пептид CC9605 был как минимум в 10 раз ниже, так как у нас возникли трудности с получением достаточного количества этого пептида. Результаты масс-спектрометрического анализа продуктов реакции представлены на рис. 2.

Предсказанные 7-аминокислотные MccA-подобные пептиды, кодируемые B.washoensis Sb944nv (MDHIGFN), S. thermophilus LMD-9 (MKGTILN) и L. johnsonii NCC 533 (MHRIMKN) легко аденилировались родственными ферментами (рис. 2B, D и E). Предсказанный 7-аминокислотный MccA-подобный пептид MKLSYRN, кодируемый плазмидами H. pylori pHPM8 и HPP12, был аденилирован MccB, кодируемым плазмидой HPP12 (фиг. 2C). Белок MccB, кодируемый pHPM8, был неактивным (данные не показаны). MccB, кодируемый pHPM8, лишен 46 N-концевых аминокислот, присутствующих в гомологе, кодируемом HPP12. Соответствующие N-концевые аминокислоты E.coli MccB образуют пептидный зажимной домен, который участвует в связывании MccA (9). Анализ генов mccB из плазмид H. pylori показал, что копия гена, переносимая pHPM8, претерпела замену A-G, которая разрушила исходный кодон ORF HPP12 mccB , а также 4-нуклеотидную вставку. в области между аннотированными стартовыми кодонами гомологов HPP12 и pHPM8. Отсутствие интактного N-концевого домена в MccB, кодируемом pHPM8, объясняет его неактивность. Соответствующий ген, таким образом, является дефектным и должен рассматриваться как псевдоген, в то время как оперон mcc , переносимый плазмидой HPM8, должен быть неактивным для продукции McC-подобного соединения.

Предполагаемый Synechococcus sp. С 58 аминокислотами. Субстратный пептид CC9605 был полностью аденилирован родственным ферментом (фиг. 2G).

Пептид MccA Y. pseudotuberculosis IP32953 длиной 13 аминокислот, предсказанный ранее (16), не был модифицирован родственным белком MccB (данные не показаны). Более современная аннотация генома Y. pseudotuberculosis PB1 / + (NC_010634.1) предполагает более длинный 42-кодонный пептид (YP_001872354.1) как возможный субстрат аденилирования с помощью MccB. Этот же полипептид также кодируется Y.псевдотуберкулез IP32953. Когда более длинный пептид был получен химическим синтезом и испытан в реакции аденилирования, наблюдалась высокоэффективная конверсия в аденилированный продукт (фиг. 2F). Таким образом, результат подтверждает, что пептид длиной 42 аминокислоты является субстратом Y. pseudotuberculosis IP32953 MccB.

Во всех случаях, когда были обнаружены продукты аденилирования, также наблюдались соответствующие сукцинимидсодержащие промежуточные соединения (-18 Да входящего пептида), что указывает на то, что механизм реакции MccB-подобных ферментов сохраняется.Единственным исключением был Synechococcus sp. Субстратный пептид CC9605, который количественно превращали в аденилированный продукт без обнаружения промежуточного продукта реакции. Реакции аденилирования были специфическими; т.е. пептиды становились аденилированными при инкубации с ферментами того же вида, но оставались неизмененными при инкубации с чужеродными ферментами (данные не показаны). За исключением Synechococcus sp. CC9605, полная модификация исходных пептидов в наших условиях не была достигнута (рис. 2).Тем не менее, всякий раз, когда наблюдалась модификация, значительная часть входящего пептида аденилировалась, что было сравнимо с тем, что наблюдалось в контрольной реакции с E. coli MccA-MccB.

Биологическая активность пептидных аденилатов. Результаты ферментативного аденилирования in vitro подтвердили большинство более ранних прогнозов биоинформатики. Мы предполагаем, что аденилированные пептиды с дополнительными модификациями или без них, такие как пропиламинный декор, присутствующий в E. coli McC, продуцируются бактериями, содержащими проверенные опероны, подобные mcc , и подавляют рост бактерий, которые не несут mcc — как оперон.Хотя у нас нет возможности проверить гомологичную биологическую активность продуктов реакции аденилирования, мы проверили их способность подавлять рост E. coli. In vitro реакционные смеси аденилирования, содержащие равные количества исходного пептида-субстрата и родственных ферментов аденилирования, инкубировали с АТФ или без него, и аликвоты реакционных смесей депонировали на свеже засеянных газонах В-клеток E. coli (таблица 2). Испытывали только реакционные смеси, содержащие пары фермент-субстрат, которые приводили к продукции аденилированного пептида.В качестве контроля использовали McC-устойчивый изогенный штамм без гена yejB (4). Как видно из таблицы 2, реакционные смеси, содержащие аденилированные пептиды из E. coli, S. thermophilus LMD-9, L. johnsonii NCC 533 и H. pylori, ингибировали рост клеток E. coli дикого типа. Хотя эффективность аденилирования различных пептидов различалась (рис.2), существенной разницы в размерах зон ингибирования роста (от 8 до 15 мм в диаметре) не было, что свидетельствует о способности различных аденилированных пептидов ингибировать E.coli сравнима с McC. Зоны ингибирования не наблюдались на лужайках мутантных клеток, что позволяет предположить, что аденилированные пептиды из S. thermophilus LMD-9, L. johnsonii NCC 533 и H. pylori проникают в E. coli через транспортер YejABEF.

Антибиотическая активность ферментативно синтезированных McC-подобных соединений ^a

Аденилированные B. washoensis Sb944nv и Y. pseudotuberculosis IP32953 пептиды не образовывали зон ингибирования ни на клеточных лужайках дикого типа, ни на мутантных, что позволяет предположить, что пептиды либо не интернализуются, либо не обрабатываются внутри клетки (см. ниже).Аденилированный гомолог MccA из Synechococcus sp. CC9605 также не давал зон подавления роста. Однако, как упоминалось выше, количество этого пептида, используемого в реакции аденилирования, было намного ниже, чем количество синтетических пептидов, что могло повлиять на результат тестирования биологической активности. Синтетические пептиды, соответствующие 25, 20, 15 и 10 C-концевым аминокислотам синехококкового MccA, были получены и протестированы в реакции аденилирования с Synechococcus sp. CC9605 MccB. Масс-спектрометрический анализ показал, что два более длинных пептида эффективно аденилировались (рис.2H и I), тогда как более короткие пептиды оставались неизмененными (данные не показаны). Реакционные смеси, содержащие аденилированный 25-аминокислотный пептид, подавляли рост как дикого типа, так и мутантных штаммов E. coli yejB с равной эффективностью (таблица 2). Напротив, аденилированный пептид из 20 аминокислот был неактивным (таблица 2). Поскольку данные, полученные с аденилатами гептапептидов, предполагают, что транспортер YejABEF, по-видимому, неспецифичен по последовательности, результат указывает на то, что может существовать дополнительный путь проникновения в клетки для более длинных пептидных аденилатов.Действительно, клетки E. coli с нарушенным геном sbmA , кодирующим транспортер внутренней мембраны, были чувствительны к McC, но были устойчивы к действию аденилированного пептида из 25 аминокислот. Как и ожидалось, эти клетки были также устойчивы к микроцину B, гораздо более длинному посттрансляционно модифицированному микроцину, который, как известно, интернализуется через SbmA (17).

In vitro активность аденилированных пептидов . Чтобы определить, действуют ли различные аденилированные пептиды аналогично E.coli McC, аликвоты реакционных смесей аденилирования объединяли с экстрактами S30 клеток E. coli K-12 дикого типа, инкубировали в течение 15 мин и тестировали на аминоацилирование тРНК ^Asp , реакцию, катализируемую мишенью обработанного McC, AspRS. В другом месте мы показываем, что 15-минутной инкубации достаточно для обработки McC в наших условиях реакции (5, 6). На фиг. 3 показаны отношения активностей AspRS в экстрактах, к которым были добавлены реакционные смеси пар MccB-MccA с или без АТФ.Как можно видеть, добавление реакционных смесей, содержащих MccA, MccB и АТФ E. coli, ингибировало активность AspRS на уровне примерно 10%. В 10 раз выше, чем в контроле (без АТФ). Сопоставимые уровни ингибирования наблюдались в реакционных смесях, содержащих все другие аденилированные пептиды, за исключением смеси из B. washoensis Sb944nv, которая показала слабое ингибирование (активность AspRS 55% по сравнению с контролем без АТФ), а также у Y. псевдотуберкулез (90% активности AspRS по сравнению с контролем без АТФ).

Аденилированные пептиды из различных источников ингибируют E. coli AspRS in vitro . AspRS-катализируемое аминоацилирование тРНК ^Asp в экстрактах S30, полученных из E. coli дикого типа, проводили в присутствии аликвот указанных смесей реакции аденилирования с или без АТФ. Экстракты инкубировали в течение 15 минут для обработки. Представлены отношения нерастворимой в кислоте радиоактивности в соответствующих реакционных смесях с АТФ и без него (показаны средние значения и стандартные отклонения измерений, взятых из трех независимо проведенных экспериментов).

Мы предположили, что слабое ингибирование AspRS аденилированными пептидами B. washoensis Sb944nv и Y. pseudotuberculosis было связано с медленным процессингом пептида в экстрактах E. coli S30. Эта гипотеза была проверена для пептида B. washoensis Sb944nv путем мониторинга судьбы немодифицированных пептидов E. coli и пептидов MccA B. washoensis Sb944nv в экстрактах E. coli S30. Как видно на фиг.4, N-концевой метионин эффективно удаляется из обоих пептидов (фиг.4, второй ряд). Пик массы, соответствующий полученному гексапептиду E. coli RTGNAN ( m / z = 632,5), полностью исчез после 15-минутной инкубации с экстрактом из-за процессинга аминопептидазами, как и ожидалось (5). Напротив, B. washoensis Sb944nv DHIGFN гексапептид ( m / z = 702) оставался практически неизменным даже после 60-минутной инкубации, что указывает на то, что процессинг (и, следовательно, высвобождение расположенного на С-конце ингибитора AspRS в случай аденилированного пептида) был неэффективен.

Различная скорость обработки пептидов MccA E. coli и B. washoensis Sb944nv в экстрактах E. coli. Равные количества пептидов E. coli и B. washoensis Sb944nv MccA объединяли с экстрактами E. coli S30 дикого типа. В указанное время отбирали аликвоты реакционных смесей и анализировали масс-спектрометрией. H, D и M обозначают остатки гистидина, аспартата и метионина соответственно.

Расширение семейства аденилаттрансфераз созревания микроцина.Воодушевленные успешной проверкой нескольких предсказанных микроцинов, мы решили вернуться к семейству MccB-подобных ферментов, чтобы определить те, которые могут быть задействованы в производстве McC-подобных соединений. MccB-подобные белки принадлежат к суперсемейству фосфотрансфераз ThiF / HesA / MoeB / E1, которое было подробно проанализировано ранее (18). В частности, было показано, что это суперсемейство имеет сложную эволюционную историю и настолько расходится, что филогенетические реконструкции, основанные только на выравнивании последовательностей, невозможны.Следовательно, взаимоотношения между семействами должны быть выяснены на основе анализа характеристик консервативных последовательностей, доменной организации и генного контекста (18). В частности, было указано, что семейство MccB связано с семейством PaaA (протеин биосинтеза пантоцина А) (18). В отличие от белков MccB, которые аденилируют концевые аспарагины в пептидах, фермент PaaA из Pantoea agglomerans, по-видимому, модифицирует внутренний аспарагиновый остаток пептида-субстрата (19, 20).

Мы систематически идентифицировали гомологи белков MccB и PaaA в полностью секвенированных бактериальных геномах (см. Материалы и методы).Результирующее дерево гомологов MccB и PaaA показано на рис. 5. Все гомологи MccB и PaaA, включенные в дерево, содержат предсказанный N-концевой домен фиксации пептида, который в E. coli MccB необходим для распознавания MccA (9). Кроме того, гены, кодирующие гомологи MccB и PaaA, включенные в дерево, имеют соседние гены, которые кодируют либо потенциальную оттокную помпу, либо белки, которые могут участвовать в дополнительных модификациях микроцина и / или в самоиммунитете (рис. 5). Эти особенности не обнаруживаются у членов из внешней группы, которая включает последовательности, которые уверенно разделены как в деревьях FastTree, так и в RAxML (значения начальной загрузки 99 и 69 соответственно) и которые, вероятно, участвуют в биосинтезе кофакторов тиамина и молибдена.Таким образом, мы прогнозируем, что белки, представленные на рис. 5, участвуют в синтезе McC-подобных соединений. В самом деле, хотя это не подразумевается в нашем анализе, все опероны, кодирующие пептиды премикроцина, которые были предсказаны ранее и проверены в нашей работе, присутствуют в дереве. Соответствующие пептиды показаны синим шрифтом на фиг. 5 (прототип E. coli MccA и пептид-предшественник пантоцина показаны красным шрифтом). Кроме того, помимо генов, кодирующих некоторые члены семейства, мы смогли идентифицировать короткие открытые рамки считывания, кодирующие пептиды различной длины и содержащие концевые или внутренние остатки аспарагина (выделены коричневым шрифтом).Мы предполагаем, что некоторые из этих пептидов могут быть субстратами аденилирования для родственных гомологов MccB и PaaA.

Филогенетическое дерево и гены-соседи предполагаемых членов семейства MccB / PaaA. Филогенетическое некорневое дерево максимального правдоподобия было построено с использованием программы FastTree (33) и множественного выравнивания консервативных блоков (136 информативных позиций) домена ThiF / HesA / MoeB / E1. Эта же программа также использовалась для вычисления значений начальной загрузки, указанных для всех ветвей. Дерево укоренено с использованием внешних групп (показанных в виде треугольников) последовательностей, функции которых не связаны с производством микроцина; значение начальной загрузки, уверенно разделяющее внешнюю группу, выделено.Каждый конечный узел дерева помечен номером идентификатора GenBank и полным систематическим названием организма. Основополагающие гены MccB и PaaA выделены красным. Белки, которые обсуждаются в этой работе, выделены синим цветом. Слияние доменов указано в скобках. Один ген, закодированный в одном и том же предсказанном опероне, предполагающий отношение к продукции микроцина, показан в столбце с правой стороны дерева. Символ «+» указывает на то, что в том же опероне есть другие гены, которые связаны с биосинтезом микроцинов или иммунитетом.Прогнозируемые и проверенные пептиды-предшественники микроцина показаны следующим образом: красный цвет — McC и предшественники пантоцина, стрелки указывают на остатки аспарагина, которые подвергаются аденилированию; синий, пептиды, подтвержденные в этой работе; коричневый, пептиды предсказаны выше соответствующего гена семейства MccB / PaaA. Сокращения: для прогнозируемых насосов оттока, ABC, семейство переносчиков ABC, MFS, семейство основных переносчиков-посредников и DMT, семейство переносчиков двухвалентных металлов; для прогнозируемых генов иммунитета — цинцин, Zn-зависимые протеазы суперсемейства цинцина, сериновые протеазы семейства S8, S8, сериновые протеазы семейства MccF, S66 и GNAT, ацетилтрансферазы семейства GNAT; и для предсказанных ферментов модификации микроцина, ThiF-подобного, белка ThiF / HesA / MoeB / E1, МТазы, S-аденозил-1-метионин-зависимой метилтрансферазы и McbC, B-процессирующей оксидоредуктазы микроцина.

ОБСУЖДЕНИЕ

В этой работе мы проверили биоинформатически предсказанные микроциновые С-подобные соединения, кодируемые в геномах и / или плазмидах нескольких различных бактерий. Все четыре проверенных предсказанных гептапептида, из H. pylori, S. thermophilus, L. johnsonii и B. washoensis , были аденилированы родственными ферментами, и аденилированные продукты ингибировали рост McC-чувствительной E. coli через троянскую программу. лошадиный механизм, который был ранее описан для E. coli McC (механизм облегчает транспорт через транспортер YejABEF, внутриклеточный процессинг аминопептидазами и ингибирование AspRS негидролизуемым аспартиладенилатом).В случае E. coli McC ферментативный продукт реакционной смеси, катализируемой MccB, содержит прямую связь N-P, которая делает его негидролизуемым аналогом обычно гидролизуемого Asp-AMP. В то время как ни один из аналогов, полученных в нашей работе, не было напрямую показано, чтобы содержать связь N-P, тот факт, что устойчивое ингибирование AspRS наблюдается при обработке, сильно поддерживает это предположение.

Соединение B. washoensis McC было наименее активным из аденилатов гептапептида.По-видимому, гексапептид с N-концевым аспартатом, который продуцируется после удаления N-концевого метионина из B. washoensis MccA, плохо процессируется в E. coli. Это предположение согласуется с тем фактом, что PepN, который считается основной аминопептидазой в E. coli (21), не поддерживает кислотные остатки и вместо этого сильно предпочитает основные аминокислоты (21, 22). Действительно, аминокислоты во втором положении эффективно процессируемых E. coli, H. pylori, S. thermophilus и L.Пептиды MccA johnsonii являются основными, и ни один из этих пептидов не содержит внутренних кислотных остатков, которые могли бы препятствовать переработке.

По аналогии с E. coli McC, мы предполагаем, что физиологическая функция аденилированных гептапептидов, подтвержденная в нашей работе, заключается в нацеливании на бактерии, тесно связанные с штаммом-продуцентом. Соответствующие опероны имеют минимальное расположение mccABC , что позволяет предположить, что аденилаты гептапептида функционируют без дополнительной модификации, характерной для E.coli McC. В случае E. coli McC, аминопропиловый декор увеличивает биоактивность примерно на 10%. В 10 раз за счет стимулирования взаимодействия обработанного McC с его мишенью за счет благоприятного электростатического взаимодействия между амином аминоприла и отрицательно заряженными остатками AspRS (10). Соответствующие остатки присутствуют в ферментах AspRS из H. pylori, S. thermophilus, L. johnsonii и B. washoensis , что позволяет предположить, что присутствие аминопропила увеличило эффективность McC-подобных молекул, продуцируемых этими организмами. .Отсутствие генов синтеза аминопропила mccD и -NTD , а также генов аутоиммунитета mccE-CTD и mccF предполагает, что минимальное расположение mccABC является наследственным, а более сложное расположение E. coli выводится. Автономные гомологи mccE и mccF кодируются во многих бактериальных геномах и могли быть «приняты» предком оперона E. coli mcc .

Возможно, самым удивительным результатом нашей работы является подтверждение аденилирования гораздо более длинных пептидов MccA из Synechococcus и Y.псевдотуберкулез. Оперон mcc из Synechococcus уникален, поскольку ген mccA тандемно дублирован. Кроме того, вероятные экспортные насосы кодируются переносчиками типа, отличного от таковых в других подтвержденных оперонах биосинтеза аденилированного пептида (рис. 1B), что может иметь отношение к большей длине пептидного фрагмента. Структурный анализ MccB E. coli, связанного с его субстратом, показывает, что в ферменте есть отверстие, которое должно позволить удлиненному на N-конце 7-аминокислотному MccA связываться с ферментом (9).Наши результаты показывают, что в случае синехококкового фермента для аденилирования субстрат должен иметь длину не менее 20 аминокислот, что указывает на то, что необходимы взаимодействия фермент-субстрат, удаленные от каталитического центра дальше, чем у E. coli MccB. Присутствие гомолога mccD и двух генов, соответствующих отдельным доменам MccE, предполагает, что McC-подобное соединение, продуцируемое Synechococcus , может быть аминопропилировано. Недавний отчет предполагает, что Synechococcus sp.CC9605 при совместном культивировании с другими синехококками, у которых отсутствует оперон mcc , подавляет рост этих организмов, и что гены mcc несут ответственность за ингибирование (23). Масс-спектрометрический анализ Synechococcus sp. В культуральной среде CC9605 не удалось выявить пик массы, соответствующий полноразмерному аденилированному MccA (наши неопубликованные наблюдения). Однако возможно, что исходный аденилированный пептид, образующийся в реакции, катализируемой Synechococcus sp. CC9605 MccB протеолитически модифицирован, и активное соединение на самом деле намного меньше.

Филогенетический анализ показывает, что Y. pseudotuberculosis MccB наиболее близок к Synechococcus sp. CC9605 MccB. Оперон Y. pseudotuberculosis mcc имеет несколько отличительных особенностей, включая слияние MccB с предсказанным доменом метилазы и двумя дополнительными генами (один из которых является другим предсказанным геном метилазы) с не охарактеризованной функцией (ями). Поскольку нам не удалось показать функцию in vitro и полноразмерного Y. pseudotuberculosis MccB, формально возможно, что Y.псевдотуберкулез инактивируется этими уникальными вставками. Альтернативная и более интересная возможность состоит в том, что дополнительные гомологи метилазы участвуют в дополнительных модификациях аденилата пептида Y. pseudotuberculosis. Аденилированный 42-аминокислотный белок MccA Y. pseudotuberculosis неактивен в отношении E. coli. Он также не может ингибировать аминоацилирование тРНК ^Asp в экстрактах E. coli. Большая длина Y. pseudotuberculosis MccA вряд ли может быть причиной, поскольку еще более длинный Synechococcus sp.Аденилат пептида CC9605 легко процессируется. Таким образом, как и в случае B. washoensis , последовательность MccA Y. pseudotuberculosis, вероятно, препятствует начальной обработке. В этом случае процессинг MccA Y. pseudotuberculosis, вероятно, осложняется образованием дисульфидной связи между двумя цистеинами, присутствующими в пептиде (см. Таблицу 1). Для определения того, опосредует ли оперон mcc антагонистические взаимодействия внутри рода Yersinia , и сравнительный анализ низкомолекулярных соединений, продуцируемых Y.псевдотуберкулез с опероном mcc и без него должен помочь выяснить структуру активного соединения, которая может отличаться от структуры аденилированного пептида, полученного здесь с помощью подхода in vitro .

E. coli McC проникает в чувствительные клетки через транспортер внутренней мембраны YejABEF, и ранее нами было предложено, что присутствие такого транспортера является хорошим предиктором чувствительности McC (4). Для организмов с подтвержденными парами MccA-MccB четкие гомологи YejABEF обнаруживаются только у H.пилори. Транспортные системы, ответственные за захват McC-подобных соединений в B. washoensis , S. thermophilus и L. johnsonii, еще предстоит идентифицировать, но очевидно, что они должны отличаться от YejABEF. Цианобактерии очень чувствительны к McC (23) (O. Bantysh, неопубликовано), несмотря на отсутствие четких гомологов YejABEF, что еще раз подчеркивает, что переносчики, отличные от YejABEF, могут импортировать аденилаты пептидов. Проведенный нами анализ укороченных версий Synechococcus sp. Аденилат пептида CC9605 любопытно обнаружил, что, когда длина пептида превышает определенное критическое значение (в нашем случае 20 аминокислот), аденилированные пептиды перестают транспортироваться транспортером YejABEF.С другой стороны, когда длина пептида достигает определенного критического значения (в нашем случае 25 аминокислот), аденилированные пептиды могут транспортироваться с помощью SbmA. Когда длина пептида становится еще больше (52 аминокислоты для аденилата полноразмерного пептида Synechococcus sp. CC9605), SbmA становится неспособным выполнять транспортную функцию. Хотя на данном этапе эти наблюдения не могут исключить влияние последовательности и заряда, они, тем не менее, предполагают, что путем изменения длины транспортного фрагмента противомикробных препаратов троянских коней McC-типа можно получить пептидные аденилаты, которые проникают в бактерии различными путями. , что может помочь противодействовать устойчивости бактерий к этому классу соединений.

Результаты нашего биоинформатического анализа позволяют предположить, что ферменты семейства MccB / PaaA, способные аденилировать остатки аспарагина в коротких синтезированных рибосомами пептидах, очень распространены в полностью секвенированных геномах и присутствуют во многих типах бактерий, включая многочисленные паразиты человека и симбионты. Наш список ни в коем случае не является исчерпывающим, поскольку вполне возможно, что мы упустили некоторых из наиболее расходящихся членов семейства MccB / PaaA в этом анализе. Мы прогнозируем, что несколько пептидов с остатками аспарагина, которые кодируются непосредственно перед некоторыми генами семейства MccB / PaaA, являются субстратами аденилирования. In vitro аденилирование синтетических пептидов родственными ферментами MccB обеспечивает надежный метод экспериментальной проверки этих прогнозов. Тем не менее, у многих генов семейства MccB / PaaA отсутствуют идентифицируемые соседние гены пептида премикроцина. Это предполагает, что либо другая аминокислота в вышестоящем гене, кодирующем пептид, может быть аденилирована, либо субстратные пептиды могут кодироваться где-то еще в соответствующих геномах. Последнее явление описано для тиазолсодержащих гетероциклических бактериоцинов бацилл (24).

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

ДНК, молекулярное клонирование и микробиологические методы. pylori pHMG8 и HPP12 были предоставлены Сарой А. Макинтайр (Техасский женский университет) и Вольфгангом Фишером (Институт Макса фон Петтенкофера), соответственно. L. johnsonii NCC 533 предоставлен Стефаном Дюбу и Раймондом Дэвидом Придмором (Исследовательский центр Нестле), Synechococcus sp. CC9605 был предоставлен Брайаном Палеником (Институт океанографии Скриппса, Калифорнийский университет, Сан-Диего [UCSD]), геномная ДНК Y.pseudotuberculosis IP32953 был предоставлен Элизабет Карниэль (Институт Пастера), а геномная ДНК B. washoensis Sb944nv была предоставлена ​​Майклом Косой (Центры по контролю и профилактике заболеваний, NIH).

ОРС ортологов E. coli mccB были амплифицированы с использованием соответствующих праймеров и клонированы в векторе экспрессии pET28a (+) между сайтами рестрикции полилинкера NdeI и BamHI (S. thermophilus LMD-9), NcoI и HindIII (H. pylori pHMG8) , NcoI и XhoI (H. pylori pHPP12 и L.johnsonii NCC 533), NdeI и XhoI ( B. washoensis Sb944nv), NdeI и BlpI (Synechococcus sp. CC9605) и NcoI и NotI (полноразмерные Y. pseudotuberculosis IP32953). E. coli mccB клонировали между NcoI и BamHI вектора pET32b. Фрагмент Y. pseudotuberculosis mccB (кодоны 2-347) экспрессировали как слияние с MalE. Для получения слитого белка фрагмент гена E. coli malE , кодирующий зрелый MBP, амплифицировали с помощью ПЦР и вставляли между сайтами рестрикции NdeI и BamHI вектора pET22a для генерации pET22MBP.Затем амплифицированный с помощью ПЦР фрагмент ДНК Y. pseudotuberculosis mccB был введен между сайтами рестрикции BamHI и XhoI pET22MBP.

Плазмида p28MBP была щедрым подарком Сатиша Наира. Клетки, несущие эту плазмиду, продуцируют MBP, слитый на С-конце с Synechococcus sp. СС9605 мкКи .

Для разрушения генов yejB и sbmA в лабораторном штамме E. coli B, гиперчувствительном к McC (6), мы использовали метод, описанный Даценко и Ваннером (25) с плазмидами pKD46, pKD3, pKD13 и pCP20. и следующие праймеры: пара праймеров YejB_Del_For1 (5 ‘ATGGGCGCTTACCTGATTCGCCGTCTGTTGCTGGTGATCGTGTAGGCTGGAGCTGCTTC 3’) и YejB_Del_Rev1 (5 ‘TTAACGTCCCTCAAAATCAATACGCGGATCAACCAGCGTCATATGAATATCCTCCTTAG 3’) и пара праймеров SbmA_Del_For (5 ‘TGTTAAAACGATAAGAAGTTAGCAGGAGTGCATATGTTACACGTCTTGAGCGATTG 3’) и SbmA_Del_Rev (5 ‘GGTTACTTCCTGAATTTTGTCACCATCCAGCTCATGATTCCGGGGATCCGTCGACCTG 3’).

Пептиды. Синтетические пептиды были приобретены в ООО «Синейро», Россия, и имели чистоту не менее 98%. Пептид MccA Y. pseudotuberculosis PB1 / + длиной 42 аминокислоты был приобретен у GenScript USA Inc. и имел чистоту более 85%. Пептиды растворяли в деионизированной воде до концентрации до 15 мМ и хранили при -20 ° C до дальнейшего использования.

Для получения Synechococcus sp. Пептид CC9605 MccA, плазмиду p28MBP трансформировали в клетки E. coli BL21 (DE3). Клетки выращивали при 37 ° C в бульоне LB с 1% глюкозы и 50 мкг / мл канамицина до тех пор, пока оптическая плотность при 600 нм (OD ₆₀₀ ) не достигала 0.6. Клетки собирали, трижды промывали свежим LB и ресуспендировали в 200 мл свежего бульона LB с добавлением канамицина и 0,3 мМ IPTG (изопропил-β-d-тиогалактопиранозид). После роста в течение ночи при 18 ° C клетки собирали и ресуспендировали в 20 мл колоночного буфера (20 мМ трис-HCl [pH 7,4], 200 мМ NaCl, 1 мМ ЭДТА, 1 мМ азид натрия, 0,01 М β-меркаптоэтанол и 0,1 мМ фенилметилсульфонилфторид [PMSF]). Клетки были разрушены ультразвуком. После центрифугирования (30 000 × g в течение 30 минут при + 4 ° C) супернатант объединяли с 500 мкл амилозной смолы (NEB), уравновешенной в том же буфере, и белкам давали возможность связываться в течение 40 минут при 4 ° C при осторожном перемешивании. .Смолу осаждали под действием силы тяжести и промывали колоночным буфером, а связанный белок элюировали колоночным буфером с добавлением 10 мМ мальтозы. Элюированный материал диализовали против 50 мМ трис-HCl (pH 8,0) –0,1 мМ EDTA при + 4 ° C, с добавлением 5 мМ дитиотреитола (DTT) и обрабатывали протеазой AcTEV (Invitrogen) в соответствии с рекомендациями производителя. Смесь инкубировали при + 4 ° C в течение ночи, а затем диализовали против 75 мМ Tris-HCl (pH 8,0) –50 мМ MgCl ₂ при + 4 ° C. Пептид MccA отделяли от MBP с использованием центробежного фильтра Ultracel-30K Amicon Ultra (Millipore).Проточный фильтр, содержащий отделенный пептид, концентрировали на роторном вакуумном испарителе. Высушенный пептид растворяли в воде и хранили при -20 ° C до дальнейшего использования.

Экспрессия и очистка белков. Все белки MccB были экспрессированы в клетках E. coli BL21 (DE3). Для получения растворимых белков MccB из H. pylori, L. johnsonii NCC 533, Synechococcus sp. CC9605, Y. pseudotuberculosis IP32953 и B. washoensis Sb944nv, экспрессирующие клетки, котрансформировали совместимым вектором pG-KJE8 (из набора плазмид Chaperone; TaKaRa Bio inc.), экспрессирующие шапероны GroEL / GroES, DnaK, DnaJ и GrpE. Было обнаружено, что плазмида, экспрессирующая шаперон, увеличивает выход растворимых гомологов MccB. Клетки BL21 (DE3) выращивали при 37 ° C на 200 мл среды LB с добавлением 1% глюкозы и необходимых антибиотиков до тех пор, пока OD ₆₀₀ не достигнет 0,6. Клетки собирали центрифугированием, трижды промывали свежей средой LB и ресуспендировали в 200 мл свежей LB с антибиотиками – 0,1 мМ IPTG. При необходимости добавляли 5 нг / мл тетрациклина и 2 мг / мл арабинозы для индукции экспрессии шаперона.Клетки выращивали в течение 20 ч при 18 ° C при интенсивном перемешивании. Клетки собирали и ресуспендировали в 8 мл загрузочного буфера (20 мМ Трис-HCl [pH 8,0], 500 мМ NaCl, 10 мМ MgCl ₂ ) и разрушали обработкой ультразвуком. Лизаты очищали центрифугированием при 30 000 × g в течение 30 мин при + 4 ° C. К супернатантам добавляли 300 мкл смолы His Bind (Novagen), уравновешенной в том же буфере, и позволяли белкам связываться в течение 4 ч при 4 ° C при осторожном перемешивании. Смоле позволяли осесть под действием силы тяжести и промывали 15 мл промывочного буфера (20 мМ трис-HCl [pH 8.0], 500 мМ NaCl, 10 мМ MgCl ₂ , 50 мМ имидазол) и связанные белки элюировали 0,5 мл элюирующего буфера (20 мМ Трис-HCl [pH 8,0], 500 мМ NaCl, 10 мМ MgCl ₂ , 200 мМ имидазол). С каждым образцом смолы проводили четыре последовательных элюирования. Фракции, обладающие максимальной активностью аденилирования (см. Ниже), объединяли, добавляли глицерин до 50% и хранили при -20 ° C до дальнейшего использования. Конечная концентрация белков MccB составляла от 1 до 5 мг / мл. Белки имели чистоту не менее 90%, как было установлено визуальным осмотром перегруженных гелей SDS, окрашенных Кумасси.

In vitro Анализы аденилирования. Реакционные смеси содержали (в 100 мкл) 7,5 мМ трис-HCl (pH 8,0), 5 мМ MgCl ₂ , 4 мМ АТФ (при необходимости), 2,5 мМ TCEP [Трис (2- карбоксиэтил) фосфина гидрохлорид] и соответствующий пептид MccA в концентрации 225 мкМ (использовали концентрацию полноразмерного пептида Synechococcus sp. CC9605, которая была в 10 раз ниже). Реакции инициировали добавлением белка MccB (конечная концентрация 5 мкМ), и реакционные смеси инкубировали при 23 ° C в течение 20 часов.Реакции прекращали, переводя их на –20 ° C.

MALDI-MS и MS / MS анализ. Масс-спектры регистрировали на масс-спектрометре Ultraflextreme с лазерной десорбцией и ионизацией с тандемным временем пролета (MALDI-TOF-ToF), оборудованном Nd-лазером 355 нм). Молекулярные ионы MH + измерялись в режиме отражателя; точность измерения пика моноизотопной массы составляла 50 ppm. Аликвоты (1 мкл) обессоленных реакционных смесей аденилирования смешивали на стальной мишени с 0.5 мкл раствора 2,5-дигидроксибензойной кислоты (Aldrich) (20 мг / мл в 30% MeCN – 0,5% трифторуксусной кислоте [TFA]).

Тест чувствительности in vivo E. coli B дикого типа, Δ yejB или Δ sbmA выращивали в 10 мл бульона M63 с добавлением дрожжевого экстракта при 37 ° C до OD ₆₀₀ ~ 1. 750 мкл клеточной культуры добавляли к 15 мл расплавленного верхнего агара (0,65 г / л агара в бульоне M63), охлажденного до ~ 50 ° C. Смесь выливали на поверхность чашки с агаром LB.После затвердевания агара 10 мкл капель растворов 50 мкМ McC ¹⁰⁹² (используемых в качестве положительного контроля) или реакционных смесей аденилирования (см. Выше) помещали на поверхность планшета и давали им высохнуть. Планшеты инкубировали в течение 4-6 часов при 37 ° C, и зоны ингибирования роста вокруг участков, на которые наносили образцы, определяли визуально.

Приготовление экстракта клеток S30. McC-чувствительная E. coli BW25113 и McC-устойчивое производное Δ ABN без генов pepA , pepB и pepN (5) выращивали в 200 мл LB среды при 37 ° C до тех пор, пока OD ₆₀₀ не достигнет 0.5. Клетки собирали центрифугированием, промывали буфером (20 мМ Трис-HCl [pH 8,0], 10 мМ MgCl ₂ , 100 мМ KCl), ресуспендировали в 4 мл того же буфера с добавлением 1 мМ DTT. , и разрушен ультразвуком. Лизат центрифугировали при 30 000 × g в течение 30 мин при + 4 ° C. Супернатанты (концентрации общего белка 4 и 6 мг / мл для лизатов BW25113 и Δ ABN соответственно) делили на аликвоты по 200 мкл и хранили при -70 ° C до дальнейшего использования.

реакций аминоацилирования тРНК.Экстракты S30 (4 мкл) смешивали с 2 мкл реакционных смесей, в которых было завершено аденилирование (см. Выше), или 0,1 мМ McC ¹⁰⁹² и инкубировали в течение 15 мин для обработки. В этот момент 16 мкл реакционной смеси (30 мМ Трис-HCl [pH 8,0], 30 мМ KCl, 8 мМ MgCl ₂ , 1 мМ DTT, 3 мМ АТФ), 5 мг / мл общей тРНК (тРНК из E coli MRE 600; Roche Diagnostics) и 40 мкМ ¹⁴ C-Asp (6), и реакции продолжались при комнатной температуре в течение 5 мин. Продукты реакции осаждали на фильтрах с холодной трихлоруксусной кислотой (конечная концентрация 10%) и подвергали сцинтилляционному счету.

MccA. Объем 2,5 мкл 5 мМ пептида MRTGNAN и объем 2,5 мкл 5 мМ пептида MDHIGFN смешивали и объединяли с 5 мкл экстракта E. coli BW25113 30S. Реакционные смеси инкубировали в течение 0, 5, 15 и 60 мин при комнатной температуре и останавливали путем объединения 1-мкл реакционных аликвот с 99 мкл 0,5% трихлоруксусной кислоты. Затем реакции непосредственно анализировали масс-спектрометрией.

Анализ последовательности. Последовательности из 2262 полностью секвенированных геномов бактерий и архей, доступных в базе данных Refseq (26) (по состоянию на февраль 2013 г.), были отнесены к суперсемейству ThiF / HesA / MoeB / E1 с помощью программы RPS-BLAST (совпадающие профили для pfam00899 и COG0476 с E значение отсечки 0.01 и с отключенной фильтрацией низкой сложности), как реализовано в поиске в базе данных консервативного домена (27). Программа BLASTClust (28) настроена с отсечкой покрытия длины 0,8 и порогом охвата оценки (битовая оценка, деленная на длину выравнивания) 0,8 использовался для кластеризации. Для каждого кластера была выбрана одна последовательность для дальнейшего анализа. Гены, кодирующие MccB и PaaA, а также все те, которые были экспериментально проанализированы в этой работе, были добавлены к набору последовательностей. Для всех выбранных генов были собраны пять вышестоящих и нижележащих генов для анализа окрестностей генов и присвоены профили, соответствующие профилям в соответствующих базах данных COG (29) и Pfam (30), с использованием программы RPS-BLAST, как указано выше.Программа Position-Specific Iterated (PSI) -BLAST (31) с пороговым значением 0,01 для включения E использовалась для получения гомологов MccB и PaaA, начиная с нескольких запросов. Для каждого запроса гомологи с лучшими оценками собирались до тех пор, пока не был идентифицирован первый ген, соседство которого предполагало его участие в биологических процессах, не связанных с производством микроцина. Кроме того, еще 10 последовательностей, наиболее похожих на те, которые представляют все запросы, взятые вместе, были добавлены в окончательный набор из 60 последовательностей.Для этого набора было построено множественное выравнивание с использованием программы MUSCLE (32) с последующими небольшими ручными исправлениями, и одна неполная последовательность была отброшена. Также измеряли длину области (потенциально соответствующего зажимного домена пептида) перед доменом ThiF / HesA / MoeB / E1. Уверенно выровненные блоки, соответствующие домену ThiF / HesA / MoeB / E1 со 136 информативными позициями, использовали для реконструкции дерева максимального правдоподобия с помощью программы FastTree (33) с параметрами по умолчанию: эволюционная модель JTT, дискретная гамма-модель с 20 категориями скорости.Программа RAxML (34) с матрицей замещения WAG и гамма-распределенными темпами эволюции была использована для того же выравнивания для построения филогенетического дерева для проверки положения внешней группы. Обе программы использовались для расчета соответствующих значений начальной загрузки. Короткие пептиды, кандидаты mccA и , были предсказаны, если они кодируются непосредственно перед соответствующими MccB / PaaA-подобными генами и содержат по крайней мере один остаток аспарагина.

БЛАГОДАРНОСТИ

Мы благодарим всех коллег, предоставивших образцы геномной ДНК, которые использовались в этом исследовании.О. благодарит Евгения Гордиенко за помощь.

Работа в лабораториях К.С. поддержана грантами Программы Президиума РАН по нанотехнологиям и молекулярной и клеточной биологии и грантом Минобрнауки РФ 14.B25.31.0004. Средство MALDI MS стало доступно нам в рамках Программы развития МГУ (PNG 5.13). К. поддерживается внутренними фондами Министерства здравоохранения и социальных служб США (выделенными Национальной медицинской библиотеке).

СНОСКИ

• Получено 13 марта 2014 г.
• Принято 31 марта 2014 г.
• Опубликовано 6 мая 2014 г.

• Авторские права © 2014 Bantysh et al.

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно.Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом.Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу.Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта.Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Крымский государственный медицинский университет. Сотрудники отдела, контакты

Публикации по химии | Химия | Государственный университет Айовы

Следовать

Публикации с 2021 года

PDF

Выявление структуры поверхности нанокристаллов CdSe с помощью твердотельной ЯМР-спектроскопии 77Se и 113Cd с усиленной ядерной поляризацией, Юньхуа Чен, Рик В. Дорн, Майкл П.Ханрахан, Линь Вей, Рафаэль Бломе-Фернандес, Алан М. Медина-Гонсалес, Маркикс А. С. Адамсон, Энн Х. Флинтгрубер, Хавьер Вела и Аарон Дж. Россини

PDF

Energy Spotlight: достижения в области электролита LIB, стабилизации CsPbBr3 в мезопористом кремнеземе и сегрегации галогенидов в смешанных галогенидных перовскитах, Нам-Сун Чой, Хавьер Вела, Джеффри Дюбоз и Прашант В. Камат

PDF

Выяснение местоположения Cd2 + в постсинтетически обработанных квантовых точках InP с использованием динамической ядерной поляризации 31P и 113Cd твердотельной ЯМР-спектроскопии, Майкл П.Ханрахан, Дженнифер Л. Штайн, Найон Парк, Брэнди М. Коссэр и Аарон Дж. Россини

PDF

Нецентросимметричные пниктиды тетрелов RuSi4P4 и IrSi3P3: нелинейные оптические материалы с выдающимся порогом лазерного повреждения, Шеннон Ли, Скотт Л. Карнахан, Георгий Акопов, Филип Йокс, Лин-Лин Ван, Аарон Дж. Россини, Куи Ву и Кирилл Ковнир

PDF

LA-H-цеолиты — эффективные катализаторы для кетонового декарбоксилирования и этерификации уксусной кислоты, Георгиня Митран, Шаоцзян Чен, Вэнью Хуанг и Донг-Кюн Сео

PDF

Наблюдая за трехмерной динамикой металлических комплексов на носителе, Александр Л.Патерсон, Да-Цзян Лю, Уддхав Канбур, Аарон Д. Садоу и Фредерик А. Перрас

PDF

Синтез и характеристика комплексов трис (оксазолинил) борато меди (II) и меди (I), Аарон Дэвид Садоу, Нареш Эедугурала, Жуоран Ван, Уддхав Канбур, Аркадий Эллерн и Марек Пруски

PDF

Локализация источников немигающих точек с помощью обнаружения в моде высшего порядка и оптического гетеродинирования: разработка стратегии расширения области молекулярной визуализации сверхвысокого разрешения, Кайлан Сантра, Вьет Нгуен, Эмили А.Смит, Джейкоб В. Петрич и Сюэюй Сон

PDF

Химия поверхности и структура нанокристаллов коллоидного галогенида свинца перовскита, Сара Р. Смок, Юньхуа Чен, Аарон Дж. Россини и Ричард Л. Брутчи

PDF

Достижения в обнаружении мутаций с использованием изотермической амплификации, опосредованной петлей, Марселино Варона и Джаред Л. Андерсон

PDF

Систематический способ расширить теорию Дебая – Хюккеля за пределы разбавленных растворов электролитов, Тиецзюнь Сяо и Сюэюй Сун

Публикации с 2020 г.

PDF

Цеолит B ‐ MWW: аргументы против одноцентрового катализа, Натали Р.Альтватер, Рик В. Дорн, Мелисса К. Сендехас, Уильям П. Макдермотт, Бриджит Томас, Аарон Дж. Россини и Айв Херманс

PDF

Вольтамперометрия переменного тока на биполярном электроде с визуализацией люминесценции смартфона для определения точки потребности, Роббин К. Ананд, Кира Л. Ран и Тайлер Д. Роудс

PDF

Взаимодействия субстрат-носитель опосредуют гидрирование фенольных соединений наностержнями Pd / CeO2, Йонгсео Ан, Пранджали Найк, Игорь И. Слоуинг и Винченцо Вендитти

PDF

Улучшенное межсистемное пересечение и нестационарная спиновая поляризация электронов в фотовозбужденном пентацен-тритильном радикале, Клаудиа Э.Авалос, Сабина Ришерт, Этьен Сочи, Ганесан Картикеян, Жиль Казано, Габриэле Стеванато, Доминик Дж. Кубицки, Жак Э. Мозер, Кристиан Р. Тиммель, Морено Лелли, Аарон Дж. Россини, Оливье Уари и Линдон Эмсли

PDF

Обзор учебного пособия: Обогащение и разделение нейтральных и заряженных частиц с помощью поляризационной фокусировки концентрации ионов, Беатрис Берзина и Роббин Ананд

PDF

Можно ли использовать селективность ионных жидкостей на основе фосфония в качестве стационарной фазы для обычной газовой хроматографии? Тематическое исследование: использование хлорида тригексил (тетрадецил) фосфония в области ароматизаторов и натуральных продуктов, Сесилия Кальеро, Мария Маццукотелли, Патриция Рубиоло, Арианна Маренго, Стефано Галли, Джаред Л.Андерсон, Барбара Сгорбини и Карло Бикки

PDF

Синтез управляемых интерфейсом перестраиваемых оксидов металлов с шириной запрещенной зоны, Бойс С. Чанг, Эндрю Мартин, Бриджит Томас, Энг Ли, Рик В. Дорн, Джинлонг Гонг, Аарон Дж. Россини и Мартин М. Туо

PDF

Простое изготовление иерархических тандемных катализаторов MOF – металлические наночастицы для синтеза биоактивных молекул, Цзинвэнь Чен, Бийин Чжан, Лун Ци, Юйчэн Пей, Жэньфэн Ни, Патрик М. Хайнц, Сюечен Луан, Цзунби Бао, Цивэй Ян, Цилонг ​​Рен, Чжиго Чжан и Вэнью Хуан

PDF

Рост и стабильность интеркалированных фаз Pb под графеном на SiC, Shaojiang Chen, Patricia A.Тиль, Э. Конрад и Майкл К. Трингидес

PDF

Высокослойная однородность двумерных материалов, неожиданно продемонстрированная широкими характеристиками в поверхностной дифракции электронов, Шен Чен, Майкл Хорн фон Хёген, Патриция А. Тиль, Адам Камински, Бенджамин Шранк, Танассис Спелиотис, Эдвард Генри Конрад и Майкл К. Трингидс

PDF

Поверхностная оконечность квантовых точек перовскита CsPbBr3, определенная методом твердотельной ЯМР-спектроскопии, Юньхуа Чен, Сара Р.Смок, Энн Х. Флинтгрубер, Фредерик А. Перрас, Ричард Л. Брутчи и Аарон Дж. Россини

PDF

Интерметаллические нанокатализаторы из гетеробиметаллической группы 10–14 Прекурсоры пиридин-2-тиолата, Carena L. Daniels, Megan Knobeloch, Philip Yox, Marquix A.S. Адамсон, Юньхуа Чен, Рик В. Дорн, Хао Ву, Гоцюань Чжоу, Хуацзюнь Фань, Аарон Дж. Россини и Хавьер Вела

PDF

Идентификация краевого окончания расслоенных гексагональных нанолистов из гексагонального нитрида бора с помощью твердотельной ЯМР-спектроскопии и расчетов методом плоской волны методом DFT, Rick W.Дорн, Мэтью Дж. Райан, Тэ-Хун Ким, Тиан Вей Го, Патрик М. Хайнц, Линь Чжоу, Вэнью Хуанг и Аарон Дж. Россини

PDF

Гибридные термофильные / мезофильные ферменты раскрывают роль конформационного нарушения в регуляции бактериального фермента I, Рошель Р. Дотас, Транг Т. Нгуен, Чарльз Э. Стюарт мл., Родольфо Гирландо, Давит А. Потоян и Винченцо Вендитти

PDF

«Surface Contrast» ЯМР показывает невинную роль носителя в катализируемом Pd / CeO2 гидрировании фенола, Тимоти К.Эгнер, Пранджали Наик, Йонсо Ан, Амрит Венкатеш, Аарон Дж. Россини, Игорь И. Замедление и Винченцо Вендитти

PDF

Распознавание аллелей между циркулирующими фрагментами опухолевой ДНК с помощью анализа мультиплексной КПЦР, содержащего обогащенные ДНК магнитно-ионные жидкости, Миранда Н. Эмаус и Джаред Л. Андерсон

PDF

: основы методологии пробоподготовки, текущие достижения и будущие усилия, Миранда Н. Эмаус, Марселино Варона, Дерек Эйцманн, Шу-Ан Сие, Виктория Р.Зегер и Джаред Л. Андерсон

PDF

Определение олефиновой селективности и стабильности солей серебра в ионных жидкостях с помощью обратной газовой хроматографии, Филип Эор, Донхён Рю, Хе Нан и Джаред Л. Андерсон

PDF

Улучшенная динамика наноструктур на Au (111) с адсорбированным S из-за образования комплекса Au-S, Джеймс У. Эванс, Питер М. Сперджен, Да-Цзян Лю, Тереза ​​Л. Виндус и Патриция А. Тиль

PDF

Глубинные эвтектические растворители в разделениях: методы получения, полярность и применение в экстракциях и капиллярной электрохроматографии, Мухаммад Камар Фарук, Набиль Муджтаба Аббаси и Джаред Л.Андерсон

PDF

Разъяснение роли донора и акцептора водородной связи в сольватации в глубоких эвтектических растворителях, образованных солями аммония / фосфония и карбоновыми кислотами, Мухаммад Камар Фарук, Габриэль А. Одугбеси, Набил Муджтаба Аббаси и Джаред Л. Андерсон

PDF

Никель-бориды лития: эволюция слоев MBene под давлением лития, Владимир Гвоздецкий, Ян Сунь, Синь Чжао, Гураб Бхаскар, Скотт Л. Карнахан, Колин П. Хармер, Фэн Чжан, Ракель А.Рибейро, Пол К. Кэнфилд, Аарон Дж. Россини, Кай-Чжуан Ван, Кай-Мин Хо и Юлия В. Заикина

PDF

Структура поверхности линейных нанопор в аморфном диоксиде кремния: сравнение свойств для различных алгоритмов образования пор, Йонг Хан, Игорь И. Замедление и Джеймс У. Эванс

PDF

Адсорбция, интеркаляция, диффузия и адгезия Cu на поверхности 2H-MoS2 (0001) из расчетов из первых принципов, Йонг Хан, Майкл К. Трингидес, Джеймс У.Эванс и Патрисия А. Тиль

PDF

Масс-спектрометрическая визуализация скрытых отпечатков пальцев с использованием проявочного порошка оксида титана в качестве существующей матрицы, Пейдж Хиннерс и Янг Джин Ли

PDF

Неравновесный рост металлических кластеров на слоистом материале: Cu на MoS2, Dapeng Jing, Ann Lii-Rosales, King C. Lai, Qiang Li, Jaeyoun Kim, Michael C. Tringides, James W. Evans и Patricia A. Тиль

PDF

N-концевое слияние N-концевого домена бактериального фермента I облегчает рекомбинантную экспрессию и очистку человеческих РНК-деметилаз FTO и Alkbh5, Balabhadra Khatiwada, Jeffrey Purslow, Eric S.Ундербакке и Винченцо Вендитти

PDF

Изменение формы усеченных нанокубов из палладия: энергетический и кинетический анализ с интеграцией просвечивающей электронной микроскопии с атомистическим и крупнозернистым моделированием, Кинг К. Лай, Минда Чен, Бенджамин Уильямс, Йонг Хан, Чиа-Куанг Цунг, Венью Хуанг и Джеймс В. Эванс

PDF

Поиск инкапсуляции платины, серебра и золота на поверхности графита, Энн Лии-Розалес, Юн Хан, Дапенг Цзин, Майкл К.Трингидс и Патрисия А. Тиль

PDF

Формы нанокристаллов Fe, инкапсулированных на поверхности графита, Энн Лии-Розалес, Йонг Хан, Скотт Э. Жюльен, Оливье Пьер-Луи, Дапенг Цзин, Кай-Так Ван, Майкл К. Трингидс, Джеймс У. Эванс и Патриция А. . Тиль

PDF

Структура наложений халькогена на Au (111): теория функционала плотности и моделирование решеточного газа, Да-Цзян Лю, Джеймс У. Эванс, Питер Сперджен и Патриция А. Тиль

PDF

Кинетика функционализации мезопористых наночастиц диоксида кремния: влияние на распределение групп на поверхности, адсорбцию и катализ, J.Себастьян Манзано, Синь Ван, Такеши Кобаяши, Пранджали Найк, Кинг К. Лай, Джеймс У. Эванс и Игорь I. Замедление

PDF

Макромасштабный контроль реактивности с использованием материалов, напечатанных на 3D-принтере с внутренними каталитическими свойствами, Дж. Себастьян Манзано, Синь Ван, Лонг Ци и Игорь И. Замедление

PDF

Химия поверхности тройных нанокристаллов: разработка осаждения проводящих пленок NaBiS2, Алан М. Медина-Гонсалес, Брайан А. Росалес, Умар Х. Хамде, Мэтью Г.Пантани и Хавьер Вела

PDF

Регулирование каталитической активности наночастиц Pd путем удержания в упорядоченных мезопористых носителях, Пранджали Найк, Пуранджан Чаттерджи, Шаоцзян Чен, Вэнью Хуанг и Игорь I. Замедление

PDF

Аллостерический карман для ингибирования бактериального фермента I, идентифицированный с помощью скрининга фрагментов на основе ЯМР, Транг Т. Нгуен и Винченцо Вендитти

PDF

Трехмерное профилирование OLED с помощью лазерной десорбционной ионизации и масс-спектрометрии, Эндрю Э.Полсон, Тревор Т. Форсман и Янг Джин Ли

PDF

Полномасштабное Ab Initio моделирование динамической ядерной поляризации, вращающейся под магическим углом, Фредерик А. Перрас, Мураликришна Раджу, Скотт Л. Карнахан, Думан Акбарян, Адри К. Т. ван Дуин, Аарон Россини и Марек Пруски

PDF

Силы делокализации спина, поляризации и лондонской дисперсии управляют образованием бирадикальных пимеров, Джошуа П. Петерсон, Аркадий Эллерн и Артур Х. Винтер

PDF

Чувствительные к растворителю радикальные димеры, Джошуа П.Петерсон и Артур Х. Винтер

PDF

Прямое фотовыпускание спиртов из борноалкилированных каркасов BODIPY Photocages, Джули А. Петерсон, Логан Дж. Фишер, Элизабет Дж. Германн, Прадип Шреста, Дин Юань, Чамари С. Виджесурия, Эмили А. Смит и Артур Х. Винтер

PDF

Многоволновое управление смесями с использованием фотокамер, поглощающих видимый свет, Джули А. Петерсон, Дин Юань и Артур Х. Винтер

PDF

Тонкости структуры и состава производных Sr / Ca (AuxAl1-x) типа NaZn13 (12-13), Joyce Pham, Andriy Palasyuk, Gordon J.Миллер

PDF

Аномальные электронные свойства йодных материалов: применение к высокоскоростным реактивным промежуточным продуктам и сопряженным полимерам, Юньфань Цю и Артур Винтер

PDF

Последние достижения в биполярных электрохимических методах анализа, Кира Л. Ран и Роббин К. Ананд

PDF

Силицен, силоксен или силикан? Выявление структуры и оптических свойств кремниевых нанолистов, полученных из дисилицида кальция, Брэдли Дж.Райан, Майкл П. Ханрахан, Юджи Ван, Уткарш Рамеш, Чарльз К.А. Ньямекье, Рэйни Д. Нельсон, Чжиян Лю, Чуанкун Хуанг, Беван Уайтхед, Джиганг Ван, Люк Т. Ролинг, Эмили А. Смит, Аарон Дж. Россини и Мэтью Г. Пантани

PDF

Слабое связывание с РНК A2RE укрепляет RRM hnRNPA2 и снижает разделение и агрегацию жидкой фазы, Вероника Х. Райан, Скотт Уоттерс, Джошуа Амайя, Балабхадра Хативада, Винченцо Вендитти, Мандар Т. Найк и Николас Л. Фавзи

PDF

Библиотека органогелей для ЯМР-анализа растворов суспензий наночастиц в неводных образцах, Сергей Л.Сединкин, Ёнсео Ан, Пранджали Найк, Игорь И. Замедление и Винченцо Вендитти

PDF

Эффективные фотокадры BODIPY, поглощающие дальний / ближний ИК-диапазон, путем блокирования непродуктивных конических пересечений, Прадип Шреста, Комадхи К. Диссанаяке, Элизабет Дж. Германн, Чамари С. Виджесурия, Атри Мукхопадхай, Эмили А. Смит и Артур Винтер

PDF

Сужение спектра сопровождается повышенным пространственным разрешением в насыщенном когерентном антистоксовом рамановском рассеянии (CARS): сравнение эксперимента и теории, Авинаш Сингх, Калян Сантра, Сюэю Сонг, Джейкоб В.Петрич и Эмили А. Смит

PDF

Основы динамики поверхности золота (111): укрупнение двумерных островов золота, Питер М. Сперджен, Кинг К. Лай, Йонг Хан, Джеймс У. Эванс и Патриция А. Тиль

PDF

Высокоселективное окрашивание и количественная оценка внутриклеточных липидных капель с помощью компактного пушпульного флуорофора на основе бензотиадиазола, С. Исраэль Суарес, Кэролайн К. Уорнер, Хизер Браун-Хардинг, Андреа М. Тоофт, Бретт ВанВеллер и Джон К. Лукеш III

PDF

Молекулярное распознавание на границах раздела минералов: последствия для обогащения редкоземельных руд, Джонатан Э.Саттон, Сантану Рой, Ажад У. Чоудхури, Лили Ву, Анна Ванхала, Нуван Де Силва, Санта Янсоне-Попова, Бенджамин П. Хэй, Майкл С. Чешир, Тереза ​​Л. Виндус, Эндрю Г. Стек, Александра Навроцки, Брюс А. . Мойер, Бенджамин Даути и Вячеслав Сергеевич Брянцев

PDF

Каталитический апциклинг полиэтилена высокой плотности с помощью технологического механизма, Акаланка Теннакун, Сюнь Ву, Александр Л. Патерсон, Смита Патнаик, Ючен Пей, Энн М. Лапуант, Салаи К. Аммал, Райан А. Хаклер, Андреас Хейден, Игорь И. .Замедление, Джеффри У. Коутс, Массимилиано Делферро, барон Петерс, Венью Хуанг, Аарон Д. Садоу и Фредерик А. Перрас

PDF

Извлечение сорбента с помощью вакуума: аналитическая методология определения ультрафиолетовых фильтров в пробах окружающей среды, Мария Трухильо-Родригес, Джаред Л. Андерсон, Сейдж Дж. Б. Данэм, Виктория Л. Ноад и Дэниел Б. Кардин

PDF

Подавление спиновой диффузии 1H в быстрых протонах MAS детектировало гетероядерную корреляцию в твердотельных ЯМР-экспериментах, Амрит Венкатеш, Иван Хунг, Касуни С.Ботеджу, Аарон Д. Садоу, Питер Л. Горьков, Чжэхонг Ган и Аарон Дж. Россини

PDF

Диполярная гетероядерная многоквантовая когерентная твердотельная спектроскопия ЯМР с устранением t1-шума, Амрит Венкатеш, Сюечен Луан, Фредерик А. Перрас, Иван Хунг, Венью Хуанг и Аарон Россини

PDF

Функционализация поверхности черного фосфора нитренами: идентификация связей P = N с использованием изотопной маркировки, Кендал Вальц Митра, Кристин Х. Чанг, Майкл П.Ханрахан, Цзяин Ян, Даниэль Тофан, Уильям М. Холден, Ниранджан Говинд, Джеральд Зайдлер, Аарон Дж. Россини и Александра Велиан

PDF

Органолантановые катализаторы на кремниевой основе для расщепления связей C – O в эпоксидах, Чжоран Ван, Смита Патнаик, Нареш Эедугурала, Дж. Себастьян Манзано, Игорь И. Слоуинг, Такеши Кобаяши, Аарон Д. Садоу и Марек Пруски

PDF

Ni2P-модифицированные Ta3N5 и TaON для фотокаталитического восстановления нитратов, Лин Вэй, Маркикс Адамсон и Хавьер Вела

PDF

Мягкое и селективное гидрирование нитрата до аммиака в отсутствие благородных металлов, Лин Вэй, Да-Цзян Лю, Брайан А.Росалес, Джеймс У. Эванс и Хавьер Вела

PDF

Быстрое получение протонно-детектируемых твердотельных ЯМР-спектров четырехполюсных ядер HETCOR и быстрое измерение длин NH-связей с помощью частотно-селективных импульсных последовательностей HMQC и RESPDOR, Анурадха В. Виджесекара, Амрит Венкатеш, Брайан Дж. Лампкин, Бретт Ванвеллер, Джозеф В. Любач, Картик Нагапуди, Иван Хунг, Петр Л. Горьков, Чжэхонг Ган и Аарон Дж. Россини

PDF

Перемешивание металлов с усиленной деформацией в многослойных наноструктурах ядро ​​– оболочка с контролируемой формой: к формованным интерметаллидам, Бенджамин П.Уильямс, Эллисон П. Янг, Илектра Андони, Юн Хан, Вей-Шан Ло, Мэтью Голден, Джейн Ян, Лиан-Мин Лю, Чун-Хун Куо, Джеймс В. Эванс, Вэнью Хуанг и Чиа-Куанг Цунг

PDF

Прямой синтез скелета фенантровиридона с использованием высокорегиоселективной нитрохиноновой реакции Дильса – Альдера, Хуанчао Ю, Элли Фоут, Тереза ​​Л. Виндус и Джордж А. Краус

PDF

На пути к водородной экономике: селективный гидрогенолиз гваякола при атмосферном давлении водорода, Хуэй Чжоу, Синь Ван, Аарон Д.Садов, Игорь Иванович. Замедление

PDF

Магнитно-ионные жидкости как растворители для экстракции и сохранения РНК, Чэнхуэй Чжу, Марселино Варона и Джаред Л. Андерсон

Публикации с 2019 года

PDF

Эффективный масштабируемый синтез гинкголевых кислот, Джошуа Л. Альтерман и Джордж А. Краус

PDF

Сопряжение электронных и генетических схем, Роббин К. Ананд и Кира Л. Ран

PDF

Стратегии учеников по отслеживанию взгляда для решения задач стехиометрии, включающих диаграммы природы частиц, John Y.Балуют и Томас А. Холм

PDF

Определение размера клеточного кластера с помощью диэлектрофоретического захвата на массиве беспроводных электродов разной длины, Джозеф Т. Бановец, Мин Ли, Даршна Пагария, Сунгу Ким, Баскар Ганапатисубраманиан и Роббин Ананд

PDF

Непрерывная мицеллярная электрокинетическая фокусировка нейтральных частиц, обусловленная концентрационной поляризацией ионов, Беатрис Берзина и Роббин К. Ананд

PDF

Наносекундный временной сдвиг спектров фотолюминесценции органических свинцово-галогенидных перовскитов выявляет структурные особенности, обусловленные избытком органического галогенида аммония, Уджал Бхаттачарджи, Лонг Мен, Хан Май, Дэниел Фреппон, Эмили А.Смит, Хавьер Вела и Джейкоб В. Петрич

PDF

Открытие фото- и термической стабильности нанокристаллов перовскита галогенида цезия-свинца, Бретт В. Боте, Химаши П. Андарараччи, Брайан А. Росалес, Рафаэль Блом-Фернандес, Фэн Чжу, Малинда Д. Райхерт, Калян Сантра, Цзинчже Ли, Джейкоб В. Петрич, Хавьер Вела и Эмили А. Смит

PDF

Визуальная вольтамперограмма на массиве закрытых биполярных электродов в лестничной конфигурации, Янис С. Борчерс, Ольга Риусек, Эрик Расмуссен и Роббин К.Ананд

PDF

Стратегии снятия защиты тиоимидатов во время твердофазного синтеза пептидов Fmoc: безопасный путь к тиоамидам, Луис А. Камачо III, Йен Х. Нгуен, Джон Тернер и Бретт Ван Веллер

PDF

Высокопольная динамическая ядерная поляризация MAS с использованием радикалов, созданных γ-облучением, Скотт Л. Карнахан, Амрит Венкатеш, Фредерик А. Перрас, Джеймс Ф. Уишарт и Аарон Дж. Россини

PDF

Магнитные ионные жидкости на основе комплексов переходных металлов с N-алкилимидазольными лигандами, Deepak Chand, Muhammad Qamar Farooq, Arjun Pathak, Jingzhe Li, Emily A.Смит и Джаред Л. Андерсон

PDF

Аллильное окисление олефинов с металлоорганическим каркасом на основе марганца, Цзинвэнь Чен, Минда Чен, Бийинг Чжан, Ренфэн Ни, Ао Хуанг, Тянь Вей Го, Александр Волков, Чжиго Чжан, Цилонг ​​Рен и Вэнью Хуанг

PDF

Влияние наноограничения и конформационной подвижности на молекулярный импринтинг поперечно-сшитых мицелл, Кайцян Чен и Ян Чжао

PDF

Кинетика, энергия и размерная зависимость превращения Pt в упорядоченные интерметаллические наночастицы PtSn, Минда Чен, Йонг Хан, Тиан Вей Го, Ронг Сун, Рагху В.Малигал-Ганеш, Ючэн Пей, Чиа-Куанг Цунг, Джеймс В. Эванс и Вэнью Хуанг

PDF

Парадокс дифракции: необычно широкий дифракционный фон отмечает высококачественный графен, Шен Чен, Майкл Хорн-фон Хёген, Патрисия А. Тиль и Майкл К. Трингидес

PDF

Максимизация нагрузки ионно-меченых олигонуклеотидов на магнитно-ионные жидкие носители для последовательной экстракции нуклеиновых кислот, Кевин Дэвид Кларк, Ченгуэй Чжу и Джаред Л.Андерсон

PDF

Гетеробиметаллические прекурсоры из одного источника: трамплин для синтеза бинарных интерметаллидов, Карена Л. Дэниэлс, Дейни Л. Мендивелсо-Перес, Брайан А. Росалес, Ди Ю, Сумит Саху, Дж. Стюарт Джонс, Эмили А. Смит, Франсуа П. Габбаи и Хавьер Вела

PDF

Исследование микроструктуры поли (циклосилана) методом твердотельной ЯМР спектроскопии 29Si и расчетов методом DFT, Рик В. Дорн, Эрик А. Марро, Майкл П. Ханрахан, Ребекка С.Клаузен и Аарон Россини

PDF

На пути к масс-спектрометрической визуализации в масштабе метаболизма: увеличение метаболического покрытия за счет множественных химических модификаций тканей, Мария Эмилия Дуэньяс, Эван А. Ларсон и Янг Джин Ли

PDF

Концентрация специфичного для последовательности фрагмента KRAS из плазмы с использованием меченых ионами олигонуклеотидов, связанных с qPCR-совместимыми магнитно-ионными жидкими растворителями, Миранда Н. Эмаус, Марселино Варона и Джаред Л.Андерсон

PDF

Селективная гибридизация и захват ДНК KRAS из плазмы и крови с использованием ионно-меченных олигонуклеотидных зондов, связанных с магнитными ионными жидкостями, Miranda N. Emaus, Chenghui Zhu и Jared L. Anderson

PDF

Синтетический контроль стабильности фотолюминесценции галогенорганических перовскитов, Дэниел Дж. Фреппон, Лонг Мен, Уджал Бхаттачарджи, Брайан А. Розалес, Фен Чжу, Джейкоб В. Петрич, Эмили А. Смит и Хавьер Вела

PDF

Ответ на «Комментарий к« Теоретическому предсказанию кинетики кристаллизации переохлажденной жидкости Леннарда-Джонса »» [J.Chem.Phys. 151, 017101 (2019)], К. Г. С. Гунавардана и Сюэю Сун